中国公共卫生  2011, Vol. 27 Issue (9): 1145-1147   PDF    
引用本文
刘煜德, 王嵩, 吴伟, 黄衍寿. 多重危险因素致小鼠动脉粥样硬化协同作用[J]. 中国公共卫生, 2011, 27(9): 1145-1147.
LIU Yu-de, WANG Song, WU Wei, et al. Influence of multiple risk factors on atherosclerosis in mice[J]. Chinese Journal of Public Health, 2011, 27(9): 1145-1147.
多重危险因素致小鼠动脉粥样硬化协同作用
刘煜德, 王嵩, 吴伟, 黄衍寿    
广州中医药大学第一附属医院心内科, 广东广州510405
收稿日期: 2010-06-03.
基金项目: 国家自然科学基金(30070938)
作者简介: 刘煜德(1973- ),男,广东饶平人,副研究员,博士,主要从事心脑血管疾病研究。
摘要: 目的 探讨多重危险因素对小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。方法 小鼠随机分为6组:空白对照组(A)、高脂组(B)、普食+CPn组(C)、高脂+CPn组(D)、普食+Cpn+蛋氨酸组(E)、高脂+CPn+蛋氨酸组(F),分别饲以相应饲料或接种CPn;采血检测血脂、取胸主动脉检测超微结构变化。结果 其他各组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血浆动脉硬化指数(AIP)明显高于A组(均P＜0.01),内皮细胞和平滑肌细胞不同程度受损伤;D组TC、LDL-C、ox-LDL明显高于B组(P＜0.05或P＜0.01);F组TC、ox-LDL明显高于B组(P＜0.05或P＜0.01);C组LDL-C明显高于A组(P＜0.05)。结论 CPn感染促使正常饮食小鼠血脂代谢紊乱,加重高脂饮食所致的血脂代谢紊乱;高脂、CPn、蛋氨酸可能协同促进动脉粥样硬化发生。
关键词: 危险因素     动脉粥样硬化    
Influence of multiple risk factors on atherosclerosis in mice
LIU Yu-de, WANG Song, WU Wei, et al    
Department of Cardiology, First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Gudngzhou 510405, China
Abstract: Objective To explore the influence of multiple risks on the generation and development of atherosclerosis.Methods Mice were randomly divided into 6 groups:normal(group A),high fat diet(group B),Chlamydia pneumoniae (CPn)(group C),high fat diet+CPn(group D),CPn+methionine(group F),high fat diet+CPn+methionine(group E).All the mice were fed with specific diet or inoculated with CPn.The blood of the mice was collected to detect the level of blood fat,and thoracic aorta was taken to observe ultra-structrue changes.Results Compared with group A,the level of total cholesterol(TC),tryglyceride(TG),and atherogenic index of plasma(AIP)in other groups was obviouslv higher (P < 0.01 for all).And the endothelial cells and smooth muscle cells in all groups except group A were damaged in some extent.Compared with group B,the level of TC,low density lipoprotein-cholesterol(LDL-C),and oxidized low density lipoprotein(ox-LDL)were higher(P < 0.05 or P < 0.01),and the level of TC,ox-LDL in grouo F were higher significantly (P < 0.05 or P < 0.01).The level of LDL-C in group C was obviously higher than that of in group A(P < 0.05).Conclusion CPn infection promotes the development of dyslipidosis and aggravates dyslipidosis induced by high fat diet.CPn and methionine can promote genesis and development of atherosclerosis in mice.
Key words: risk factor     atherosclerosis    

动脉粥样硬化是多重危险因素共同作用的结果,课题组前期研究表明,高脂饮食与肺炎衣原体(CPn)感染致动脉硬化具有协同作用〔1〕。研究表明,高蛋氨酸饮食对大鼠血管内皮细胞有明显的损伤作用〔2〕,体外实验也证实高同型半胱氨酸(Hcy)直接导致内皮细胞的氧化损伤〔3〕。为探讨多种危险因素共同作用在动脉粥样硬化发病中的作用,本研究以高脂、CPn感染、蛋氨酸饲料作为施加因素,从血脂紊乱、氧化应激等角度探讨危险因素共同作用对小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。结果报告如下。

