登革热是由登革病毒引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊与白纹伊蚊传播，广泛流行于热带和亚热带地区。广东是中国唯一一个经历登革病毒1～4型流行的地区^〔1〕。在一个地区不同血清型或同一血清型中不同基因型的登革病毒流行可能是登革出血热/登革休克综合征(dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome，DHF/DSS)发生的重要原因之一，了解深圳市龙岗区自然界登革病毒的型别对预防DHF/DSS 的发生具有重要的意义。本研究于2009—2011 年对深圳市龙岗区进行系统、连续的虫媒生物监测、成蚊携带登革病毒监测、健康人群登革病毒抗体水平监测，旨在为登革热的流行风险评估提供客观依据。现将结果报告如下。

2011 年10 月采用横断面调查方法随机抽取龙岗区3 个街道，从每个街道随机抽取2 家工厂，以16～60 岁、在深圳居住≥5 年、未曾患有登革热的健康工人为调查对象。于2009—2011 年对龙岗区内的龙城、龙岗、布吉等7 个街道以及区内21 个大运场馆室内外周边环境进行监测，共布放诱蚊灯1 598 盏。

根据小规模预实验的结果，分16～25、26～35、36～45 和46～60 岁4 个年龄组，每个监测点每个年龄组抽取38人。抽取调查对象静脉血2 mL 应用间接酶联免疫方法检测登革病毒IgG 抗体，试剂盒由中山生物工程有限公司生产(批号: 20110411)，严格按照说明书操作。定性判断标准以临界值= 0.15 + 阴性对照均值，样品A 值大于临界值为阳性。

统一采用诱蚊灯捕获法，对监测点每月定时定人开展蚊种构成、成蚊密度〔成蚊密度(只/灯)= 捕获蚊虫数/灯数〕的调查; 2009—2010 年6—10 月，以入户及外环境调查法测定公园、居民区、医院、工地、学校、场馆共6 个不同生境的布雷图指数(Bretu index，BI)、房屋指数(housing index，HI)、容器指数(container index，CI); 采用诱蚊诱卵器法测定不同生境的诱蚊诱卵指数，诱蚊诱卵指数= 阳性诱蚊诱卵器数/回收诱蚊诱卵器数× 100%^〔2〕。

以同地点、同种属捕获的成蚊为一批，每批30～50 只进行低温研磨^〔3〕，收集研磨上清悬液，按照TAKARA 公司RNAiso Plus Kit 的说明书对其进行核酸提取。参照文献〔4〕方法，采用Primer Premier 5.0 软件，针对C 基因区域设计引物，由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成纯化。C 基因引物序列为: DN-F: CAA TAT GCT GAA ACG CGA GAG AAA，DN-R: CCC CAT CTA TTC AGA ATC CCT GCT，扩增片段为171 bp。将RNA 逆转录为cDNA，采用PrimeScript RT-PCR Kit(中国大连宝生物工程有限公司)，严格按照说明书操作。 SYBR GreenⅠ实时荧光PCR 扩增cDNA，按照 SYBR Premix Ex Taq(tm)II Kit(中国大连宝生物工程有限公司)说明书操作。每批标本平行检测3 次，以Ct 值＜38(标准株稀释10-7)、扩增曲线呈 “S”形为阳性且熔解曲线峰型单一的原则判断结果。英潍捷基(上海)贸易有限公司对阳性扩增产物进行测序。利用NCBI BLASTn 对测序结果进行同源性检索。

采用Excel 2003 对数据进行整理分析，采用SPSS 17.0 软件进行χ² 检验分析不同年龄、性别间差异，P＜0.05 为差异有统计学意义。

龙岗区共捕获成蚊25 556 只，分别是按蚊属中的中华按蚊、微小按蚊、嗜人按蚊; 库蚊属中的三带喙库蚊和致倦库蚊; 伊蚊属中的东乡伊蚊和白纹伊蚊。其中，致倦库蚊为优势蚊种，占93.77%(23 962/25 556)，东乡伊蚊占_2.45%(637/25 556)，白纹伊蚊占1.60%(408/25 556)$ ，三带喙库蚊占1.50%(385/25 556)。

2009 年3 月—2010 年1 月对6 种不同生境共布放诱蚊灯158 盏，捕获成蚊2 362 只，平均成蚊密度为14.95 只/灯。其中医院成蚊密度最高，达27.67 只/灯，其他依次为工地25.45 只/灯、场馆12.70 只/灯、居民区12.69 只/灯、学校4.11 只/灯、公园3.41 只/灯。

图 1

图 1 2009—2010 年容器指数(CI)

