随着核技术在工农业、医学生命科学等方面应用的迅速 发展,人们与放射线接触的机会日益增多,遭受辐射损伤的可 能性随之增加。研究表明,虫草对辐射引起的小鼠免疫损伤 具有保护作用^{[1, 2]}。蛹虫草作为野生冬虫夏草的替代品之 一,含有和冬虫夏草类似的活性成分^[2],本研究于2009年采 用蛹虫草醇提取物对辐射前后不同时间小鼠体液免疫和遗传 物质的影响进行观察,以期为肿瘤患者放疗前后辅助用药和 放疗从业人员辅助防护提供科学依据。

全自动酶标仪(芬兰Labsystem s公司); 环 磷酰胺(上海华联制药有限公司,批号: 001106); 溶血素( 深 圳晶美公司); 2% 和20% 绵羊红细胞( SRBC ) 悬液自行制备 (生理盐水洗涤3次,2 000 r /m in,离心5 m in); 蛹虫草醇提取 物样品(珠海仙康有限公司),用纯净水配制成试验所需浓度 的样液。

N IH 种SPF级雌性健康小白鼠(广东省医学 实验动物中心),体重18~ 22 g,130 只。动物生产许可证号: SCXK(粤) 2008- 0002。喂饲颗粒饲料(南方医科大学验动物 中心) ,室温( 22±2) ℃ ,湿度60% ~ 80%。

动物分为3批,分别进行外周血白细胞计 数( 40只)、血清溶血素( 40只) 和小鼠骨髓细胞微核( 50只) 实验。外周血白细胞计数和血清溶血素试验: 随机将小鼠分 成辐射模型组和蛹虫草醇提取物低、中、高3个剂量组,每组 10只; 小鼠骨髓细胞微核实验: 随机将小鼠分成阴性对照、辐 射模型和蛹虫草醇提取物低、中、高3个剂量组,每组10只。 辐射模型组和蛹虫草醇提取物剂量组给予60 Coγ射线辐射强 度为3 Gy。低、中、高剂量组分别灌胃给予蛹虫草醇提取物 83. 3、166. 7、500. 0 m g /kg,阴性对照组、辐射模型组给予纯净 水,灌胃量为0. 3 mL /10g。

连续灌胃给予受试样品 35 d,于给予蛹虫草醇提取物22 d时将各组小鼠全身照射1 次。分别于照射前、照射后第3 d、照射后第14 d采末梢血 20 µL,加入0. 38 mL 1%盐酸中,混匀后,计数各剂量组白细 胞总数( 10⁹ /L)。

连续灌胃给予受试样品 25 d,于第22 d时将各组小鼠全身照射1次。于照射后第3 d 处死小鼠取胸骨骨髓材料制片、染色、镜检,求出各组微核率 并计算抑制率。

A (% ) =C- D/C- E×100%

式中 A 为抑制率,C为辐射模型组微核率,D为样品组 微核率,E 为阴性对照组微核率。

连续给予受试样品42 d, 于第22 d时,各剂量组与辐射模型组全身照射1次。于照射 后15 d每只小鼠腹腔注射2% 绵羊红细胞0. 2 mL,5 d后摘 除眼球采血,分离血清,用生理盐水将血清倍比稀释于微量反 应板内,各50 µL,加入0. 5% 的绵羊红细胞50 µL,混匀, 37 ℃ ,3 h,观察抗体凝集反应程度。

应用SPSS 10. 0软件进行单因素方差分析。

实验期间各剂量组 小鼠体重与辐射模型组及阴性对照组比较,差异均无统计学 意义,表明蛹虫草醇提取物对小鼠体重无明显影响。

照 射后3 d辐射模型组白细胞数与照射前比较明显降低,差异 有统计学意义( P ＜ 0. 05) ,表明辐射损伤模型成立; 照射后3 d高剂量蛹虫草醇提取物组白细胞数明显高于辐射模型组( P ＜ 0. 05)。

表 1 (Table 1)

表 1 不同组别小鼠外周血白细胞计数结果比较 组别(mg/kg) 白细胞计数(109/L) 辐照前 辐照后3d 辐照后14d 辐射模型组 7.6±1.1 0.6±0.2a 2.0±1.1 虫草提取物 低剂量 83.3 8.3±1.3 0.8±0.2 2.9±1.2 中剂量组 166.7 8.0±1.5 0.8±0.2 3.5±0.9b 高剂量组 500.0 7.5±0.9 1.1±0.5b 3.7±0.7b 注: 与辐照前比较, a P ＜ 0. 05; 与辐射模型组比较, b P ＜ 0. 05。

表 1 不同组别小鼠外周血白细胞计数结果比较

蛹虫草醇提 取物高、中、低剂量组小鼠抗体积数分别为( 87. 4±17. 5), ( 55. 8±21. 3)和( 47. 0±13. 0) ,与辐射模型组( 43. 8±15. 4) 比较,高剂量组明显升高,差异有统计学意义(P ＜ 0. 01)。

蛹虫草 醇提取物高、中、低剂量组小鼠骨髓细胞微核率降低,与辐射 模型比较差异均有统计学意义。

表 2 (Table 2)

表 2 不同组别小鼠骨髓微核率比较 剂量 (mg/kg) 微核数(个) 微核率(‰) 抑制率(%) 阴性对照组 14 1.4 - 辐射模型组 71 7.1a - 虫草提取物 低剂量 83.3 54 5.4a 29.8 中剂量 166.7 42 4.2ab 50.9 高剂量组 500.0 27 2.7ab 77.2 注: 计数嗜多染红细胞数10 000 个; 与阴性对照比较, aP ＜ 0.05; 与辐射模型组比较, b P ＜ 0.05。

表 2 不同组别小鼠骨髓微核率比较

辐射作用于机体后,造血功能低下或衰竭,白细胞、血小 板数明显减少,从而诱发感染、贫血、出血等并发症。近年研 究表明,蛹虫草( Cordy cep sm ilitaris link)中虫草多糖等多种有 效成分对网状内皮系统及巨噬细胞有明显激活作用,能促进 淋巴细胞转化,是一种非特异性免疫增强及调节剂,具有促进 造血功能、提高免疫力、抗癌、降血糖、降血脂等功效^{[4, 5, 6]}。

本研究结果表明,经60 Co γ射线( 3 Gy )全身照射3 d 后 小鼠每天经口灌胃给予虫草醇提取物,500 mg /kg 剂量组白 细胞数与辐射模型组比较明显升高(P ＜ 0. 01),表明受试样 品对辐射引起的白细胞数目减少有辅助保护作用。此外,各 蛹虫草醇提取物组小鼠骨髓细胞微核率与辐射模型组比较明 显降低( P ＜ 0. 01),500. 0 mg /kg 蛹虫草醇提取物组小鼠抗体 积数明显高于辐射模型组( P ＜ 0. 01),提示蛹虫草醇提取物 对γ射线照射引起的体液免疫损伤和遗传物质改变均有一定 保护作用。