1 材料与方法1.1 动物及饲料

8~10周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠30只,体重18~20g,购自第一军医大学实验动物中心,合格证号:2003A075,饲养于广州中医药大学第一附属医院清洁级动物房。高脂饲料配方〔4〕:在常规饲料中添加10%棕榈油、4%牛奶粉、2%胆固醇、0.4%胆酸钠;蛋氨酸饲料饲料配方:在基础饲料和高脂饲料中加入1%蛋氨酸,用于造成高同型半胱氨酸血症。以上饲料均由广东省实验动物中心配制。

1.2 细胞株及主要试剂

肺炎衣原体AR-39(美国华盛顿大学)。总胆固醇测定试剂盒,批号20051221;高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒,批号20051124;低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒,批号20051124;甘油三酯测定试剂盒,批号20051221(上海荣盛生物技术有限公司生产)。Mouse Serum ox-LDL ELISA试剂盒,批号02230401S(美国Rapidbio公司生产)。

1.3 造模方法及分组

适应性饲养1周后,小鼠随机分为6组:空白对照组(A组)、高脂组(B组)、普食+CPn组(C组)、高脂+CPn组(D组)、普食+CPn+蛋氨酸组(E组)、高脂+CPn+蛋氨酸组(F组),其中A、C、E组喂常规饲料,B、D、F组喂高脂饲料。C、D、E、F组从第2周开始,每2周接种1次CPn,共3次,接种方法参照前期实验〔5〕。第3次接种CPn1周后,E、F组开始饲以蛋氨酸饲料。第1次接种CPn16周后处死动物,室温下眼眶采血,3000r/min离心20min,取血清,贮存于-20℃备检。

1.4 主动脉电镜标本制作

取小鼠胸主动脉,剪取相同部位长度约0.3~0.5cm的血管段,置入4%戊二醛固定液中,常规处理后,透射电镜下观察摄片。

1.5 统计分析

数据均以x ± s表示,采用PEMS 3.1软件进行统计分析,各组间比较采用单因素方差分析。

2 结果2.1 各组血脂检测结果(表 1)
表 1 不同组别小鼠血脂指标检测结果(x ± s)

总胆固醇(TC)水平其他各组均明显高于A组(均P＜0.01),D、F组明显高于B组(均P＜0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平D组明显高于B组(P＜0.01),E组明显高于C组(P<0.05),F组明显高于D组(P＜0.01);低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平C、D、E组明显高于A组(分别为P＜0.01和P＜0.05),D组明显高B组(P＜0.01);甘油三酯(TG)水平其他各组均明显高于A组(均P＜0.01)。

2.2 血浆动脉硬化指数(AIP)和血清ox-LDL水平(表 2)
表 2 各组血浆动脉硬化指数和ox－LDL水平变化(x ± s)

与A组比较,其余各组血浆动脉硬化指数(AIP)均升高,D、E、F组有使AIP逐步升高的趋势;CPn、高脂饮食均可使AIP指数明显升高;ox-LDL水平D组明显高于A、B和C组,F组ox-LDL明显高于A和B组,而A、C、D组间差异无统计学意义。

2.3 主动脉超微结构改变(图 1)
图 1 各组主动脉超微结构变

A组内皮细胞较完整,未见明显损伤;B组内皮细胞突起、破坏,中膜见弹力纤维;C组平滑肌细胞线粒体破坏,平滑肌细胞空泡,核边缘不规则;D组平滑肌细胞空泡,内皮细胞突起、空泡;E组平滑肌细胞空泡多;F组内皮细胞表面不规则、突起。

3 讨论

有研究发现小而密的脂蛋白(sLDL)水平升高者冠心病或心肌梗死危险性明显增加,其作为预测冠心病危险性的指标比LDL-C更好,因直接测量LDL颗粒直径的技术复杂且费用昂贵,不利普及〔6〕;血浆动脉硬化指数即甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇的对数值与LDL颗粒直径有很好的相关性,通过测量血浆AIP可以得到一个简单、经济、实用的反映LDL颗粒直径的指标〔7〕。AIP升高表明LDL颗粒直径变小,sLDL所占的比例增高。血管内皮细胞损伤与动脉粥样硬化的发生发展关系密切〔8〕;ox-LDL对内皮细胞具有明显的细胞毒作用〔9〕,单核细胞源树突状细胞通过摄取ox-LDL形成泡沫细胞,在动脉粥样硬化发生中具有重要的作用〔10〕。本实验结果表明,CPn感染促使正常饮食小鼠血脂代谢紊乱,加重高脂饮食血脂代谢紊乱;饲蛋氨酸小鼠HDL-C明显高于未加蛋氨酸饲料者,其原因有待进一步探讨。

参考文献
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