在防治细菌性疾病方面，抗生素发挥了巨大的作用，使得许多疾病得到有效控制和彻底治疗。常用抗生素的耐药菌株逐年增加，成为烧伤临床工作中面临的严峻问题。尽管新型抗生素不断问世，但重度烧伤感染仍然是烧伤患者死亡的主要原因之一。为将烧伤感染性疾病的发病率和病死率降低，合理使用抗菌药物，减少或避免滥用，阻止和延缓细菌耐药的发生，临床开展早期预防性应用抗菌药物极为重要。本研究对2011年11月—2012年4月在武警辽宁省总队医院收治的87例烧伤患者创面分泌物标本进行细菌分离培养及药物敏感试验，定期对烧伤患者创面进行细菌学调查与分析，以了解细菌的分布和耐药动向、为合理选择抗菌药物提供参考依据。现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本来源

标本取自2011年11月—2012年4月武警辽宁省总队医院收治的87例烧伤住院患者，根据烧伤患者发热、白细胞增高、创面分泌物及创面加深等判定为创面感染。用无菌棉拭子取患者创面的分泌物作为标本。 1.2 主要仪器与试剂

ATB全自动细菌鉴定仪(型号为VITEK2，法国生物梅里埃公司)，Biobas生物洁净安全柜(型号为3SC-1500ⅡA2-X，济南鑫贝西生物技术有限公司)，电热恒温箱(型号为申光DNP-9132，上海跃进医用光学器械厂)，普通光学显微镜(日本Olympus公司)，游标卡尺(沈阳市第二量具厂)；伊红美蓝琼脂、药敏用M-H 琼脂(杭州天和微生物试剂有限公司)，ID32GN革兰氏阴性杆菌鉴定试剂条、ID32STAPH葡萄球菌鉴定试剂条(法国生物梅里埃公司)，药敏纸片：亚胺培南(IPM)、阿米卡星(AN)、环丙沙星(CIP)、头孢他啶(CAZ)、头孢吡肟(FEP)、哌拉西林(PIC)、庆大霉素(GM)等(英国Oxoid药敏纸片，赛默飞世尔科技公司)。 1.3 方法

(1)分离培养：菌种分离培养按照《全国临床检验操作规程》^[1]进行。将无菌棉拭子所取标本分别涂布于血琼脂平板和伊红美蓝平板，于37 ℃恒温箱中培养24 h。(2)细菌初步鉴定：采用革兰染色法对平板上菌落染色，光学显微镜下观察结果(革兰阳性球菌为紫色球形，革兰阴性杆菌为红色棒状或长形)。进一步鉴定需结合生化反应，G⁺球菌需做凝固酶实验，G^-杆菌需做氧化酶、氧化发酵和靛基质实验。(3)细菌鉴定：采用ATB全自动细菌鉴定仪进行菌种鉴定。(4)药敏试验：采用K-B纸片扩散法^[2]。M-H结果判定按CLSI/NCCLS2009年标准化^[3]进行。质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922；铜绿假单胞菌ATCC27853；金黄色葡萄ATCC25923。 1.4 统计分析

采用Excel 2003软件对数据进行整理分析。 2 结 果 2.1 烧伤病房患者创面分泌物细菌谱

从烧伤患者创面分泌物中共分离获得细菌156株，其中革兰阴性杆菌100株，占64.1%，革兰阳性球菌56 株，占35.9%。在革兰阴性杆菌中，铜绿假单胞菌检出率最高，共检出45株，占28.8%，其次为克雷伯菌12株，占7.6%，其他细菌分离率较低，依次分别为醋酸钙不动杆菌10株，6.41%，奇异变形杆菌9株，5.77%，大肠埃希菌7株，4.49%。在革兰阳性球菌中，金黄色葡萄球菌检出率最高，共检出44株，28.2%，其次为肠球菌11株，7.05%，表皮葡萄球菌1株，0.64%。 2.2 烧伤患者创面常见菌株的药敏试验结果(表 1、2)