图 2

图 2 2009—2010 年布雷图指数(BI)

图 3

图 3 2009—2010 年房屋指数(HI)

2009 年6 月监测点的容器指数(HI)与布雷图指数(BI)最高，分别为40.98 与106.33; 而2010 年9 月HI 和BI 最低，分别为13.49 与16.25。2009 年7 月，房屋指数(CI)最高，为40.71; 而2010 年5 月CI 最低，为15.56。

2009—2010 年共布诱蚊诱卵器1 120 个，回收892 个，阳性91 个，平均诱蚊诱卵指数为10.20%。学校和工地的诱蚊诱卵指数均高于平均水平，分别为18.34% 和11.29%; 其他生境类型监测结果分别为: 医院4.79%(7/146)、公园7.41%(10/135)、居民区8.57%(12/140)。

参考王佃鹏等^〔5〕建立的 SYBR Green I 实时荧光RT-PCR 检测登革病毒基因方法，对登革病毒1～4 个血清型标准株进行预实验。共检测混合成蚊标本350 批，白纹伊蚊7 批与东乡伊蚊9 批中各有1 批为阳性，编号分别为 SZ1007BW(白纹伊蚊，采自龙岗街道)和SZ1007DX(东乡伊蚊，采自龙城街道)，其他批次均为阴性。 SZ1007DX 的Ct 值为(34.66 ± 2.12)，Tm 值为83.5℃; SZ1007BW 的Ct 值为(35.73 ± 0.22)，Tm 值为83.5℃，琼脂糖电泳检测均在171 bp 的位置出现特异性扩增带。

2.6 核苷酸序列分析(图 4)

图 4

图 4 SZ1007BW 扩增序列与DEN-2 MD1366(FM210234.2)的比对结果

应用GenBank 数据库的Blast 功能进行同源性检索，显示SZ1007BW 扩增序列与分离于越南的DEN-2 MD1366(Accession NO.FM210234.2)相似性达98%，判断其为DENV-2型病毒。

共采集健康体检工人血样884 人份，登革病毒IgG 抗体阳性率为4.20%(37/ 884)。16～25、26～35、36～45 和46～60岁4个年龄组抗体阳性率分别为0.54%(2/373)、3.85%(7/182)、5.97%(12/201)和12.5%(16/128)，不同年龄组血清登革病毒IgG 抗体差异有统计学意义(χ²=36.100，P＜0.05); 男性登革病毒IgG 抗体阳性率为3.63%(15/413)，女性为4.67%(22/471)，不同性别血清登革病毒IgG 抗体阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)。

自1978 年广东省佛山市暴发登革热流行以来，广东省登革热的流行主要以输入或输入引起的传播为主^{〔6, 7〕}。有研究指出，疫情的暴发不排除是由本地病例引起的^〔8〕，病毒可能通过“伊蚊- 人- 伊蚊” 的乡村型循环与隐性感染者的流动形成的城市型循环模式^〔1〕得以保存，并在适当条件引起暴发。本研究结果显示，龙岗区以致倦库蚊为优势蚊种，伊蚊成蚊数量只占4.05%，但伊蚊带毒率较高，达12.5%(2/16)。SZ0107BW 标本测序结果与登革病毒II 型流行株同源性最高，这与近年广东多次流行 DENV-2 型的情况一致^〔9〕。白纹伊蚊能经卵传递登革II 型病毒，并可传≥4 代(1 代约30 d)，传代中病毒毒力有增强的趋势^〔10〕，而龙岗区伊蚊传播登革病毒效能较高，提示病毒可能通过自然循环而存在。2008 年龙岗区曾有3 例输入性登革热病例^〔11〕，直至2011 年10 月无登革热病例报告，SZ1007BW 和 SZ1007DX 标本均采自2010 年，因此排除伊蚊携带的登革病毒来自2008 年的输入性病例，推断病毒来自隐性感染人群或伊蚊平行、垂直的传递。健康人群登革病毒IgG 抗体监测阳性率为4.20%，提示登革病毒可能通过乡村型与城市型循环在本区低水平传播。2010 年测定的布雷图指数(BI)、房屋指数(HI)、容器指数(CI)较2009 年测定的指数低，这可能与迎大运消杀四害工作开展有关系。而学校与工地的诱蚊诱卵指数较高，应将其作为下阶段防治伊蚊工作的重点。应加强对不同生境防蚊、灭蚊的力度，落实居民预防登革热教育的推广工作，严防输入性登革热病例，积极监测本辖区自然界登革病毒的循环状况，全面评估登革热流行的风险。