随着抗生物药物广泛应用，微生物耐药性已成为全球关注的热点问题^[1]。近年来，从天然植物特别是药用植物中寻找纯天然抗生物药物已成为研究热点^[2]。没食子酸(galic acid，GA) 是自然界中广泛存在的一种多酚类化合物^[3]。有研究表明，没食子酸具有止血、抗炎、抗突变、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、 杀锥虫等多种生物学活性^{[4, 5]}。有研究证实其为多种植物的抑菌有效活性成分之一，体外对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌菌有一定的抑制作用^{[6, 7]}。为较全面研究没食子酸的抑菌作用，本研究测定没食子对几种常见菌种的抑制作用，为相关天然抑菌药物的开发提供科学依据。

没食子酸(分析纯，美国Sigma 公司) ; 青霉素、头孢他啶、两性霉素B(华北制药有限公司) 。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 、大肠埃希菌(Escherichia coli) 、肠炎沙门菌 (Salmo nella enteritidis) 、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium) 、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus) 、白色念珠菌(Candida albicans) (吉林大学基础医学院病原微生物学教研室) 。

琼脂培养基、沙氏培养基 (上海信然生物技术有限公司) ; 其他试剂均为国产分析纯。BJHA-PYC30 CO₂ 恒温培养箱(北京中西远大科技有限公司) ; LS-30CA 高压蒸气灭菌锅(上海绿宇生物科技有限公司) 。

采用纸片法^{[8, 9]}测定没食子酸对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒杆菌及白色念珠菌的抑制作用。

(1) 定性试验样品纸片制备: 用适量灭菌生理盐水稀释青霉素、头孢他啶、两性霉素 B，作为阳性对照。准确制备浓度为20 mg /mL 的没食子酸溶液，置于80 ℃的恒温水浴锅中溶解。将准备好的灭菌空白滤纸圆片充分浸于没食子酸溶液、 生理盐水和3 种阳性对照样品中，浸泡30 min，取出后置于无菌平皿中，无菌条件下自然晾干备用。 (2) 初次最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC) 筛选试验样品纸片制备: 按(1) 方法制备筛选纸片，没食子酸浸泡浓度分别为30、20、10、 5、2 mg /mL。(3) 二次MIC 筛选试验样品纸片制备: 按(2) 方法制备筛选纸片，没食子酸浸泡浓度分别为2.5、1.0、0.75、0.5 mg /mL。

分别将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、蜡样芽孢杆菌、 白色念珠菌实验菌传代3 次后，用无菌生理盐水制备成菌浓度为1 × 10⁸ 个/mL 的实验菌悬液，相当于 0.5 麦氏比浊管。

分别取各种实验菌悬液各 0.2 mL，细菌加入营养琼脂培养基平板，真菌加入沙氏培养基平板，营养琼脂培养基置37 ℃ 培养 24 h，沙氏培养基置32 ℃培养24 h，观察实验结果。

营养琼脂培养基置 37 ℃培养24 h，沙氏培养基置32 ℃培养24 h。同样的方法平行测试3 次。观察实验结果。(2) 二次 MIC 筛选: 将二次MIC 筛选试验样品纸片按初次 MIC 方法处理和培养。观察实验结果。MIC 计算参照文献 [8, 9]。

没食子酸对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌抑菌环直径依次为9.00、7.50、8.50、9.45 mm，阳性对照组中青霉素对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌抑菌环依次为32.00、18.00 mm; 头孢他啶对大肠埃希菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的抑菌环依次为36.00、39.50、 37.00 mm; 两性霉素对白色念球菌的抑菌环直径为 15.00 mm，阳性对照效果良好，表明实验结果比较可靠，没食子酸对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌均有较好的抑制作用。

表 1

表 1 不同浓度没食子酸初次MIC 筛选试验抑菌环直径(mm)

表 1 不同浓度没食子酸初次MIC 筛选试验抑菌环直径(mm)

表 2

表 2 不同浓度没食子酸二次MIC 筛选试验抑菌环直径(mm)

表 2 不同浓度没食子酸二次MIC 筛选试验抑菌环直径(mm)

结果表明，没食子酸对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌均有一定的抑制作用，但对白色念珠菌、蜡样芽孢杆菌无抑制作用。初次、二次MIC 筛选结果表明，没食子酸对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌的MIC 分别为1、 5、10、< 0.5 mg /mL，且随着没食子酸溶液浓度增大，抑菌圈直径增大。

本研究结果表明，没食子酸对6 个菌种中的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的抑菌环直径分别为9.0、7.5、8.5、9.45 mm; 经过初次MIC 筛选、二次MIC 筛选，得到没食子酸对以上4 个菌种的最小抑菌浓度分别为1、5、 < 0.5、10 mg /mL，表明没食子酸对其均有抑制作用。高伦江^[6]研究结果表明，没食子酸对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等均有一定的抑菌作用，与本研究结果一致。刘延麟^[7]研究表明，没食子酸对金黄色葡萄球菌和白色念球菌均有一定的抑制作用。汪长中等^[10]研究表明，没食子酸对体外白色念珠菌生物膜有较强的抑制作用。而本研究结果并未证实没食子酸对白色念球菌有抑制作用，原因可能是所采用的抑菌试验方法不同而产生的偏差。本研究证实没食子酸具有一定的抑菌效果，尤其对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌抑菌效果较好，表明进一步充分开发其药物价值有一定意义。但没食子酸具体抑菌种类及其抑菌机制等有待进一步研究。