生殖器疱疹(genital herpes，GH)是由疱疹病毒科单纯疱疹病毒(herpes simples virus，HSV)1型(HSV-1)或2型(HSV-2)引起的一种性传播疾病。临床主要表现为外生殖器或肛门等部位有群或散在小水泡、溃疡等，容易复发。生殖器疱疹主要由HSV-2引起^{〔1, 2〕}。90%生殖器疱疹病例是由HSV-2型引起，10%HSV-1型引起。世界各地HSV-2型患病率显著增加，在发展中国家，HSV-2的血清流行率达＞40%，我国近几年HSV-2的患病率显著增加^{〔3, 4〕}。为了解江苏省引起生殖器疱疹的病原体流行状况和病毒变异程度，本研究于2006年10月-2008年12月在江苏省苏南、苏中、苏北3个区域的性病门诊就诊者中收集生殖器疱疹患者的疱疹液标本，进行了HSV-1和HSV-2胸苷激酶(thymidine kinase，TK)基因检测和分析。现将结果报告如下。

2006年10月-2008年12月在苏北淮安市、苏中扬州市和苏南苏州市的性病正规诊治机构就诊的生殖器疱疹患者116例，入选条件为已婚有婚外性史、外生殖器周围有初发或复发的疱疹、仅进行抗疱疹病毒治疗者、排除其他炎症者。

采用无菌一次性注射器，吸取每例患者生殖器疱疹的疱疹液(疱液)2份，每份0.5mL，分装保存，放-86℃超低温冰柜存放备用。用无菌棉签沾取疱液，将沾有疱液的棉签置于含有0.5mL生理盐水的无菌样品管中，立即保存在-20℃冰箱中。3d内于20℃条件下运送至淮安市第四人民医院进行样品处理和分析。

Viral DNA Extraction Kit，Qiagen gel extraction kit(德国Qiagen公司);DL 2000 DNA Marker(大连宝生物公司);DNA聚合酶(大连宝生物公司)。PCR仪:PTC-200，MJ公司，美国。

根据GenBank提供的HSV序列，设计HSVTK基因引物。采用聚合酶链反应(PCR)直接检测标本中HSVTK基因，测得HSV-1TK基因全长1135bp，扩增引物为HSV-1TK1:5'-ATGGCTTCGTACCCCTGCCATCAACACG-3'，HSV-1TK2:5'-TCAGTGAGCCTCCCCCATCTCCCGGGCAA-3';测得HSV-2TK基因长度为1131bp，扩增引物为HSV-2TK1:5'-ATGGCTTCTCACGCCGGCCAACAGCACG-3'，HSV-2TK2:5'-CTAAACTCCCCCCACCTCGCGGGCAAA-3'。

采用Viral DNA Extraction Kit提取病毒核酸，采用Qiagen gel extraction kit纯化PCR产物，具体方法参照试剂盒说明书。

以TK1、TK2序列位置为引物，模板5μL，用DNA聚合酶进行扩增。反应条件:94℃5min，94℃30s，55℃1min，72℃2min，94℃30s，55℃1min，72℃90s，40个循环，72℃10min，4℃保温。

所有序列经Bioedit软件编辑后，用CLUSTX 2.0进行序列对比，用MEGA 4.0软件的邻位对接法程序进行进化树构建。序列分析国际参考株为NC001798。

使用SAS8.0软件进行分析;不同地区HSV-2流行率比较用χ²检验。

116例就诊患者中，男性92例，占79.3%，女性24例，占20.7%;＜20岁1例，占0.9%，21～30岁30例，占25.9%，31～40岁53例，占45.7%，41～50岁27例，占23.3%，＞51岁5例，占4.3%;受教育程度中，小学及以下25例，占21.6%，初高中32例，占27.6%，大专及以上59例，占50.8;职业构成中，企、事业单位管理人员23例，占19.8%，营销人员38例，占32.8%，农民工19例，占16.4%，个体户27例，占23.3%，其他9例，占7.7%。苏北淮安市68例，苏中扬州市20例，苏南苏州市28例。2.2目的基因扩增(图 1)PCR扩增结果可见，HSV-1和HSV-2TK基因产物约1130bp左右，与目的基因大小一致。

图 1

注: M: DL2000 DNA Marker; 1: HSV-1; 2: HSV-2; C: 阴性对照。图 1 HSV-1、HSV-2 TK 基因1%琼脂糖凝胶电泳图

116例性病门诊患者中，经核酸检测，共检出HSV阳性40例，感染率为34.5%。在苏州市28例患者中，检出HSV-1阳性4例，感染率为14.3%，其他2个地区未检出，总阳性率为3.5%(4/116)。检出HSV-2共36例，总阳性率为31.0%，其中苏北淮安市为30.9%(21/68)，苏中扬州市为40.0%(8/20)，苏南苏州市为25.0%(7/28)。3个地区比较，HSV-2感染率差异有统计学意义(χ²=1.18，P=0.047)。

图 2

注: SN: 苏南株; SZ: 苏中株; SB: 苏北株。图 2 HSV-2 TK 基因进化树

40份疱疹病毒核酸阳性标本中，HSV-2阳性36份，占90%。以测序得到的HSV-2TK基因序列构建HSV-2进化树。其中苏北地区阳性株命名为SB株，苏中地区命名为SZ株，苏南地区命名为SN株。结果可见，与NC001798参考株的TK基因全序列对比，江苏省流行的HSV-2病毒具有明显的地域特点，苏南地区流行株全部聚集在一起，形成一个病毒簇。苏中地区除SZ8外，其它流行株也聚集在一起。苏北流行株差异较大，形成4个以上独立流行簇。其中苏北株SB1、SB2在核酸序列上与苏南株的同源性达到98%。

本研究结果显示，江苏省性病就诊者中，疱疹病毒总感染率达到34.5%。而且性病就诊者中以营销人员和个体户为主(两者占所有就诊者56.1%)，这2种职业的人群具有很大流行性，不仅使HSV在本地区传播，而且可使一个地区流行的HSV-2传播到其它地区。苏北地区分离的SB1和SB2株病毒在核酸序列水平更接近苏南地区流行的HSV-2，提示由于各种社会学因素，HSV-2已形成了不同地区间互相传播。

本研究结果表明，与NC001798参考株的TK基因全序列对比，江苏省HSV-2的流行与地域明显相关。苏南和苏中地区流行的HSV-2各自形成独立的流行簇，而在苏北地区，HSV-2流行株差异较大。苏北地区是江苏省社会经济、文化发展较缓慢的地区，提示HSV-2的流行与社会经济发展密切相关，不同地区由于经济、文化差异，对疾病的流行可能形成不同的影响。因此在制定预防和控制性传播疾病对策时，应当因地制宜，采取与之相适应的措施。

生殖器疱疹的发生和复发给患者及其家庭带来很大的身心痛苦，其生活质量下降，人际交往还可引起播散性HSV感染。孕妇的生殖器疱疹还可影响优生优育。近年来，生殖器疱疹发病率不断上升，HSV-2已经成为很多国家和地区生殖器疱疹的首要病因^〔12〕。在艾滋病流行地区，生殖器疱疹与梅毒及其他性传播疾病一样，增加了HIV感染的危险性，HSV感染者由于免疫功能降低和形成局部的溃疡，使得具有高危行为的人群更容易感染HIV^{〔5, 6, 7, 8〕};HIV感染也改变了生殖器疱疹的流行状况和临床表现。生殖器疱疹已成为令人关注的公共卫生问题^{〔9, 10, 11, 12, 13〕}，有必要同时加强对HSV传播的控制和防治研究。