流行性感冒(influenza)是一种由流感病毒引起的急性上呼吸道传染病^[3]。近年来流感的大流行主要由甲型流感病毒引起，而烷胺类药稳操胜券是最常用的抗病毒药物^[5]，为了解浙江绍兴地区季节性甲型流感病毒对烷胺类药物的耐药情况，本研究对绍兴地区分离出的184份流感病毒样本，进行M2病毒基因片段分析，现将结果报告如下。 对象与方法

(1)对象:于2010年1月—2013年1月，选择浙江省绍兴市人民医院呼吸内科及发热门诊患者体温≥38 ℃且有上呼吸道感染迹象者，共计924例。847份提出病毒总mRNA质量、浓度符合后续检测要求^[6]，最中甲型流感病毒阳性的184份，甲3型H3N2亚型171份。(2)主要仪器与试剂：MDCK细胞，流感标准抗原和抗血清(美国典型培养物保藏中心)；病毒RNA提取使用QIAamp @ Viral RNA Mini Kit标准试剂盒(德国QIAGEN 公司)，三步法使用RT-PCR TIANscript RT Kit试剂盒(北京天根生物有限责任公司)，PCR扩增仪为Applied Biosystems 7500型号(美国ABI公司)。(3)方法:采用MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0试剂盒提取病毒RNA并逆转录为cDNA，操作方式完全遵照说明书进行。(4)统计分析：采用DNAstar及Mega4.1软件完成数据分析。选取NCBI GeneBank数据库中参比株(CY033639A/New York/55/2004)的M2基因耐药位点片段作为参考株。 结 果

(1)流感监测季的甲型H3N2流感流行株耐药位点分析：171份H3N2病毒阳性的病例样本中，170例毒株的M2蛋白跨膜耐药位点发生了一个及一个以上的错义突变，占总数的96.77%。有151例发生S31N突变，9例发生V27A突变，6例 同时发生了S31N与V27A突变，另外5例发生A29T和S31N两个位点的突变。(2)甲型流感病毒M2基因氨基酸序列进化分析：分子进化图谱显示2010—2013年期间连续4个流感监测季的甲型毒株M2基因呈现出2不同的个进化分支。其中分支A主要为2010—2012时间段内的毒株，与Abris-bane/10/2007毒株相近；而分支B则主要来源于2012—2013时间段内的毒株，与A/Perth/16/2009毒株相近。 讨 论

本研究结果表明，H3N2毒株所占比例基本答合省内^[7]及国内^{[8, 9, 10]}2010年以来的相关报道。本研究表明，绍兴171份H3N2病毒样本中，170例M2蛋白跨膜耐药位点发生了一个或更多的突变。表明目前绍兴地区甲型H3N2病毒均产生了耐药性。进化树分析显示，M2基因有两个分支，其中分支A主要为2010—2012时间段内的毒株，与Abris-bane/10/2007相近；而分支B则主要是2012—2013时间段内的毒株，与A/Perth/19/2009相近；表明这两个监浊季的甲型H3N2毒株基因在来源上有差异。