乙型病毒性肝炎(乙型肝炎)是由乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。乙型肝炎具有传染性强,传播途径复杂,流行面广,发病率较高等特点,是中国法定管理的乙类传染病。辽宁省是乙型肝炎中度流行区^〔1〕,但抚顺市乙型肝炎发病率长期高居抚顺市法定报告传染病第一位,成为危害抚顺市人民健康和影响经济发展的主要疾病。为了解抚顺市乙型肝炎流行情况,制定有效防治措施,对抚顺市2001-2010年乙型肝炎发病情况和流行特征进行分析,同时对2010年抚顺地区HBV基因特征进行初步调查。现将结果报告如下。

疫情资料来源于抚顺市2001-2010年法定传染病订正报表和疾病监测信息报告管理系统。人口资料由2001-2010年抚顺市统计年鉴获得。标本采集自2010年在抚顺市传染病院就诊的乙型肝炎患者,共获得23份HBsAg阳性血清标本。

DNA提取试剂盒(美国Qiagen公司),PCR试剂盒(日本TaKaRa公司);PCR扩增仪(美国ABI公司)。

用DNA提取试剂盒从HBsAg阳性血清中提取HBV DNA,参照文献^〔2〕进行HBV的S基因引物合成和PCR扩增。阳性扩增产物送北京三博远志生物技术有限责任公司测序,测序结果在GenBank中用BLAST进行同源性比对分析。采用Mega3.1软件邻位相连法(neighbor-joining)以F基因型乙肝病毒(AB036910)为外群构建乙肝病毒S基因进化树,以确定HBV基因型。将测序结果利用DNAStar软件推导出氨基酸序列,依据HBV包膜蛋白S上的共同抗原决定簇a和第122位氨基酸(Lys/Arg为d/y抗原决定簇),第160位氨基酸(Lys/Arg为w/r抗原决定簇),以确定HBV的血清亚型^〔3〕。

采用SPSS 16.0统计软件和Epi Info 2000对资料统计分析。

2001-2010年,抚顺市共报告乙型肝炎发病6 933例,死亡6例,年平均发病率为30.52/10万,死亡率为0.26/10万,发病率2005年为最高(45.45/10万),2010年为最低(13.52/10万)。

2001-2010年,抚顺市乙型肝炎发病率呈波动下降趋势,发病率2005年达高峰(45.45/10万),2008年以后逐年下降。抚顺市乙型肝炎呈散发,全年均有发病,季节性分布差异不明显。

表 1

表 1 2001—2010 年抚顺市乙型肝炎地区分布情况

表 1 2001—2010 年抚顺市乙型肝炎地区分布情况

2001-2010年乙型肝炎在抚顺市各区县均有发病,其中发病构成比较高的地区为清原县和顺城区,分别占2001-2010年总发病数的20.44%(1 417/6 933)和20.40%(1 414/6 933);发病率较高的地区为新宾县和东洲区,发病率分别为41.00/10万、39.45/10万,城市与农村发病率差别无统计学意义。

2001-2010年抚顺市发病病例主要集中在25~60岁年龄组,占总发病数的79.00%(5 477/6 933),发病率均大于30/10万; < 14岁学龄及学龄前儿童发病率较低,发病率均小于6/10万。乙型肝炎病例中男性为4 725例,女性为2 208例,男女发病性别比为2.14:1。各种职业均有发病,发病构成比居前3位的分别是农民为23.73%(1 645/6 933)、工人为17.65%(1 224/6 933)、家务及待业为15.92%(1 104/6 933)。

图 1

图 1 HBV S 基因核苷酸序列系统发生树分析

PCR扩增获得11份HBV PCR阳性标本,测序结果在GenBank中用BlAST进行比较分析,结果表明11份标本均与HBV C基因型高度相似,一致性达99%。HBV S基因遗传进化树分析可见,11株乙肝阳性标本均与HBV C基因型参考株在同一大进化分支内。序列比对分析和S区基因进化树分析结果证明11株乙肝病毒基因型均为C型。利用DNAStar软件推导出氨基酸序列,11株HBV病毒氨基酸序列的第122位氨基酸均为LyS,第160位氨基酸均为Arg,第127位氨基酸均为Pro,表明11株HBV血清亚型均为adw1。

乙肝疫苗免疫接种是预防乙肝病毒感染最有效的措施。抚顺市自1992年起实施乙肝疫苗免疫接种,2002年将乙肝纳入儿童计划免疫管理。结果表明,抚顺市近年来实施乙肝疫苗接种取得了一定的效果,大大降低了小年龄组的发病率乙肝预防控制工作的重点目标人群是农民、工人。受预防保健服务可及性的限制,下一步应针对高发年龄组和重点目标人群,加大乙肝疫苗接种防病宣传力度,普及健康知识以了解乙肝疫苗接种的重要性,从而提高乙肝疫苗接种覆盖率。

HBV基因分型是以HBV全基因核苷酸序列差异≥8%或其S基因核苷酸序列差异≥4%作为分型标准,将乙型肝炎病毒株分为A-H共8个基因型,不同基因型具有不同的地理分布^〔3〕,中国对各地HBV基因型分布进行的研究表明,中国A、B、C、D 4个基因型都存在,B型、C型为主要基因型,A型、D型较少^{〔4, 5, 6, 7〕}。中国北方以基因C型占优势,基因B型由北方至南方感染率逐渐增高。对2010年抚顺地区乙肝病毒S基因的初步调查结果表明,抚顺市HBV以C型为主要基因型,血清亚型以adw1亚型占优。本研究为抚顺市首次对HBV的基因型和血清亚型特征进行调查,今后将继续扩大监测采样范围,增加采样数量,进一步明确抚顺市HBV分子流行病学特征,为制定针对群体的乙肝防治策略提供更加科学的信息。