中国公共卫生  2011, Vol. 27 Issue (5): 606-607   PDF    
引用本文
赵云鹤, 侯玉英, 岳慧萍, 赫燕侠, 侯丽萍, 郜亮, 李敏捷, 郭婧. 弓形虫感染致BALB/c小鼠生殖毒性作用[J]. 中国公共卫生, 2011, 27(5): 606-607.
ZHAO Yun-he, HOU Yu-ying, YUE Hui-ping, et al. Reproductive toxicity of Toxoplasma gondii infection in pregnant BALB/c mice[J]. Chinese Journal of Public Health, 2011, 27(5): 606-607.
弓形虫感染致BALB/c小鼠生殖毒性作用
赵云鹤1, 侯玉英1, 岳慧萍1, 赫燕侠1, 侯丽萍2, 郜亮1, 李敏捷1, 郭婧1    
1. 山西医科大学人体解剖学教研室, 山西太原030001;
2. 山西省煤炭中心医院妇产科
收稿日期: 2010-04-15.
基金项目: 山西省教育厅大学生创新基金(晋教高函[2009]5)
作者简介: 赵云鹤(1981- ),女,山西盂县人,讲师,硕士,研究方向:弓形虫感染与生殖毒理。
摘要: 目的 探讨不同剂量弓形虫感染对BALB/c小鼠的生殖毒性作用。方法 将50只受精鼠随机分为5组,每组10只;孕8 d,阴性对照组给予磷酸盐缓冲液,低、中、高剂量组腹腔注射50、100、200个/只纯化RH株弓形虫速殖子,阳性对照组给予环磷酰胺20 mg/kg;孕18 d观察孕鼠主要脏器及胚胎情况。结果 阳性对照组吸收胎率(19.6%)、死胎率(23.6%)、流产率(4.6%)、畸胎率(31.4%)与阴性对照组比较明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。弓形虫100、200个/只剂量组吸收胎率、死胎率、流产率分别为15.7%、8.2%、5.8%和28.9%、12.5%、15.1%,高于阴性对照组(P<0.05);200个/只剂量组活胎畸形率与阴性对照组比较(27.3%,0%)明显升高(P<0.01)。结论 100、200个/只纯化RH株刚地弓形虫速殖子孕中期感染可致BALB/c小鼠生殖毒性。
关键词: 弓形虫     生殖毒性     BALB/c小鼠    
Reproductive toxicity of Toxoplasma gondii infection in pregnant BALB/c mice
ZHAO Yun-he, HOU Yu-ying, YUE Hui-ping, et al    
Department of Anatomy, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China
Abstract: Objective To evaluate the reproductive toxicity of different degree Toxoplasma gondii infection on BALB/c mice.Methods Fertilized BAL B/c mice were divided into 5 groups randomly(10 in each group).On the 8th day of pergnancy,the negative control group was given aseptic phosphate buffer solution;the low,mode rate,and high dose expermient group were exposed to 50,100,200 Toxoplasma gondii tachyzoite ;sthe positive control group was exposed to cyclophosphamide at 8 th and 10th day of pregnancy.All the treamtents were administered with intrape ritoneal in jection.On the 18 th day of preg nancy,the conditions of preg nant mice and foetus were examined.Results Contrast with the negative control group,positive control group showed significant higher rates of foetusabsorption(19.6%),still birth(23.6%),abnormal embryo(4.6%),and teratism(31.4%)(P<0.05 for all).In mode rate dose group,the rate of foetus absorption,still birth,and abnormal embryo was 15.7%,8.2%,5.8% and those of the high dose group was 28.9%,12.5%,and 15.1%,respectively,with significant differences compared with those of the negative control group(P<0.05 for all).The teratism rate was obviously higher in high dose group than in the control(27.3% vs 0,P<0.01).Conclusion Infection with 100 or 200 RH Toxoplasma tachyzoite in the middle of gestational period induce reproductive toxicity in BALB/c mice.
Key words: Toxoplasma gondii     reproductive toxicity     BALB/c mice    


刚地弓形虫是一种感染率很高的机会性致病原虫,研究 和探讨其对宿主的生殖毒性作用,对降低新生儿畸形率、预防 和控制先天性弓形虫病、提高人类的身体素质具有重要意义。 不同宿主对弓形虫的易感性、感染后症状及转归不同[1, 2],本 实验选择孕8d BALB / c小鼠腹腔接种弓形虫速殖子,观察孕 鼠体重、主要脏器病理切片及胚胎情况等指标,探讨弓形虫感 染对孕鼠生殖功能影响,为建立弓形虫致生殖毒性动物模型 并进一步阐明其致病机制提供依据。

1 材料与方法 1.1 实验动物及虫株

清洁级BALB / c小鼠(中国医学科学 院实验动物研究所) ,雌雄鼠各50 只,在本实验室内饲养、繁 殖,保持近交,体重( 21. 0 ± 0. 5 ) g,9 ~ 10 周龄。RH 株弓形 虫速殖子(北京大学医学部寄生虫学教研室),本室液氮保 存,常规复苏后无菌接种BALB / c小鼠,转种3代,胰酶消化、 洗涤、计数。

