黄芪甲苷为中药黄芪的有效成分之一，具有提高免疫力、抗炎抗氧化、抗自由基、降血糖血脂，心血管保护等广泛的药理作用^{[1, 2, 3]}。黄芪甲苷可通过抑制氧化应激反应，抑制肝星型细胞增生，抑制肝脏的纤维化，从而发挥对肝脏的保护作用^[4]。在小鼠肝脏缺血再灌注损伤的模型中，黄芪甲苷的预处理可抑制炎症反应，抑制核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)通路的活化，预防肝脏缺血再灌注损伤的发生^[5]。而黄芪甲苷是否对免疫性肝损伤具有保护作用，目前尚不明确，本研究以卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)和脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的大鼠肝损伤为模型，观察黄芪甲苷对大鼠免疫性肝损伤的保护作用，结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 实验动物

SD大鼠60只,雌雄各半，体重180～200 g，由辽宁医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCKK(辽)2009—0004。 1.2 主要试剂

黄芪甲苷(成都曼斯特生物科技有限公司)，BCG注射液(成都生物制品研究所)；LPS(美国sigma公司)；谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(asparate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 1.3 分组与处理

60只大鼠随机分为对照组；模型组(BCG+LPS)；黄芪甲苷(20、40、80 mg/kg)组和联苯双酯(150 mg/kg)组。模型组、黄芪甲苷组及联苯双酯组大鼠尾静脉注射2.5 mg BCG，对照组大鼠尾静脉注射等体积生理盐水，同时黄芪甲苷和联苯双酯组大鼠给予相应黄芪甲苷或联苯双酯，连续灌胃10 d，1次/d。10 d 后，除对照组外，其余各组大鼠经尾静脉注射LPS 7.5 μg/只，禁食12 h后进行各项指标测定。 1.4 指标与方法 1.4.1 肝脏和脾脏指数测定

称量各组大鼠个体体重，摘眼球采血后脱颈处死大鼠，迅速解剖，称取脾脏和肝脏重量，以大鼠脾重/体重和肝重/体重(mg/10 g)作为肝脏和脾脏指数。 1.4.2 肝组织病理观察

取肝脏组织迅速固定于4%甲醛中，石蜡包埋。石蜡横断面连续切片5~6 片，厚度约5 μm，切片常规脱蜡脱水,常规苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，普通光学显微镜观察肝脏组织病理改变。 1.4.3 大鼠血清各生化指标测定

按试剂说明书操作测定各组大鼠血清中AST、ALT、TNF-α、IL-6、SOD、MDA含量。 1.5 统计分析

实验数据均以x±s表示，采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析及最小显著差法进行组间两两比较，P<0.05为差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 黄芪甲苷对大鼠脏器指数和转氨酶活性影响(表 1)

与对照组比较，模型组大鼠肝、脾脏指数、血清 ALT，AST 活性明显升高；与模型组比较，40、80 mg/kg黄芪甲苷组和联苯双酯组大鼠肝、脾指数、血清 ALT，AST 活性降低，呈一定剂量依赖性。

表 1

表 1 黄芪甲苷对大鼠脏器指数和转氨酶影响(x±s,n=10) 组别(mg/kg) 肝脏指数 脾脏指数 ALT(U/L) AST(U/L) 正常 245±21.2 25±2.2 31±5.1 41±7.6 模型 362±25.5a 48±3.3a 190±16.1a 197±14.1a 黄芪甲苷 20 322±22.3 39±2.7 138±14.7 146±14.3                  40 289±26.3b 35±2.1b 84±11.6b 89±12.1b                  80 264±22.2bc 26±3.3bc 38±8.4bc 39±13.3bc 联苯双酯 274±24.3b 26±2.8b 39±9.7b 48±12.1b 注：与对照组比较：a P<0.01；与模型组比较：b P<0.01；与40 mg/kg黄芪甲苷组比较：c P<0.05。

表 1 黄芪甲苷对大鼠脏器指数和转氨酶影响(x±s,n=10)

对照组大鼠肝组织结构清晰，以中央静脉为中心肝细胞呈放射状排列，胞浆深染，汇管区无炎性细胞侵润；模型组中央静脉周围肝细胞肿胀变性，多处坏死，大量炎细胞浸润；而80 mg/kg黄芪甲苷和联苯双酯组可明显改善大鼠肝细胞损伤状态。

图 1

注：A：对照组；B：模型组；C：80 mg/kg黄芪甲苷组；D：联苯双酯组。 图 1 免疫性肝损伤大鼠肝组织病理形态学观察(HE，×200)

与对照组比较，模型组大鼠血清 TNF-α、IL-6水平、MDA含量明显升高，而SOD活性降低；40、80 mg/kg黄芪甲苷和联苯双酯可降低TNF-α、IL-6水平和MDA含量，增加SOD活性。

表 2

表 2 黄芪甲苷对大鼠SOD、 MDA 、TNF-α、IL-6影响(x±s,n=10) 组别(mg/kg) SOD(U/mgprot) MDA(nmol/mgprot) TNF-α(pg/ml) IL-6(pg/ml) 正常 113.3±10.3 10.3±1.9 24±3.2 121±10.5 模型 72.2±9.8a 25.3±2.8a 60±4.2a 289±12.8a 黄芪甲苷 20 76.6±8.4 22.5±2.2 45±2.5 243±13.8                  40 89.3±7.5b 17.8±3.1b 35±3.6b 193±14.8b                  80 108.1±8.3bc 14.2±2.9bc 26±1.5bc 139±13.8bc 联苯双酯 98.4±7.2b 15.3±3.4b 28±2.9b 146±10.1b 注：与对照组比较，a P<0.01；与模型组比较，b P<0.01；与40 mg/kg黄芪甲苷组比较，c P<0.05。

表 2 黄芪甲苷对大鼠SOD、 MDA 、TNF-α、IL-6影响(x±s,n=10)

各种有害因素所致肝损伤的防治目前仍是一个全球性课题，通过建立实验性肝损伤动物模型，筛选保肝药物，具有十分重要的意义^[6]。目前BCG/LPS 诱导的肝损伤模型是免疫性肝损伤较为成功的模型。BCG刺激活化 T淋巴细胞的增殖，使其释放TNF-α、IL-6等炎症因子，参与免疫应答的调节和炎症反应。TNF-α 是引起急慢性肝损伤的重要因素之一，可激活T、B淋巴细胞，增加自然杀伤细胞的杀伤能力，还可诱导TNF-α本身及IL-1、IL-6 和 IL-8 等细胞因子的大量分泌，介导肝细胞功能受损，加重肝功损害。

MDA是脂质过氧化最终产物，其含量与脂质过氧化反应呈正比;SOD能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤，其含量的高低可反映机体清除氧自由基的能力。本研究结果显示，BCG/LPS诱导的肝损伤模型中，肝功敏感指标AST、ALT活性升高，肝脏、脾脏指数增加，TNF-α、IL-6水平、MDA含量增加，SOD活性降低；黄芪甲苷不仅能降低AST、ALT 活性，降低脏器指数，同时降低TNF-α、IL-6水平与MDA含量，增加SOD活性。提示黄芪甲苷对免疫性肝损伤具有一定保护作用，且这种保护所用可能与黄芪甲苷的抗炎抗氧化活性有关。