明日叶(ashitaba)，又名长寿草，属芹科多年生草本植物，原产地日本八丈诸岛。据文献报道，明日叶中的活性成分查尔酮(chalcone)，其化学结构为1，3-二苯基丙烯酮，属黄酮类化合物，具有抗肿瘤、抗氧化、抗糖尿病等多种生物学功效^{[1, 2]}。本研究采用高脂饲料喂养加链脲佐菌素腹腔注射制备大鼠2型糖尿病模型，经口灌胃不同剂量明日叶查尔酮，观察大鼠血糖、胰岛素、氧化应激和胰岛细胞损伤等指标，探讨明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠氧化应激水平的影响，结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 实验动物

清洁级健康雄性Wistar大鼠60只(山东鲁抗医药实验中心)，6~8周龄，体重180~200 g，许可证号：SCXK(鲁)2009-0007。高脂饲料(北京华阜康生物科技股份有限公司)。 1.2 主要试剂与仪器

明日叶查尔酮(ashitaba chalcone，AC)由青岛大学医学院营养所卫生毒理学实验室制备，纯度>90%。查尔酮标准品(纯度>99%)、链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)(美国sigma公司)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、总抗氧化能力(total antioxidative capacity，T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所)，氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司)，碘^[125I]胰岛素放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所)。RT-6000酶标分析仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司)，XDS-1B型倒置显微镜、DP72型图像采集设备(日本OLIMPUS公司)。 1.3 糖尿病大鼠模型制备

将60只雄性Wistar大鼠适应性喂养1周后随机选取10只为对照组，其余动物采用高脂饲料联合腹腔注射STZ方法诱发2型糖尿病，STZ剂量为15 mg/kg，自第2周开始注射，1次/周，连续3周。末次注射后2 d空腹血糖值高于16.7 mmol/L判定为糖尿病。 1.4 分组与处理

将造模成功的40只糖尿病大鼠随机分为4组，糖尿病模型组(蒸馏水)、AC 30、10、5 mg/kg组，每组10只。在高脂饲料喂养基础上，每天经口灌胃给予AC。对照组给予普通饲料并经口灌胃蒸馏水。各组动物自由进食进水，连续4周。在末次灌胃后禁食12 h，尾尖采血测定空腹血糖。全部动物经腹腔注射 7%水合氯醛麻醉后，腹主动脉采血并分离血清和迅速分离胰腺组织备检。 1.5 指标及检测 1.5.1 血糖和血清胰岛素测定

血糖用葡萄糖氧化酶法，取尾尖血用血糖仪测定；血清胰岛素用放免法测定，参照试剂盒说明书操作。按照以下公式计算胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index，ISI)，ISI=ln[1/(空腹血糖浓度×空腹胰岛素浓度)]^[3]。 1.5.2 血清SOD、MDA、T-AOC、ox-LDL测定

SOD用黄嘌呤氧化酶法；T-AOC用菲林比色法；MDA用硫代巴比妥酸比色法；ox-LDL用ELISA法，均参照试剂盒说明书操作。 1.5.3 胰腺组织病理学观察

胰腺组织经4%多聚甲醛溶液固定24 h，常规石蜡包埋,切片，厚度5 μm。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色、封片,光镜下观察胰岛细胞形态，细胞膜完整性，细胞核大小形态和细胞数量。 1.6 统计分析

实验数据用x±s表示，应用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析，组间比较采用q检验，检验水准α=0.05。 2 结 果 2.1 AC对大鼠血糖、血清胰岛素、ISI影响(表 1)

与对照组比较，糖尿病模型组大鼠空腹血糖、血清胰岛素均升高，胰岛素敏感指数降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与糖尿病模型组比较，AC 30 mg/kg组大鼠空腹血糖和血清胰岛素含量降低，而胰岛素敏感性升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表 1