1.2 主要试剂与仪器

环磷酰胺( 江苏恒瑞医药股份有限 公司); 胰蛋白酶(美国B io sharp公司) ; Bouins 液: 苦味酸饱 和液75份,甲醛20 份,冰醋酸5 份; 茜素红溶液: 冰醋酸5 mL、纯甘油10 mL、1%水合氯醛60 mL,将茜素红加入上液至 饱和,使用时用1% KOH 稀释成1‰ 的应用液; 透明液Ⅰ : 甘 油20份,2% KOH 3份,蒸馏水77份; 透明液II : 甘油50份, 2% KOH 3 份,蒸馏水47 份。AR5120 电子精密天平(上海梅 特勒- 托利多仪器有限公司),感量0. 01 g; pH 211 酸碱度离 子计( 意大利哈纳有限公司),BH-2 型光学显微镜( 日本 O lym pus公司)。

1.3 分组与处理

将BALB /c雌鼠与雄鼠1: 1合笼,次晨查 到阴栓者记为妊娠0 d,将受精鼠随机分为5 组,每组10只。 孕8 d 腹腔注射: 阴性对照组给予无菌磷酸盐缓冲液 0. 2 mL /只; 弓形虫低、中、高剂量组分别注射经胰酶纯化的 RH 株弓形虫速殖子50、100、200个/只; 阳性对照组孕8、10 d 各注射环磷酰胺20 m g /kg。

1.4 生殖毒性指标观察

孕18 d颈椎脱臼处死母鼠,暴露 子宫,观察胚胎颜色、外形( 粉红色为活胎; 黑色、紫色为死 胎; 未成形胚胎为早吸收胎、晚吸收胎)。将胎盘与胎鼠剥 离,称重。从头向肛门检查胎鼠外观有无畸形; 测量胎鼠身 长、尾长。从每个孕鼠的全部胎鼠中取1 /2,用Bou ins液固定 10 d,检查胎仔内脏。将余下的1/2 胎鼠置于95% 乙醇液固 定48h,移入1% KOH 溶液中,2 d 后去除内脏和脂肪,移入 1% KOH 溶液中透明3~ 5 d,至骨骼清楚,将胎仔移入茜素红 溶液至桃红色,移入透明液I、II液中各1 d,显微镜下观察各 部位骨骼形态有无异常。

1.5 统计分析

采用SPSS 13. 0软件进行分析,组间比较采 用方差分析和x2 检验,显著性水准α= 0. 05。

2 结 果 2.1 弓形虫对胚胎形成的影响(表 1)

与阴性对照组比较, 弓形虫50个/只组胎盘重量下降(P ＜ 0. 05) ; 100,200个/只 组着床数降低,活胎率、吸收胎、死胎率、流产率升高( P ＜ 0. 05),200个/只组胎盘重量明显降低(P ＜ 0. 01)。

表 1 弓形虫感染对胚胎形成的影响(n= 10)
2.2 弓形虫对胎鼠外观的影响(表 2)

与阴性对照组比较, 弓形虫50,100个/只组胎鼠体重下降( P ＜ 0. 05),胎鼠尾长 较短( P ＜ 0. 01); 200个/只组胎鼠体重、身长、尾长明显降低 ( P ＜ 0. 01)。弓形虫50,100,200个/只组和阳性对照组分别 有1~ 3例并趾、短尾,但差异无统计学意义(P > 0. 05) 。

表 2 弓形虫感染对胎鼠外观的影响(x±s)
2.3 致畸作用观察( 表 3)

阴性对照组比较,弓形虫200 个/只组孕鼠畸胎发生率,活胎畸形胎率均明显增高 ( P ＜ 0. 01)。

表 3 孕鼠畸胎发生率和活胎畸形率
3 讨 论

人类妊娠早期( 3个月)即器官发生期感染弓形虫所致的 先天性弓形虫病尤其严重,因此,本实验选择在BALB /c小鼠 孕8d即其器官发生期接种弓形虫进行研究[3]。若弓形虫致 母鼠毒性过大,可能导致母鼠损伤,从而对胚胎发育产生间接 不良影响,而观察不到弓形虫虫体对胚胎所致的生殖和发育 毒性作用,本实验中未观察到孕鼠的异常情况,表明染虫剂量 对母鼠造成的毒性不大[4, 5, 6]。100、200个/只纯化RH 株弓形 虫速殖子腹腔注射感染BALB / c孕鼠有抑制胚胎生长发育的 生殖毒性,可作为研究弓形虫生殖毒性作用较为理想的接种 方法和剂量选择[7]。

在此基础上,可采用凋亡检测、免疫荧光化学、分子生物 学等技术观察相关细胞因子在不同发育阶段胚胎损伤的表达 情况,用体外全胚胎培养技术排除干扰因素[8, 9, 10],探讨弓形 虫感染致生殖毒性的作用机制,为进一步预防和治疗弓形虫 病提供科学依据。

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