嗅觉衰退是研究老年化过程中的一个重要方面，因为很多行为信号依赖于气味。大鼠在迅速取得了一些相对复杂的任务时，气味提供了线索。Moriguchi 等^〔1〕研究表明，在水迷宫实验中，n-3 脂肪酸缺乏动物需要更长潜伏期。大鼠有更高的能力来识别气味，以完成更复杂的学习记忆任务^{〔2, 3〕}。 二十二碳六烯酸( DHA) 缺乏也可影响到嗅觉学习记忆，Greiner 等^〔4〕研究表明，在区别2 种气味上，DHA 缺乏老鼠与对照组比较错误更多，同时观察到嗅觉学习能力也被削弱。 本研究以老年大鼠为模型，评估DHA 对嗅球在衰老中作用。

二十二碳六烯酸( DHA) ( 美国Sigma 公司) 。载脂蛋白E( APOE) ，载脂蛋白J( APOJ) 抗体和二抗β － actin( 美国Santa Cruz 公司) ; 神经生长因子( NGF) 和脑源性神经营养因子( BDNF) 试剂盒( 美国Promega 公司) Bio － rad 酶标仪( 美国BIO-RAD 伯乐公司) 、UVmini 紫外分光光度计( 日本岛津公司) ; 其他试剂均为国产分析纯。

SD 大鼠( 广西医科大学动物饲养中心) ，桂动许字2000 第001 号，动物适应性喂养7 d。7 月龄 ( 青年组) 雄性15 只，体重( 250 ± 20) g，24 月龄雄性大鼠45 只，体重( 560 ± 20) g。随机分为老年对照组，DHA180、360 mg /kg 组，每组15 只。每天11∶ 00，按照0.1 mL/kg 灌胃，青年组和老年对照组灌胃生理盐水，大鼠自由觅水取食，持续 49 d。断头处死大鼠( 10 只用于神经因子测定，5 只用于载脂蛋白测定) ，取嗅球，－ 80 ℃冷冻用于生化分析。

在0 ～ 4 ℃条件下进行匀浆，取匀浆液在4 ℃恒温下10 000 r /min 离心15 min，，取上清－ 20 ℃保存待测。用ELISA 法测定，操作严格按试剂盒说明书步骤进行。

4 ℃下分离整个嗅球，按100 mg 样品加入0.2 mL 预冷裂解液A( 40 mmol /L Tris，1 %二硫苏糖醇，蛋白酶抑制剂混合物，内含1 mmol /L 苯甲基磺酰氟，1 mmol /L 乙二胺四乙酸，0.7 μg /mL 抑肽素，0.5 μg /mL 亮肽素) 匀质化10 000 r /min，10 min，4 ℃ 离心混合物，将上清转移到干净无菌离心管中，用凯氏定氮法 ( BCA) 检测蛋白含量，分装后－ 80 ℃保存。BCA 法定量后经过聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE) 电泳，转膜、封闭、一抗比例为1∶ 500，内参比例是1 ∶ 10 000，显色用二氨基联苯胺 ( DAB) 方法。

使用SPSS10.0 统计软件进行分析，组间比较用t 检验和单因素方差分析。P ＜ 0.05 为差异有统计学意义。

表 1

表 1 DHA 对嗅球中BDNF 和NGF 水平影响( x± s ，pg /mg，n = 10)

表 1 DHA 对嗅球中BDNF 和NGF 水平影响( x± s ，pg /mg，n = 10)

与青年组比较，老年对照组BDNF 和NGF 水平明显降低，与老年对照组比较，DHA 180、360 mg /kg 组BDNF 分别提高了17.45% 和28.01%，NGF 提高了36.05%和52.01%。

图 1

图 1 DHA 对大鼠嗅球中APOE 蛋白表达影响( n = 5)

图 2

图 2 DHA 对大鼠嗅球中APOJ 蛋白的表达影响( n = 5)

图 1 显示，老年对照组APOE 表达比青年组明显增加，表明APOE 是一种随年龄增长表达量增加的蛋白。DHA 组APOE 表达明显减少，说明DHA 对APOE 有明显下调作用。图 2 可以看出，在老年对照组中APOJ 表达比青年组明显下降，表明 APOJ 是一种随年龄增长表达量下降的蛋白。DHA 组APOJ 表达明显升高，说明DHA 对APOJ 有明显上调作用。

NGF 和BDNF 高水平存在于大脑皮层、海马、嗅球等脑区，能促进神经元增殖和分化，调节中枢和外周神经元存活和轴突生长^〔6〕。研究表明，DHA 在人类健康中有重要作用，能促进神经细胞生长，使神经细胞长得更大，而且还能促进海马中NGF 和BDNF 表达^〔7〕。APOE 具有调节脂代谢，维持胆固醇平衡作用，参与中枢神经系统( CNS) 正常生长、发育及损伤修复。在中枢神经系统发育过程和损伤之后，作为脂质载体的APOE，参与脂质代谢，调控胆固醇动员和再分配，参与神经细胞膜修复、再生长与维持。创伤性脑损伤后，APOE 蛋白表达强度在大鼠和人脑中均较对照组明显增强，起转运胆固醇和磷脂到损伤神经元内的作用，促进细胞修复^{〔8, 9, 10〕}。APOJ 在痴呆及缺血性脑血管病均有表达，可能起细胞保护作用。 研究发现，在短暂性脑缺血脑组织中，APOJ 的表达明显增加，以保护濒临缺血坏死细胞，提示APOJ 可能具有保护神经元的作用^〔11〕。本研究表明DHA 在嗅球中确实具有重要的生理作用，但其具体的机制有待研究。