化妆品的安全问题不容忽视，市场调查时常会发现化妆品违法违规添加现象^[1]。补骨脂(Psoralea corylifolia L．) 是常用中药，属化妆品中的禁用组分，在祛斑、美白等产品中也有违规添加现象，对使用者健康构成潜在危害^[2]。因此，建立化妆品中补骨脂的检测方法，对于化妆品监督管理及维护消费者的健康和权益都有重要意义。本研究拟通过对化妆品中补骨脂多种特征成分检测，实现对化妆品中补骨脂的定性测定。

Agilent 1200 高效液相色谱系统(美国安捷伦公司) ; AB135-S 型十万分之一分析天平(瑞士梅特勒公司) ; WH-861 型涡旋混合器 (上海和勤分析仪器有限公司) ; SB-5200D 型超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司) ; TG16-II 型高速离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司) 。补骨脂对照药材、补骨脂素(纯度≥99%) 、异补骨脂素(纯度≥99%) (中国药品生物制品检定院) ; 新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮(上海源叶生物科技有限公司，纯度≥98%) ; 乙腈、甲醇(美国 Fisher 公司，色谱纯) ; Milli-Q 超纯水; 其他试剂均为分析纯。

色谱柱: Venuil C18 柱(100 mm × 4.6 mm，3 μm) 。流动相: 乙腈(A) ，0.1%醋酸水溶液(B) ，梯度洗脱程序: 0 ～ 2 min，60%B; 2 ～ 12 min，60% ～ 30%B; 12 ～ 15 min，30% ～ 10%B。流速: 1.0 mL /min。柱温: 30 ℃。进样量: 10 μL。检测波长: 246 nm。

本实验对主要含有香豆素类成分的多种常用植物(药材) 包括前胡、白芷、当归、 川芎、羌活、独活、蛇床子、佛手、化橘红、茵陈及补骨脂、补骨脂提取物等进行检测。结果表明，除补骨脂和补骨脂提取物外，其他植物(药材) 均不会同时含有补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮，可以认为补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮是补骨脂的特征成分。

称取化妆品试样0.5 g(精确至 1 mg) ，置10 mL 具塞比色管中，加甲醇6 ～ 8 mL，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，密塞，超声提取 20 min，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以12 000 r /min 离心5 min，上清液经0.45 μm 微孔滤膜过滤，滤液供高效液相色谱法测定。为了使建立的方法具有广泛的适用性，选择具有代表性的不同基质(包括膏霜、乳类，液体类，固体粉类) 进行实验考察。

分别称取补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮对照品各5 mg(精确到0.1 mg) ，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配置成质量浓度各为1 mg /mL 的标准溶液。精密量取各标准溶液0.5 mL 置50 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得10 μg /mL 的混合标准溶液。

取补骨脂对照药材 0.2 g，置50 mL 三角瓶中，加30 mL 70% 乙醇回流提取1 h，滤过，滤液置100 mL 量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

分别选取不同规格的C18 色谱柱(Venuil C18 柱(100 mm × 4.6 mm，3 μm) ，Eclipse XDB C18 (150 mm × 4.6 mm，5 μm) ，Hypersil C18 (100 mm × 4.6 mm，2.4 μm) ，按相同色谱条件进行实验。

分别对4 种特征成分的标准溶液进行190 ～ 400 nm 波长范围内扫描分析。

考察了甲醇-水(0 ～ 15 min，50∶ 50→90∶ 10) 、乙腈-水系统(0 ～ 12 min，40: 60→ 70∶ 30) 。

取3 种具代表性的空白样品基质(精华乳、爽肤水、蜜粉) 及空白基质加混合对照品的样品，按照确定的样品预处理方法处理后，进样分析。

在设定的色谱条件下，分别将4 种特征性成分标准溶液逐级稀释，进样10 μL，至10 倍噪音时的量为最低检出限。在本研究条件下，高低2 浓度混合标准溶液室温放置，连续6 次测定精密度。在本研究条件下，取 3 种不同化妆品空白基质样品，经提取净化后，加入高浓度的补骨脂标准溶液(1.0 mg /mL) ，室温放置 24 h，并且分别在0、2、4、6、12、24 h 进行测定，考察所测成分保留时间和峰面积的彼此符合程度。在本研究条件下，取3 种不同化妆品空白基质样品，分别加入高低2 种不同浓度的补骨脂标准溶液(0.1、 0.5 mg /mL) ，经提取净化后，分别进行测定，考察所测成分保留时间和峰面积的彼此符合程度。

应用本研究方法，分别对膏霜类、 水剂类、粉类、唇膏类等不同类型的进口化妆品和国产化妆品样品共36 件进行测定。

结果表明，空白样品加标后，以甲醇为提取溶剂，超声提取20 min，即可将待测物质提取完全。

结果表明，在设定的色谱条件下，补骨脂中4 种特征性成分均可到达满意的分离效果，短柱不仅分离效果良好，且节省分离检测时间

各成分在246 nm 处均有较强紫外吸收。在此波长下，杂质干扰较小，且亦可保证检测的灵敏度。

不同比例的甲醇-水均不能同时对4 种被测成分进行有效地分离，而乙腈-水 (40: 60→70: 30) 梯度洗脱分离效果良好，但2 种黄酮类成分峰形较差。水相中添加0.1% 的醋酸可有效改善色谱峰形，利于分离。由于香豆素类成分和黄酮类成分色谱行为差异较大，为能同时进行检测，实验中采用梯度洗脱。结果表明，采用1.2 所示的梯度洗脱程序，在12 min 内4 种特征成分可完全分离。

结果表明，在选取3 种具代表性的空白样品基质对所测目标物均无干扰。

本研究中 4 种补骨脂特征性成分的检出限均为0.3 ng，取 0.5 g样品时的检出浓度均为0.6 μg /g。中国药典 2010 年版一部补骨脂项下规定，按补骨脂素和异补骨脂素总量计，补骨脂药材的含量不得< 0.7%。若照此含量推算，本方法取0.5 g 样品时对补骨脂的检出浓度为0.018%(以补骨脂素和异补骨脂总量计) 。

保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation，RSD) 为0.04% ～ 0.20%，峰面积的RSD 为0.38% ～ 1.06%。

保留时间的RSD 为0.04% ～ 0.26%，峰面积的RSD 为0.67% ～ 2.73%。

保留时间的RSD 为0.01% ～ 0.09%，峰面积的RSD 为0.20% ～ 2.73%。

本研究分别对膏霜类、水剂类、粉类、唇膏类等不同类型的进口化妆品和国产化妆品样品共36 件进行测定，均未检出补骨脂组分。

本研究参照中药指纹图谱思路，建立了化妆品中补骨脂的高效液相色谱检测方法。中药指纹图谱是运用现代分析技术对中药所含化学信息以图形的方式进行表征并加以描述，是一种综合分析多种成分的有效手段^[3]。通过对指纹图谱中“共有色谱峰”的检识，可以鉴别中药的真伪和质量优劣。同样，通过对化妆品中补骨脂的多种特征成分检测，可以对化妆品中的补骨脂进行定性测定。补骨脂中的化学成分主要是香豆素、黄酮和萜酚类化合物^[4]。 本研究中选择补骨脂4 种共有特征成分包括2 种香豆素类成分(补骨脂素和异补骨脂素) 和2 种黄酮类成分(新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮) 为指标，通过对补骨脂这些“特征成分”检测，可以实现对化妆品中补骨脂检测。本研究所建方法灵敏、重复性好，具有良好的可操作性，同时也为化妆品中其他植物原料检测提供了可借鉴的方法。