中国公共卫生  2011, Vol. 27 Issue (11): 1386-1388   PDF    
引用本文
王亚玉, 张景霞, 李东力, 闫永平. 炭疽疫苗与钩体疫苗联合免疫效果分析[J]. 中国公共卫生, 2011, 27(11): 1386-1388.
WANG Ya-yu, ZHANG Jing-xia, LI Dong-li,et al. Efficacy of simultaneous immunization of anthrax vaccine and leptospira vaccine[J]. Chinese Journal of Public Health, 2011, 27(11): 1386-1388.
炭疽疫苗与钩体疫苗联合免疫效果分析
王亚玉1,2, 张景霞2, 李东力1, 闫永平2     
1. 沈阳军区联勤部疾病预防控制中心疾病控制科, 辽宁 沈阳 110034;
2. 第四军医大学军事预防医学系流行病学教研室
收稿日期: 2010-08-18.
基金项目: 全军“十一五”课题(06Z039)
作者简介: 王亚玉(1979- ),女,辽宁阜新人,助理研究员,硕士,研究方向:传染病流行病学.
通讯作者: 闫永平,E-mail:yanyping@fmmu.edu.cn
摘要: 目的 评价炭疽疫苗和钩体疫苗进行联合免疫的有效性,为人群联合接种提供理论依据.方法 96只昆明鼠按分层随机分组的方法分为6组,每组16只,雌雄各半.将单独接种确定的每种疫苗的最佳免疫剂量(炭疽疫苗1/10、钩体疫苗1/5的人用剂量)进行联合接种,同时组合两种疫苗最佳剂量的临近剂量组(炭疽疫苗1/20、1/40,钩体疫苗1/3的人用剂量)进行联合接种,采用ELISA方法检测炭疽特异性抗体,MAT法检测钩体各型特异性抗体.结果 疫苗接种后,小鼠能够对各剂量产生免疫反应,抗-PA IgG抗体的最高平均抗体滴度为1:504,抗芽孢IgG抗体的最高平均抗体滴度为1:513.炭疽疫苗各个剂量组间抗体水平存在统计学差异(P<0.05);流感伤寒型抗体的最高平均抗体滴度为1:231,秋季型抗体的最高平均抗体滴度为1:610,钩体疫苗各型抗体各个剂量组间无统计学差异(P>0.05).结论 炭疽疫苗与钩体疫苗联合接种以炭疽疫苗人用剂量的1/10和钩体疫苗的人用剂量的1/5配伍最佳.
关键词: 联合接种     有效性     炭疽减毒活疫苗     钩端螺旋体疫苗    
Efficacy of simultaneous immunization of anthrax vaccine and leptospira vaccine
WANG Ya-yu, ZHANG Jing-xia, LI Dong-li,et al    
Department of Disease Control, Center for Disease Control and Prevention of Shenyang Military Area, People's Liberation Army Shenyang 110034, China
Abstract: Objective To evaluate the efficacy of the simultaneous immunization of anthrax vaccine and leptospira vaccine with animal experiment for the further use in large population.Methods Ninety-six mice were randomly divided into 6 groups and the number of male and female was equal.The mice were injected subcutaneously with different doses of the two vaccines.A combination of 1/10,1/20,and 1/40 dose of live attenuated anthrax vaccine and 1/5 and 1/3 dose of leptospira vaccine were administered to 5 groups and 1 group was employed as blank control.Blood samples were collected from tail vein every week for detecting the specific anti-protective antigen(PA) IgG and antibody of spore by indirect enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and the specific agglutinating antibody of leptospira vaccine by darkfield microscope agglutination test(MAT).Results IgG was induced in the mice inoculated with the live attenuated anthrax vaccine.The titers of anti-PA and anti-spore were 1:504 and 1:513,respectively.There was a significant difference in antibody titers between different groups.The average titers of gtippotyphosa and autumnalis were 1:231 and 1:610.There was no significant difference in specific agglutinating antibody of leptospira vaccine.Conclusion The optimal doses of simultaneous immunization of live attenuated anthrax vaccine and leptospira vaccine are 1/10 and 1/5 of human doses.
Key words: simultaneous immunization     efficacy     attenuated nthrax vaccine     leptospira vaccine    

