肠源性感染在全身炎症反应综合症、脓毒症、多器官功能障碍综合症的发生发展中起重要作用^{〔1, 2〕}。目前,在肠源性感染的早期综合治疗包括快速有效的液体复苏、抗氧自由基、早期肠内营养、正确处理创面、合理使用抗生素等,虽然在一定程度上降低了肠源性感染的发病率和病死率,但仍然存在很多问题,诸如药物来源、价格、措施便利性、效果单一性、动物实验和临床应用的统一性等。因此,寻找一种药物来源丰富、价格低廉、效果肯定、使用方便的防治烧伤后肠源性感染的方法备受关注。本研究采用中药膳食喂养烫伤大鼠,早期实施肠道营养的同时给予中药干预,探讨中药膳食对严重烫伤大鼠肠源性感染的防治效果,结果报告如下。

鲎试剂盒(上海伊华科技有限公司);sIgA试剂盒(北京北方生物技术研究所);Auto-4自动细菌鉴定仪及配套NC21鉴定板(美国DADE公司);蒸汽烫伤实验仪(南昌大学第一附属医院烧伤研究所)。药膳制作:党参20 g、白术25 g、茯苓25 g、炙甘草15 g、黄芪20 g、薏苡仁20 g、瘦猪肉200 g加1000 mL生理盐水,熬制60 min后过滤去残渣,4℃保存。肉汤制作:200 g瘦猪肉相同方法熬制成汤后过滤去肉渣,4℃保存;BX40型光学显微镜(日本Olympus公司)。

健康Wistar大鼠100只(南昌大学实验动物中心,许可证号:SCXK (赣)2009-0002),体重(200 ± 20) g,适应性饲养1周。随机分为:药膳组、肉汤组、常规组,每组30只。3组大鼠用氯胺酮(2 ml/kg)麻醉,背部脱毛,脱毛区置于108℃蒸汽烫伤仪中8 s,造成30%体表面积(total body surface area,TBSA)Ⅲ度烫伤(病理切片证实)。伤后腹腔注射乳酸林格液,创面涂碘伏,2次/d。药膳组、肉汤组大鼠于伤后2 h开始分别灌胃药膳、肉汤,3次/d,2 ml/次。于伤后1、3、7 d抽取大鼠门静脉血-35℃冻存,处死后取材。另10只大鼠作为对照组,造成37℃假伤后全部处死取材。

取大鼠盲肠用乙醇脱水,石蜡包埋,成2~3 μm厚切片,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后置于显微镜下观察细胞超微结构改变。

取冻存静脉血采用鲎试剂基质显色定量法检测内毒素含量,操作按试剂盒说明书进行。

采集静脉血作细菌定量培养,同时取肝、肾、脾、肠系腹淋巴结各0.3~0.5 g,称重加入2 mL生理盐水,制成匀浆液,分别取100 μL涂于血平皿和麦康凯平皿以及沙氏平皿,37℃孵育24~48 h,计数菌落并行革兰染色和生化鉴定。

剪取约1 cm盲肠,纵行刮开,轻轻清除内容物,漂洗,称重后加2 mL生理盐水匀浆,倍比稀释,取100 μL分别接种于各种选择培养基,需氧培养(37℃)24 h,真菌和厌氧菌培养48 h计数并鉴定。

剪取空回肠中段约10 cm,轻轻清除内容物,用玻片刮取粘液,稀释充分溶解,离心取上清,用放射免疫分析法测定提取液中sIgA含量,同时用缩脲法测定总蛋白,计算每mg肠粘液中sIgA含量。

数据以珋 x±s表示,采用SPSS 15.0统计软件,计量资料组间比较用方差分析,检验水准α=0.05。

与对照组比较,伤后1 d各组大鼠肠粘膜明显萎缩,粘膜上皮细胞灶性坏死、脱落,绒毛水肿,间质裸露形成溃疡面,血管扩张充血,肌层变薄断裂。伤后第3 d,药膳组病理形态有所改善;伤后第7 d,常规组肠粘膜萎缩,粘膜上皮细胞灶性坏死减轻,绒毛间隙增宽减轻,固有层仍充血。肉汤组肠病变程度减轻,基底层增厚,粘膜下层增厚。药膳组黏膜增厚,绒毛上皮细胞境界清楚、结构清晰,间质血管充血不明显,基本恢复到正常状态。

