弓形虫病是由刚地弓形虫感染引起的一种人兽共患寄生虫病，孕妇感染后，可导致流产、早产、死胎或妊娠并发症增加，也会影响到胎儿，导致其先天性发育异常或智力障碍等，属于重大公共卫生问题^{[1, 2, 3, 4]}。因此，关注弓形虫病对育龄期妇女影响以及研究其发生机制意义深远。本研究观察了79 例复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion，RSA) 妇女弓形虫感染情况以及外周血和蜕膜组织液中相关细胞因子表达水平变化，并与45 名同期行人工流产未感染弓形虫的妇女检测结果进行比较，现将结果报告如下。

2010 年1-12 月到山东省济南市中心医院妇产科就诊妇女为调查对象。RSA 纳入标准^[5]: (1) 连续发生> 2 次自然流产; (2) 育龄期妇女; (3) 生殖内分泌激素测定和基础体温检测正常; (4) 男方精液常规检查正常; (5) 夫妇双方染色体检查正常。排除标准: 自身免疫性疾病患者。RSA 组共入选79 例，年龄21 ～ 36 岁，平均(28.14 ± 6.75) 岁，孕龄8 ～14 周，平均(12.08 ± 3.16) 周。对照组选取同期来门诊就诊的正常早孕并人工流产妇女45 人，年龄20 ～34 岁，平均年龄(27.59 ± 5.28) 岁，孕龄 7 ～15 周，平均(12.15 ± 2.47) 周，对照组均无自然流产史，纳入条件与RSA 组纳入标准的(2) 、(3) 、 (4) 、(5) 以及排除标准相同。

应用酶联免疫法 (ELISA) 检测弓形虫特异性抗体lgG、IgM，诊断试剂盒(浙江省医学科学院寄生虫病研究所) ，严格按照试剂盒说明书操作。弓形虫感染诊断标准: 新近感染为弓形虫IgM (+) 、IgG (+) 或IgM (+) 、 IgG(-) ; 既往感染为弓形虫IgM(-) 、IgG(+) ; 未感染为弓形虫IgM(-) 、IgG(-) 。

(1) 外周血标本采集: 抽取空腹肘静脉血 4 mL，离心后分离血清，保存于-20 ℃ 冰箱备检; (2) 蜕膜组织标本采集: 采集流产时蜕膜组织 50 mg，以冷生理盐水冲洗，制备组织匀浆，离心后取上清液，-20 ℃保存备用。(3) 外周血及蜕膜组织液中白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2) 、白细胞介素-4(interleukin-4，IL-4) 、白细胞介素-10 (interleukin-10，IL-10) 和干扰素-γ (interferon gamma，IFN-γ) 浓度测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测方法，试剂盒由深圳晶美生物技术公司提供，严格按说明书进行操作。

采用SPSS 10.0 软件进行统计分析，数据用x±s 表示，2 组间计量指标比较采用t 检验，计数资料比较采用χ² 检验，P < 0.05 代表差异有统计学意义。

RSA 组外周血IgG 阳性例数和IgG 阳性率为22 例(27.85%) ，明显高于人工流产组的5 例(11.11%) ，差异有统计学意义(χ² = 4.710; P < 0.01) ，RSA 组外周血IgM 阳性例数和IgM 阳性率为10 例(12.66%) ，明显高于人工流产组的2 例 (4.44%) ，差异有统计学意义(χ² = 2.113; P < 0.05) 。

表 1

表 1 RSA 新近感染与人工流产未感染妇女外周血相关细胞因子表达水平比较(x±s)

表 1 RSA 新近感染与人工流产未感染妇女外周血相关细胞因子表达水平比较(x±s)

2 组对象外周血相关细胞因子表达水平比较，RSA 新近感染组外周血IL-2 和IFN-γ 表达水平明显高于人工流产未感染妇女，而IL-4 和IL-10 表达水平则明显低于后者(P 均< 0.01) 。

表 2

表 2 RSA 新近感染与人工流产未感染妇女蜕膜组织中相关细胞因子表达水平比较(x±s)

表 2 RSA 新近感染与人工流产未感染妇女蜕膜组织中相关细胞因子表达水平比较(x±s)

RSA 新近感染与人工流产未感染妇女蜕膜组织中相关细胞因子表达水平比较，RSA 新近感染妇女蜕膜组织液中IL-2 和 IFN-γ 表达水平明显高于人工流产未感染妇女，而IL-4 和IL-10 表达水平则明显低于后者(P 均<0.01) 。

本研究结果表明，自然流产组的IgG 和IgM 阳性率均明显高于人工流产组，提示RSA 育龄期妇女有较高的弓形虫感染率，与国内外其他同类报道^{[4, 6, 7]}相似。RSA 机制复杂，免疫因素是其中重要机制之一，常态下，妊娠期母体趋向于Th2 型细胞因子表达为主的体液免疫，使胎儿免受排斥。弓形虫感染后，抗原诱导孕妇体内Th1 型细胞因子表达水平加强，并体现Thl 型优势，排斥胚胎，发生 RSA^{[8, 9, 10, 11]}。本研究中将RSA 组和对照组进一步细分为RSA 弓形虫新近感染者和同期早孕并行人工流产终止妊娠未感染2 组，结果显示RSA 弓形虫感染组外周血和蜕膜组织液IL-2 和IFN-γ 表达水平明显增加，IL-4 和IL10 浓度则明显下降。这些细胞因子变化数据支持RSA 弓形虫新近感染妇女外周血和母-胎界面中免疫平衡状态遭遇破坏，存在着 Th1 优势表达及免疫排斥功能异常。一些近期同类临床及动物实验研究^{[12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19]}得出接近的观察结论。

近年来国内涉及弓形虫感染细胞免疫相关研究进展较快，但大多数实验结果数据来自于动物和细胞株的培养，有关人体特别是孕妇弓形虫感染后体内细胞免疫变化还报导较少。弓形虫感染引发孕妇母-胎界面中相关细胞因子表达水平异常以及 RSA 妇女体内免疫平衡失调可能是RSA 发病机制之一。