联合免疫是目前世界疫苗发展的新趋势。联合免疫可以提高疫苗覆盖率和接种率,减少频繁的注射次数,提高接种者的依从性,节约管理成本和受种者的时间〔1, 2, 3〕,同时联合免疫也是防御生物恐怖袭击和生物武器的重要手段〔4〕。联合免疫具有很多优势,但也存在一些未知因素,不能任意进行联合免疫。为了探讨不同联合方案接种疫苗的有效性,为多种疫苗同时接种和人群疫苗联合接种提供理论依据,本实验选择 2种可能用于生物武器的炭疽减毒活疫苗和钩端螺旋体灭活疫苗,按照人用接种剂量的不同比例对小鼠进行联合免疫和强化免疫,观察2种疫苗不同剂量联合免疫的效果及最佳联合配伍方案,结果报告如下。

1 资料与方法 1.1 材料 1.1.1 疫苗

(1)皮上划痕人用炭疽减毒活疫苗:剂量0.25 mL,含菌1 × 109/mL,5人份/剂(兰州生物制品研究所,批号为20070102)。(2)钩体疫苗:三价菌苗(包括黄疸出血型,流感伤寒型,秋季型),剂量5 mL,每型含菌不小于1.5 × 108/mL (上海生物制品有限公司,批号为20070709)。

1.1.2 钩端螺旋体菌株及参考血清

钩端螺旋体菌株由中国疾病预防控制中心钩端螺旋体研究室提供;钩端螺旋体菌株参考血清(中国生物制品监督检验中心,批号为 20070908),各型抗体效价> 1:8 000,作为对照组。

1.1.3 实验动物

96只6~8周龄昆明鼠,18~22 g,雌雄各半,健康良好(质量合格证号:SCXK (军)2002-005号;第四军医大学实验动物中心)。饲养条件:自然光照明/暗=14/ 10 h,室温15~20℃。

1.2 方法 1.2.1 联合接种方案与强化免疫程序

96只小鼠以耳号为原始编号,采用分层随机分组方法分成6组,每组16只。炭疽疫苗采用人用剂量的1/10、1/20、1/40进行联合,钩体疫苗采用人用剂量的1/3、1/5进行联合〔5〕。每次均将疫苗稀释至 0.5 mL。各组首次免疫均采用炭疽减毒活疫苗+钩体三价菌苗联合接种,接种剂量分别为:第Ⅰ组2 × 107+7.5 × 107;第 Ⅱ组2 × 107+4.5 × 107;第Ⅲ组1 × 107+7.5 × 107;第Ⅳ组1 × 107+4.5 × 107;第Ⅴ组5 × 106+4.5 × 107。首次联合免疫后第10 d,各组强化免疫接种钩体三价菌苗,接种剂量依次为 1.5 × 108、9 × 107、1.5 × 108、9 × 107、9 × 107;第14 d各组强化免疫接种同一剂量的炭疽减毒活疫苗,分别为2 × 107、 2 × 107、1 × 107、1 × 107、5 × 106。第Ⅵ组为阴性对照,接种磷酸盐缓冲液(PBS)2次,每次0.5 mL;每种疫苗均在各组小鼠相同部位接种。

1.2.3 疫苗接种部位及方法

参照《中国药典》2005版(第三部分)〔6〕规定的疫苗免疫途径,在小鼠背部皮下注射进行疫苗接种,统一规定为炭疽疫苗为背部右侧皮下,钩体为背部左侧皮下。注射部位均剪毛以观察局部反应,并于初次免疫 0、14、28、42、56、90 d尾静脉采血,分离血清并保存于-20℃备用。

1.2.4 抗体检测

用间接ELISA法检测血清抗-PA IgG和抗芽孢IgG抗体〔5〕;采用暗视野显微镜凝集试验(MAT)法检测钩端螺旋体各型凝集抗体滴度。

1.3 统计分析

采用SPSS 13.0软件进行统计分析;对重复测量资料采用重复测量方差分析,多样本均数间两两比较采用q检验,P ＜ 0.05为组间差异有统计学意义。

2 结 果 2.1 联合免疫效果比较(表 1)
表 1 炭疽减毒活疫苗与钩体三价菌苗联合免疫后小鼠血清相应抗体变化(滴度1:)