对分离率较高的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌分别进行了药物敏感试验，结果显示，铜绿假单胞菌对头孢吡肟的耐药率高达91.1%，对亚胺培南的耐药率达86.7%，而对哌拉西林的敏感率达24.4%。金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率为97.7%，对红霉素的耐药率为95.5%，而对万古霉素的敏感率为100.0%。

表 1

表 1 铜绿假单胞菌的药敏试验结果 抗菌药物 菌株数 耐药菌 株数 耐药率 (%) 敏感菌 株数 敏感率 (%) 头孢吡肟(FEP) 45 41 91.1 4 8.9 亚胺培南(IPM) 45 39 86.7 6 13.3 庆大霉素(GM) 45 39 86.7 6 13.3 头孢哌酮(CFP) 45 38 84.4 7 15.6 阿米卡星(AKN) 45 38 84.4 7 15.6 环丙沙星(CIP) 45 37 82.2 8 17.8 头孢他啶(CAZ) 45 37 82.2 8 17.8 哌拉西林(PIP) 45 34 75.6 11 24.4

表 1 铜绿假单胞菌的药敏试验结果

表 2

表 2 金黄色葡萄球菌的药敏试验结果 抗菌药物 菌株数 耐药菌 株数 耐药率 (%) 敏感菌 株数 敏感率 (%) 青霉素(P) 44 43 97.7 1 2.3 红霉素(E) 44 42 95.5 2 4.5 苯唑西林(OX) 44 40 90.9 4 9.1 环丙沙星(CIP) 44 40 90.9 4 9.1 克林霉素(CM) 44 39 88.6 5 11.4 磺胺甲恶唑(SXT) 44 17 38.6 27 61.4 氯霉素(C) 44 2 4.5 42 95.5 万古霉素(VA) 44 0 0.0 44 100.0

表 2 金黄色葡萄球菌的药敏试验结果

皮肤烧伤破坏了机体的天然屏障，使机体免疫功能受到抑制，易发生包括非致病菌在内的各种细菌的严重感染，从烧伤开始至晚期残留创面修复为止，均存在感染的可能^[4]。铜绿假单胞菌含有多种酶、溶血素和血管通透因子等，侵袭性很强。一旦其感染创面可侵袭焦痂，甚至侵入到痂下活组织，并在其中生长、繁殖，重者可播至全身，是重度烧伤侵袭性感染的重要致病菌。金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，是最常见的化脓菌之一，在烧伤创面感染中，所占比率也最高。

本研究药敏试验结果显示，铜绿假单胞菌对头孢类、β-内酰胺类和氨基糖甙类药物的耐药率大部分>85%。由于革兰阴性杆菌能产生超广谱β-内酰胺酶，导致其对第三代头孢菌素产生耐药性^{[5, 6]}。以往研究显示亚胺培南对铜绿假单胞菌感染治疗比较有效，本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率也高达86.7%，可能与多年使用碳青霉烯类抗生素，从而筛选出由质粒传递的金属β-内酰胺酶有关，也可能与细菌外膜Porin D2 缺乏及通透性改变有关^[7]。细菌生物膜在铜绿假单胞菌感染中广泛存在，是导致抗菌治疗失败的重要原因之一^[8]。金黄色葡萄球菌的高耐药率主要与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)菌株的增加有关，可达到80% ~90%^{[9, 10]}。从抗生素耐药情况来看，细菌对青霉素类、大环内酯类和喹诺酮类药物的耐药率均＞90%，表明针对该细菌这几类抗生素已难生效。本研究细菌对磺胺甲恶唑和氯霉素尚比较敏感，临床上可以酌情使用。目前对MRSA的感染，唯一的选择是万古霉素治疗，因为该菌对万古霉素的敏感率依然是100%，但是目前已有对万古霉素的耐药菌株出现^[11]。因此，如何缓解金黄色葡萄球菌的耐药情况值得深思。

综上所述，在烧伤病房的细菌谱中，铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌仍然是主要优势病原菌，而且其耐药性已相当高。因此，临床医务工作者和微生物实验室工作人员，必须引起高度重视，认真做好细菌药敏试验，加强细菌耐药性监测，对临床合理使用抗生素具有十分重要的参考价值^[12]。