表 1

表 1 各组大鼠内毒素水平比较 ( μg /mL， x±s)

表 1 各组大鼠内毒素水平比较

与对照组比较,药膳、肉汤、常规组内毒素水平烧伤后各时点均明显升高(F=5.67、4.89、4.35,P < 0.01);肉汤、常规组内毒素水平伤后各时相点均高于药膳组(F=6.34、4.03、3.35,P < 0.01或P < 0.05)。

表 2

表 2 各组大鼠细菌移位率及盲肠膜菌群变化比较 ( logCFU/g， x±s，n = 10)

表 2 各组大鼠细菌移位率及盲肠膜菌群变化比较

与对照组比较,药膳、肉汤、常规组伤后细菌移位率上升,其中双歧杆菌数量明显降低(F=6.45、5.34、4.67,P < 0.01),酵母菌及大肠杆菌数量明显增加(F=5.87、4.05、3.97,P < 0.01或P < 0.05);与药膳组比较,肉汤、常规组细菌移位率明显升高,各时相点双歧杆菌数量明显减少,酵母菌及大肠杆菌数量明显增加(F=6.57、4.23、3.85,P < 0.01或P < 0.05)。

表 3

表 3 各组大鼠肠道sIgA 水平比较 ( μg /ml， x±s)

表 3 各组大鼠肠道sIgA 水平比较

与对照组比较,药膳、肉汤、常规组sIgA水平伤后各时相点均明显下降(F=5.57、4.23、3.97,P < 0.01或P < 0.05)。而肉汤、常规组sIgA水平伤后各时相点均低于药膳组(F=6.71、5.43、4.56,P < 0.01或P < 0.05)。

本实验观察发现药膳组大鼠伤后第7d黏膜增厚,绒毛增长,水肿明显减轻,其境界清楚、结构清晰、间质血管充血不明显,几乎恢复到正常状态。其机制除肠道营养对肠道机械屏障的修复外^{〔3, 4〕},中药膳食中四君子汤^〔5〕有增强胃肠细胞内的粘液糖蛋白作用;明显提高细胞膜Na+-K+-ATP活性;而且有实验表明^〔6〕四君子汤加味能抑制氧自由基的脂质过氧化损伤作用并降低肿瘤坏死因子-α水平,改善粘膜微循环。

肠道作为人体最大的细菌库及内毒素池,严重烧伤后数小时肠粘膜损伤和随之而来的肠道细菌、内毒素移位即已出现,约于伤后3 d达高峰^{〔7, 8〕},本实验结果表明,药膳饮食促进肠蠕动,减少细菌在肠道停留的时间及促进肠内毒素排出;提高肠道双歧杆菌数量,修复肠道生物屏障,可抑制大量机会菌过度繁殖;并且修复肠粘膜机械屏障,从而减少细菌移位和大量内毒素入侵。肠道不仅是重要消化器官,而且还是人体最大外周免疫器官。Slivey^〔9〕研究发现,肠道sIgA是一个至关重要的免疫保护组成部分,是肠道黏膜表面第一道免疫防线^〔10〕。本实验结果显示烫伤后各组大鼠肠道sIgA水平均呈不同程度下降,药膳组肠道sIgA水平与同时点的肉汤、常规组比较却有很大程度升高,表明烫伤后药膳饮食能有效提高肠道sIgA水平,其可能机理为:中药膳食明显改善胃肠道血运,促进黏膜上皮细胞生长,保护肠淋巴组织;其成分甘草可诱导B淋巴细胞分化,促进B细胞合成分泌;而B淋巴细胞、黏膜上皮细胞均与sIgA合成分泌相关^〔11〕。