有效的抗病毒治疗能降低HIV 感染者的发病率和机会感染的频率^〔1〕。但随着高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy，HAART) 的广泛应用，在药物选择压力下HIV 出现了交叉耐药和多重耐药^〔2〕。有研究证明，耐药变异是导致临床抗病毒治疗失败的主要原因^{〔3, 4, 5〕}。为了解浙江省宁波市未用药HIV 感染者的耐药本底情况和艾滋病人的治疗效果及耐药情况，于2009 年1-6 月对在治疗的艾滋病人和部分未治疗的HIV 感染者进行了CD4⁺ T 淋巴细胞计数检测、病毒载量和耐药分析。现将结果报告如下。

2009 年1-6 月经宁波市疾病预防控制中心HIV 确证实验室应用蛋白印迹试验确认为HIV-1 阳性的感染者和在治疗的艾滋病人，其中HIV 感染者排除以前有HIV 阳性检测记录或以前接受过抗病毒治疗或有《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册》(2 版)^〔6〕中WHOⅢ期或Ⅳ期临床症状的感染者。

COULTER EPICS XL 型流式细胞仪(美国贝克曼公司) ; EasyQ 病毒载量仪(法国梅里埃公司) 。三色荧光标记单克隆抗体CD4 /CD8 /CD3、绝对计数试剂FLOWCOUNT(美国贝克曼公司) ; 提取缓冲液、提取试剂和扩增试剂(法国梅里埃公司) 。

根据知情同意原则，由专业采血人员在采血点分别采集42 例感染者和114 例AIDS 病人的新鲜全血9 mL，乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA) 抗凝，测CD4⁺ T 淋巴细胞计数后分离血浆－ 80 ℃保存。

参照仪器说明书，全血经三色荧光标记单克隆抗体CD4 /CD8 /CD3 染色后溶血，加入绝对计数试剂FLOWCOUNT，应用COULTER EPICS XL 型流式细胞仪检测CD4⁺ T 淋巴细胞数。

参照仪器说明书，血浆经提取病毒核酸后应用EasyQ 病毒载量仪扩增检测HIV 病毒载量数。

由赛百盛生物公司合成2 对PCR 引物。外侧引物为MAW 26: 5＇ -TTGGAAATGTGGAAAGGAAGGAC-3＇和 RT21: 5 ＇ -CTGTATTTCTGCTATTAAGTCTTTTGATGGG-3 ＇; 内侧引物为PRO-1 : 5＇ -CAGAGCCAACAGCCCCACCA-3＇和RT20 : 5 ＇ -CTGCCAGTTCTAGCTCTGCTTC-3＇。

具体方法见文献〔3〕。

套式PCR 扩增pol 片段送上海英骏生物技术有限公司用内侧引物正反2 个方向进行核苷酸序列测定。核苷酸序列测定结果用DNASTAR 软件拼接后获得 PR 和RT 基因区1300 bp 序列，登录美国斯坦福大学HIV 国际耐药数据库分析，得到毒株的耐药情况。

应用Excel 2003 软件进行统计分析。

156 例艾滋病人和感染者中男性 106 例，女性50 例; 年龄为16 ～ 66 岁，平均为37 岁; 已婚94例，未婚38 例，离异24 例; 学历普遍较低，其中文盲5 例，小学27 例，初中81 例，高中及中专以上26 例，大专及以上17 例;本地户籍为主，有108 例，外地户籍主要分布在安徽、四川和河南; HIV 传播途径主要为性传播(其中异性传播108 例、 同性传播32 例) ，采供血浆和注射吸毒分别为6 和1 例，9 例不详。

绝对值最低14 个/μL，最高 1060 个/μL，平均(314 ± 28) 个/μL。未治疗的感染者中＜ 200 个/μL 3 例，200 ～ 350 个/μL 13 例，占31.0%; 350 ～ 500 个/μL 之间15 例，占35.7%。艾滋病病人＜ 200 个/μL 40 例，占35.1%; 200 ～ 350 个/μL 48 例，占42.1%; 350 ～ 500 个/μL 16 例。

114 例艾滋病病人中有100 例病毒载量低于最低检测限50 IU/mL，占病人数的87.7%，＜ 1 000 IU/mL 8 例，1 万～ 10 万IU/ mL 4 例，还有2 例分别 ＞ 10 万IU/mL 和0.1 ～ 1 万IU/mL。在治疗时间＞ 6 个月的 69 例艾滋病病人中有65 例病毒载量结果低于检测限，占 94.2%。在治疗时间≤4 个月的23 例艾滋病病人中病毒载量结果低于检测限的有17 例，占73.9%。在治疗时间4 ～ 6 个月的22 人中病毒载量结果低于检测限的有19 例，占 86.4%。

表 1

表 1 艾滋病病人治疗方案、病毒载量和CD4 细胞计数

表 1 艾滋病病人治疗方案、病毒载量和CD4 细胞计数

114 例艾滋病人使用的治疗方案有10 种，主要为拉米夫定(3TC) + 司他夫定(D4T) +奈韦拉平(NVP) 、齐多夫定(AZT) + 3TC + NVP、AZT + 3TC +依非韦伦(EFV) 和3TC + D4T + EFV，有107 例，占服药病例的93.9%，其中使用最多的是3TC + D4T + NVP 方案。服药病人中有39 例更改了治疗方案，主要原因为出现了副反应，有30 例，其次为发生了基因耐药，有8 例。

将病毒载量＞ 1 000 IU/mL 的 6 例AIDS 病人和42 例HIV 感染者的血浆提取RNA 并扩增获得42 例(包括6 例AIDS 病人和36 例HIV 感染者) pol 基因序列，通过美国斯坦福大学HIV 国际耐药数据库分析，得到毒株耐药情况。在HIV 感染者中，HIV 毒株对蛋白酶抑制剂存在8 例潜在耐药，1 例低度耐药和2 例中度耐药; 在艾滋病人中，HIV 毒株对核苷类抑制剂分别存在2 例潜在耐药和 4 例高度耐药，对非核苷类抑制剂分别存在5 例高度耐药，1 例低度耐药和1 例中度耐药。

外周血中CD4⁺ T 淋巴细胞的绝对值对于HIV 感染状况、疾病分期、预测其机会性感染的可能性和评价治疗效果有极其重要的作用^〔7〕。根据《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册(第二版) 》^〔6〕的治疗标准，本调查中7.1% 的病例需治疗，提示该感染者人群免疫状况尚佳; 而35.1% 的艾滋病人达不到治疗要求，治疗效果不理想。本调查中，治疗＞ 6 个月的69 例中有94.2%(66 /69) 达到治疗效果，其余3 例体内的病毒复制未得到有效抑制，均出现耐药和(或) 副反应。通过耐药检测指导临床找到既能有效抑制病毒复制而又使病人较少出现副反应的治疗方案是对艾滋病病人的最大关怀。

本研究发现，HIV 感染人群携带毒株主要存在对蛋白酶抑制剂的耐药，而艾滋病人中主要存在对核苷类和非核苷类逆转录酶抑制剂的耐药; 与中国的治疗方案有关，我国使用的一线治疗方案是2 种核苷类抑制剂加1 种非核苷类抑制剂。 一些国家研究结果显示，未治疗患者的耐药率有上升趋势^〔8〕。与发达国家比较，我国的HIV 主要耐药位点流行率还较低，可能与我国抗逆转录药物应用时间不长有关^〔9〕。在 HIV 感染者和艾滋病人中均有耐药检出，提示应加强HIV 感染者/艾滋病病人的耐药监测，了解流行株耐药情况，及时调整治疗方案，以减少或减缓耐药株的产生。