小米又名粟,为“五谷”之一,是中国传统的粮食作物,已有4000多年的栽培史,在我国的“三北”地区广为种植〔1〕。小米营养丰富,氨基酸种类齐全,蛋白质含量丰富,具有健胃安神、降低血清甘油三酯等多种功能〔2〕。目前国内关于小米深加工方面的研究多集中在蛋白粉、饮品等方面的开发,有关小米多肽制备和功能研究的报道较少。通过前期研究结果证明,小米多肽具有较好的抗氧化性〔3〕,在此基础上,本实验研究小米多肽免疫调节作用,从而为小米多肽的研究与开发提供理论基础和实验依据。
1 材料与方法 1.1 材料小米多肽:实验室自制〔3〕,冷冻干燥后-20 ℃储藏。昆明种小鼠160只,雌雄各半[中国医科大学实验动物中心,动物合格证号: SCXK(辽)2003-0009],体重(22±2)g,常规喂养,观察1周后使用。刀豆蛋白A(ConA)、RPMI-1640培养液、3-(4,5 -二甲基-2-噻唑)-2,5 -二苯基溴化四唑(MTT)(美国Sigma公司);其他为国产分析纯。
1.2 实验方法 1.2.1 动物分组及饲养健康小鼠160只,雌、雄各半,随机分为4组,分别进行3个指标测定,每组分为4个小组,即正常对照组、小米多肽低、中、高剂量组。小米多肽低、中、高剂量组每天分别按250、500、1 000 mg/(kg·d)灌胃;空白对照组用等量蒸馏水灌胃,灌胃量为0.1 mL/10 g。灌胃30 d后,末次给小米多肽24 h后进行各项免疫指标的测定。
1.2.2 指标测定对细胞免疫的影响(淋巴细胞转化试验):参照文献[4]进行;血清溶血素的测定[半数溶血值(HC50)的测定]:参考文献[5]进行。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定:参考文献[6]进行。小鼠免疫器官指数的测定:参考文献[7]进行脾脏指数和胸腺指数测定。
1.3 统计分析 采用SPSS 11.5软件进行t检验,实验数据 以珋x±s表示。 2 结果 2.1 小米多肽对细胞免疫功能影响结果表明,经口给予小鼠不同剂量的小米多肽30 d,250、500、1 000 mg/(kg·d)各剂量组加ConA前后A差值分别为(0.072±0.03)、(0.081±0.07)、(0.087±0.09),与对照组(0.051±0.02)比较,差异有统计学意义(P <0.01)。
2.2 小米多肽对小鼠体液免疫功能影响结果表明,与对照组小鼠半数溶血值(156.89±5.18)比较,200、500、1 000 mg/(kg·d)各剂量组小鼠半数溶血值分别为(158.31±6.25)、(171.33±8.77)、(175.91±9.22)均能提高小鼠半数溶血值,且呈现剂量-效应关系,且中剂量组和高剂量组HC50与对照组比较差异有统计学意义(P <0.01)。半数溶血值的测定结果表明,小米多肽能够提高小鼠的体液免疫功能。
2.3 小米多肽对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(表 1)| 表 1小米多肽对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响(x±s) |
结果可见,小米多肽对小鼠巨噬细胞的吞噬功能有明显增强 作用。中、高剂量组的吞噬指数和吞噬率与对照组比较差异 均有统计学意义(P <0.01),小米多肽可以有效促进小鼠腹 腔巨噬细胞的吞噬功能。
2.4 小米多肽对小鼠免疫脏器指数的影响(表 2)| 表 2小米多肽对小鼠免疫脏器指数影响(x±s) |
结果表明,小米多肽低、中、高剂量组的脾脏指数和胸腺指数发生变化,低剂量组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P < 0.05),中、高剂量组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P <0.01)。小鼠灌胃小米多肽后,脾脏指数和胸腺指数均有所增加,说明小米多肽可以增加小鼠免疫器官指数。
3 讨论近年来研究表明,多肽具有提高机体免疫力、抗肿瘤作用,其对于机体的特异性免疫与非特异性免疫,细胞免疫与体液免疫皆有影响〔8〕。本研究表明,小米多肽对小鼠淋巴细胞有明显的增殖作用,进而说明小米多肽对细胞免疫有促进作用。巨噬细胞是机体免疫系统中重要的细胞成分之一,巨噬细胞在非特异性和特异性免疫应答的诱导和调节中起关键作用。脾脏是体内最大的免疫器官,与体液免疫和细胞免疫均有密切关系,脾脏指数的大小直接反映机体免疫水平的高低。本结果表明,小米多肽对于小鼠巨噬细胞的吞噬功能及脾脏指数均有明显的提高作用(P <0.05),表明小米多肽可以通过非特异性免疫来提高机体的免疫力。因此,可以认为小米多肽主要是通过促进机体的细胞免疫水平,增强巨噬细胞的吞噬功能,提高脾脏指数来实现对机体的免疫作用,但其免疫调节作用的确切机制还有待于进一步研究。
| 〔1〕 | 宋东晓,高德成.小米的营养价值与产品开发[J].粮食加工,2005,(1):21-24. |
| 〔2〕 | Lee SH,Chung IM,Cha YS,et al.Millet consumption decreased serum concentration of triglyceride and C-reactive protein but not oxidative status in hyperlipidemic rats[J].Nutr Res,2010,30(4):290-296. |
| 〔3〕 | 刘剑利,曹向宇.小米多肽的制备及其抗氧化功能研究[J].食品科学,2009,30(8):64-67. |
| 〔4〕 | 张秀军,徐俭,林志彬.羧甲基茯苓多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国药学杂志,2002,37(12):913-916. |
| 〔5〕 | 段博文,李运,刘昕,等.柳茶多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国中药杂志,2010,35(11):1466-1469. |
| 〔6〕 | 张鸣镝,管骁,姚惠源.玉米胚芽蛋白酶解物对小鼠免疫功能的影响[J].食品科学,2007,28(2):302-305. |
| 〔7〕 | 张大旭,张娅婕,甘振威,等.鳖甲提取物抗疲劳及免疫调节作用研究[J].中国公共卫生,2004,20(7):834. |
| 〔8〕 | 吴开平.羊胎盘提取液及其组分(SPIF-I)的免疫活性研究[J].氨基酸和生物资源,2006,28(3):62-64. |
2012, Vol. 28



