A群轮状病毒是引起全球婴幼儿严重腹泻的重要病原之一,<5岁儿童几乎均感染过轮状病毒,在世界范围内每年约有61万名儿童因轮状病毒腹泻而死亡^[1]。因轮状病毒无特效药，因此发展疫苗成为控制感染的首要措施,而其变异性直接关系到疫苗的治疗效果,所以了解中国轮状病毒基因流行情况对疫苗研制具有重要意义^[2]。为了解新疆乌鲁木齐市轮状病毒基因型别的分布特点和流行规律，为今后病原学研究、腹泻病防制以及疫苗研发提供依据，对2012年1—12月乌鲁木齐市第一人民医院300份婴幼儿腹泻粪便标本进行轮状病毒抗原检测和G/P基因分型研究，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料

采集2012年1—12月间在乌鲁木齐市第一人民医院就诊住院的0~60月龄婴幼儿腹泻患儿粪便标本300份，每份样本5 mL。患者平均年龄为11.25月龄。腹泻诊断标准^[3]:每日排便＞3次,且大便性状发生明显改变(包括稀水样、蛋花样、粘液样或稀糊样等)。 1.2 方法 1.2.1 轮状病毒抗原检测

采用酶联免疫(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法进行轮状病毒抗原检测。使用ProSpect Rotavirus Kit(96 Tests)试剂盒(丹麦Oxoid公司)，检测步骤严格按照试剂盒说明书进行。 1.2.2 轮状病毒分子分型

ELISA检测阳性的标本,用逆转录－聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)法进行G/P基因分型。核酸提取盒为Viral Nucleic Acid Extraction kit Ⅱ试剂盒(台湾Geneaid公司)，RT-PCR扩增选用QIAGEN one step RT-PCR Kit试剂盒(德国Qiagen公司)，具体操作方法见产品说明书。扩增条件和使用的引物参照文献^[4]。扩增产物在2%琼脂糖凝胶上100 V电压电泳60 min，根据特异性核酸条带大小判断G/P基因型。 2 结 果 2.1 轮状病毒检测结果

2012年共检测婴幼儿腹泻粪便标本300份，检出轮状病毒抗原阳性标本131份，阳性率为43.7%。 2.2 轮状病毒G基因型分布(图 1)

在G分型中，G9型70例，占所有G分型的53.44%，为优势流行株；G2型23例，占17.56%；G3型17例，占12.98%；G1型13例，占9.92%；G型混合感染共8例，G1+G9检出3例，G2+G9检出2例，G1+G9检出3例，共占6.11%。

图 1

注：M:100 bp Marker;1、3、4:G9型;2、8:G2型;5:G1型;6、7、10:G3型;9:G1+G9型。 图 1 部分标本G分型PCR产物电泳结果

P分型中同时检测到3种基因型，其中P^[8]型96例，占所有P分型的73.28%，占绝对优势；其次为P^[4]型27例，占20.61%；P^[6]型1例，占0.76%；P^[4]+P^[8]型混合感染共7例，占5.34%。 2.4 轮状病毒G/P基因型组合

2012年G9P^[8]型是最常见的G/P组合，共64例，占48.85%；其次为G2P^[4]型，共23例，占17.56%；G3P^[8]型、G1P^[8]型和混合感染型分别有16、13和12例，占12.21%、9.92%和9.16%；检测出不常见的G9P^[4]型2例，G9P^[6]型1例，共占2.29%。 3 讨 论

中国自1982年有轮状病毒分型资料以来，总体以G1型为主要流行株，2001年后,G3型取代G1型成为中国优势流行株^[5]。近年来G9型检出有明显增长趋势^{[6, 7]}，但国内大部分地区仍以G1和G3型为主要流行株^[8]。乌鲁木齐地区2007年主要优势株为G1型^[9]，2010年转变为G3型^[10]，而2012年结果显示G9型已取代G3型成为流行株，表明该地区流行优势毒株发生了从G3到G9的漂移。本次研究中还显示G2型而不是G3型成为该地区仅次于G9型的第二大优势毒株，反映了轮状病毒毒株流行多样性、复杂性的特征。混合感染中主要以G9与G1、G2、G3型混合感染为主，这有可能是G9型在混合感染中与G1、G2、G3型发生基因重组导致的。G4型是世界范围内轮状病毒常见的流行型别，但本研究中未检测到G4型，和国内其他地区轮状病毒流行监测结果基本一致^[11]，提示G4型不是国内轮状病毒的主要流行型别。相对轮状病毒G型别流行的多样性，本研究中P^[8]基因亚型仍占P型别流行的绝对优势，P^[4]型次之，与其他地区报道基本一致^[12]。2012年乌鲁木齐地区G基因型和P血清型组合中除检出常见的基因型之外，也发现了少见的G9P^[4]、G9P^[6]基因型组合和混合感染情况，提示轮状病毒型别流行的多样性和基因重配的发生。本次研究显示，G9在乌鲁木齐地区已经取代G3型成为新的流行毒株，提示在全国范围内长期、持续监测轮状病毒流行趋势的重要性，这也为有效的疫苗研制提供重要参考。