表 1 各组大鼠空腹血糖和血清胰岛素浓度变化(x±s，n=10) 组别(mg/kg) 血糖(mmol/L) 胰岛素(mU/L) ISI 对照组 4.59±1.63 25.70±2.33 -4.71±0.36 糖尿病模型组 17.30±3.57a 38.28±4.97a -6.46±0.29a AC组 5 17.05±3.20ac 37.85±5.02a -6.42±0.18a           10 13.91±3.15ab 37.04±5.44a -6.21±0.27a           30 7.00±2.55bc 29.50±5.31bc -5.30±0.27abc 注：与对照组比较，a P<0.05；与糖尿病模型组比较，b P<0.05；与AC 10 mg/kg组比较，c P<0.05。

表 1 各组大鼠空腹血糖和血清胰岛素浓度变化(x±s，n=10)

与对照组比较，糖尿病模型组大鼠血清MDA、ox-LDL水平明显升高，SOD及T-AOC水平明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与糖尿病模型组比较，AC 30 mg/kg组大鼠血清MDA、ox-LDL水平降低，而SOD及T-AOC则升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表 2

表 2 各组大鼠SOD、MDA、T-AOC、ox-LDL 水平比较(x±s，n=10) 组别(mg/kg) MDA(nmol/mL) T-AOC(U/mL) SOD(U/mL) ox-LDL(ng/mL) 对照组 8.94±0.43 12.79±1.80 332.88±45.51 14.90±2.45 糖尿病模型组 12.00±1.32a 7.24±1.27a 241.72±21.67a 23.05±2.87a AC组 5 11.86±1.10a 7.43±2.03ac 248.32±32.28a 22.86±2.16ac           10 11.23±1.27a 9.56±2.51ab 262.56±38.62a 16.27±2.41b           30 9.96±0.65bc 9.80±1.13ab 295.79±51.30b 15.36±1.70b 注：与对照组比较，a P<0.05；与糖尿病模型组比较，b P<0.05；与AC 10 mg/kg组比较，c P<0.05。

表 2 各组大鼠SOD、MDA、T-AOC、ox-LDL 水平比较(x±s，n=10)

对照组大鼠胰岛呈圆形或椭圆形细胞团，境界清晰，胰岛数量较多，胰岛细胞分布均匀，结构清晰呈索状排列，细胞核大小均匀呈圆形，胞浆丰富 (图 1A)。糖尿病模型组可见胰岛萎缩，胰岛数目减少，体积明显缩小，形态不规则，边界不清，胰岛内细胞数量减少，排列松散，细胞形态不一，胞浆出现空泡，细胞核固缩、核溶解(图 1B)。与糖尿病模型组比较，AC 30 mg/kg组胰岛病变较轻，胰岛体积增大，岛内细胞数目增多，细胞排列趋于规整 (图 1C)，但AC 10 mg/kg组改变不明显(图 1D)

图 1

图 1 AC对大鼠胰腺组织细胞病理结构影响(HE，×400)

本研究结果表明，与对照组比较，糖尿病模型组大鼠空腹血糖和胰岛素均明显升高，胰岛素敏感性降低，表明2型糖尿病大鼠模型诱发成功；与糖尿病模型组比较，AC 30 mg/kg组大鼠空腹血糖和胰岛素均降低，而胰岛素敏感性升高，提示AC可降低2型糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平,提高胰岛素的敏感性。

糖尿病的发生发展与氧化损伤密切相关，从而产生明显的氧化应激^{[4, 5]}。MDA和ox-LDL含量是反应脂质过氧化程度的重要指标，SOD和总T-AOC可表明机体抗氧化酶活性和抗氧化能力^{[6, 7, 8]}。本研究结果显示，AC 30 mg/kg组大鼠血清MDA和ox-LDL含量较糖尿病模型组下降，而SOD活力和T-AOC增强,表明AC可提高2型糖尿病大鼠抗氧化能力,降低脂质过氧化水平。胰腺是对氧化应激最为敏感的组织，2型糖尿病存在胰岛β细胞损伤^[9]。本研究胰腺组织光镜观察结果显示，AC可减轻2型糖尿病大鼠的胰岛萎缩，胰岛及岛内细胞数量减少等病变，与上述抗氧化损伤结果呈现一致性。