联合免疫14 d时,各疫苗接种组小鼠血清中即可检出炭疽减毒活疫苗的血清抗-PA IgG抗体和抗芽孢IgG抗体,钩体三价菌苗的流感伤寒型抗体和秋季型抗体。2种疫苗强化免疫后,上述抗体滴度均明显升高。但钩体三价菌苗的黄疸出血型抗体滴度很低,故未进行统计分析。

2.2 2种疫苗不同接种剂量相应抗体水平比较(图 1、2)
图 1 不同剂量炭疽减毒活疫苗免疫后抗体滴度变化

图 2 不同剂量钩体三价菌苗免疫后抗体滴度变化

图 1可见,炭疽减毒活疫苗强化免疫后,2种特异性抗体明显升高,56 d时达到高峰。3个剂量组中,接种2 × 107(相当于人用剂量的1/10)的第Ⅰ、第Ⅱ组小鼠血清2种特异性抗体水平均高于其他2个剂量组,与1 × 107(相当于人用剂量的 1/20)和5 × 106(相当于人用剂量的1/40)剂量的另外3组进行两两比较,差异均有统计学意义(均P ＜ 0.05)。图 2可见,联合免疫后42 d时,钩体三价菌苗的流感伤寒型抗体和秋季型抗体滴度均达到高峰,然后抗体滴度缓慢下降。联合免疫钩体三价菌苗采用的2个剂量中,接种7.5 × 107(相当于人用剂量的1/3)的第Ⅰ、第Ⅲ组的2种特异性抗体随时间波动较小,产生的抗体滴度较高。观察小鼠免疫后状态可见,副作用较小;但与接种4.5 × 107(相当于人用剂量的1/5)的其他各组两两比较,差异均无统计学意义(P ＞ 0.05)。

3 讨 论

目前评价炭疽疫苗的效力实验必须在P3级以上实验室才能完成,一般的实验室不能达到相应的生物安全等级。本实验根据文献报道,机体抗PA抗体的水平与疫苗的保护率呈正相关,灭活的炭疽芽孢能够极大地提高基于PA的炭疽疫苗的保护效力,芽孢抗原加PA免疫能提供预防毒血症和感染的协同保护性免疫〔7, 8〕。因此,本实验采用ELISA方法对抗-PA IgG抗体和抗芽孢抗体进行检测来评价炭疽疫苗的免疫效果。

本研究结果显示,大部分免疫动物在初次免疫14 d即产生特异性抗-PA IgG抗体和抗芽孢IgG抗体,并随疫苗剂量的增加而升高。再次免疫后实验组动物血清中IgG抗体水平明显增加,并在整个观察期维持较高的抗体滴度。此结果与 Amanda等〔9〕将炭疽疫苗与鼠疫疫苗联合接种的研究结果一致。王秉翔等〔10〕研究表明,有PA和芽孢的炭疽减毒活疫苗接种后,抗芽孢IgG水平一般滴度应在1:200以上才能有较满意的协同保护力,然而本次实验中人用剂量的1/40联合剂量组和人用剂量的1/20联合剂量组的抗体滴度上升速度较慢,与 Wei等〔11〕报道的1/20剂量组能达到较高的抗体水平不同。

本实验钩端螺旋体疫苗的评价,采用国际公认的MAT法分别测定各型抗体。联合免疫后14d各剂量组均产生可测定的特异性抗体,免疫后1个月抗体滴度达高峰,免疫3个月后抗体滴度缓慢下降,与文献报道的单独接种的结果一致〔12〕。 1/5人用联合剂量组的抗体随时间波动较小,产生的抗体滴度高,副作用小,为进一步动物建模时剂量选定提供依据。

综上所述,炭疽疫苗人用剂量的1/10和钩体疫苗人用剂量的1/5是较适的联合接种配伍方案,其有效性较佳,提示采用2种疫苗的最佳剂量进行联合接种是可行的。

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