黄曲霉毒素是具有极强致癌性的次生代谢产物,主要存在于粮油制品中。食品中黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法、酶联免疫法、液相色谱法等^{〔1, 2〕}。薄层色谱法操作繁琐,而酶联免疫法特异性差。本研究对粮食、坚果样品经乙腈-水进行净化提取,色谱柱纯化、浓缩、衍生,对黄曲霉毒素 B₁、B₂、G₁、G₂ 进行高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测。结果报告如下。

分析天平;Agilent1100高效液相色谱分析仪;净化萃取柱(美国Multisepromerlabs公司);黄曲霉素标准品;乙腈,HPLC专用;甲醇,HPLC专用;三氟乙酸;10mol/L乙酸铵溶液:0.77 g乙酸铵溶解于1 000 mL水中定容。

色谱柱:C₁₈ (4.6 mm × 150 mm,5 μm);柱温:40℃:检测器:G1321A荧光检测器;波长450 nm;流动相:乙腈;甲醇:水1:3:6;流速0.8 mL/min;进样量: 20 μL。

分别取1 mL黄曲霉毒素混合标准质量浓度分别为1.25、2.5、5、10 μg/L,氮气吹干,在加入0.1 mL三氟乙酸溶液,密封激烈振荡。室温黑暗处放置15 min,再准确加入0.9mL乙腈和水(V:V=9:1),离心,取上清液进行测定。

取5.0 g经粉碎的样品于50 mL的具塞离心试管中,加入10 mL乙腈和水,V (乙腈):V (水)=9:1,振荡30 min,离心。取约5 mL上清液,注入净化柱净化。弃去前1 mL,准确分取0.5 mL溶液,氮气吹干,除去溶剂。再加入0.1 mL三氟乙酸,蜜封激烈振荡,室温黑暗处放置15 min。再准确加入0.9 mL乙腈和水(V:V=9:1),离心,取上清液进样。

取5.0 g经粉碎的样品于50 mL的具塞离心试管中,加入40 mL乙腈和水,V (乙腈):V (水)=9:1,振荡30 min,离心。取约5 mL上清液,注入净化柱净化。弃去前1 mL,准确分取0.5 mL溶液,氮气吹干,除去溶剂。再加入0.1 mL三氟乙酸,密封激烈振荡,室温黑暗处放置15 min。再准确加入0.4 mL乙腈和水(V:V=9:1),离心,取上清液进样。

表 1

表 1 黄曲霉毒素混合标准液的线性关系

表 1 黄曲霉毒素混合标准液的线性关系

分别建立黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂ 的标准曲线,B₁、B₂、G₁、G₂ 的标准质量浓度与峰面积具有良好的线性关系。

粮食样品中分别加入 4.0 μg/L黄曲霉毒素B₁、G₁ ,1.0 μg/L黄曲霉毒素B₂、G₂。 坚果样品中分别加入2.0 μg/L黄曲霉毒素B₁、G₁ ,0 .5 μg/L 黄曲霉毒素B₂、G₂。实验结果表明:粮食的平均回收率为 80.7%~104.2%;坚果的平均回收率为78.5%~106.8%。相对标准偏差分别为2.26%、3.41%、6.40%、6.73%(n=5)。

本实验建立的高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素 B₁、B₂、G₁、G₂ 方法,样品前处理简单,净化效果好,灵敏度高,特异性强,线性范围广。样品添加回收,回收率在为78.5% ~106.8%,精密度＜ 10%。该方法适用于食品中黄曲霉毒素 B₁、B₂、G₁、G₂ 的检测,是一种较好的黄曲霉毒素检测的方法。