中国公共卫生  2011, Vol. 27 Issue (5): 558-560   PDF    
引用本文
刘燕, 杨静静, 喻荣斌, 王昊鹏, 王洁, 崔倩, 邓小昭, 张云. ApoB基因多态性与HCV感染易感性关系[J]. 中国公共卫生, 2011, 27(5): 558-560.
LIU Yan, YANG Jing-jing, YU Rong-bin, et al. Relationship between the polymorphism of apoliprotein B gene and hepatitis virus C infection[J]. Chinese Journal of Public Health, 2011, 27(5): 558-560.
ApoB基因多态性与HCV感染易感性关系
刘燕1, 杨静静2, 喻荣斌1, 王昊鹏1, 王洁1, 崔倩1, 邓小昭3, 张云1     
1. 南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计系, 江苏南京210029;
2. 河海大学校医院;
3. 南京军区军事医学研究所
收稿日期: 2010-05-28.
基金项目: 国家自然科学基金(81072343)
作者简介: 刘燕(1983- ),女,山西晋城人,硕士在读,主要从事传染性流行病研究。
通讯联系人: 张云,E-mail:zhangyun111@sohu.com
摘要: 目的 探讨载脂蛋白B(ApoB)基因单核苷酸多态性C-2488T和G-4154A在病例组与对照组的分布及与HCV感染的遗传易感性关联。方法 采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对190例HCV感染者和398例对照组人群进行C-2488T和G-4154A多态性检测,比较不同基因型与HCV感染易感性关系。结果 G-4154A位点病例组和对照组基因型为GG、GA、AA分别有160、27、3例和364、32、2例,基因型频率分别为84.2%、4.2%、1.6%和91.5%、8.0%、0.5%,差异有统计学意义(P<0.05);病例组和对照组等位基因为A、G分别有347、33例和760、34例,差异有统计学意义(P<0.05);C-2488T位点病例组和对照组基因型为CC、CT、TT分别有176、14、0例和357、40、1例,基因型频率分别为92.6%、7.4%、0.0%和89.7%、10.1%、0.3%,差异无统计学意义。结论 江苏省汉族人群ApoB基因多态性改变可能与HCV感染的遗传易感性有关。
关键词: 丙型肝炎病毒     载脂蛋白B基因     病例对照研究     多态性    
Relationship between the polymorphism of apoliprotein B gene and hepatitis virus C infection
LIU Yan, YANG Jing-jing, YU Rong-bin ,et al    
Department of Epidemiology and Health Statistics, School of Public Health, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China
Abstract: Objective To investigate the rela tionship between two functional polymorphisms of the A poB gene and in fection of hepatitis C virus(HCV).Methods PCR restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)technique was used to analyze the geno type of the A poB gene in 190 antiHCV positive hemodialysis patients(cases)and 398 anti-HCV negative hemodialysis patients frequency-matched to the cases by age and sex.Results The geno type frequency of GG,GA,and AA of G4154A was 84.2%,4.2%,and 1.6% for the cases and 91.5%,8.0%,and 0.5% for the controls with significant differences between the two groups(P<0.05 for all).The number of potients with A allele and G allele were 347 and 33 for the cases and 760 and 34 for the controls with significant difference bewteen the two groups.There was no significant difference in geno type frequency of C-2488T polymorphism bewteen cases and controls.Conclusion The results reveal that the polymorphism of the A poB gene may be associated with the susceptibility to HCV infection.
Key words: hepatitis virus C     apolipopro tein B gene     case control study     polymorphism    


丙型肝炎病毒( hepatitis v irus C,HCV ) 感染引起的丙型肝炎呈全球分布,不同地区、不同人群HCV 感染率差异较大[1],严重危害人们的健康[2],其机制尚不清楚,除与病毒本身有关,更重要的是与不同个体的遗传易感性有关。近年来发现,低密度脂蛋白受体( LDLR) 为HCV 受体之一,载脂蛋白B ( ApoB )既是低密度脂蛋白的组成成分,又是细胞表面低密度脂蛋白受体的配体[3],因此,其在HCV 的感染过程中起重要作用。于2008年1月- 2009 年1月采用病例对照研究方法,以江苏省汉族肾透析人群抗HCV 抗体阳性者和抗HCV 抗体阴性者为研究对象,探讨ApoB基因C-2488T 和G-4154A 位点多态性与HCV 感染易感性关系。

1 对象与方法 1.1 对象

均为江苏省相互间无血缘关系的汉族人群,190例抗HCV抗体阳性者为2008年1月- 2009年1月在江苏省人民医院、中医院肾透析中心就诊的患者,对照随机选自同时期抗HCV抗体阴性的肾透析人群,按相同地区(城乡)、相同性别和年龄(±5岁)与病例进行1:1匹配,所有患者均排除其他嗜肝病毒感染,采血前均未经干扰素治疗。调查员采用自制调查表收集并填写受检者的一般资料及临床资料,每一位受检对象均事先书面签署知情同意书。病例组男性123例,女性67 例,平均年龄为( 52.41±8.19) 岁; 对照组男性246例,女性152例,平均年龄为( 52.16±8.34) 岁; 病例组与对照组性别构成、平均年龄差异均无统计学意义。分别以性别、年龄特征进行分层[4],将研究对象分为青年组( ＜ 30 岁)、中年组( 30岁~ )、老年组(≥60岁)。

1.2 方法 1.2.1 采血

抽取研究对象静脉血5 mL,收集于乙二胺四乙酸二钠盐( EDTA )抗凝管中,- 20 冰箱中冻存。

1.2.2 基因组DNA提取

采用酚- 氯仿提取乙醇沉淀的方法[5]提取白细胞中的基因组DNA并作为PCR模板。

1.2.3 PCR扩增

运用软件Prim er Prem ier 5.0设计每个位点的PCR 扩增引物,引物由上海生工合成,C-2488T上游引物P1:5'-GGAGACTATTCAGAAGCTAA,下游引物P2:3'-GAAGAGCCTGAAGACTGACT,PCR 产物710 bp; G-4154A 上游引物P3:5'-CTGAGAGAAGTGTCTTCGAAG,下游引物P4:3'-CTCGAAAGGAAGTGTAATCAC,PCR 产物480 bp。按照试剂盒说明书进行PCR扩增,扩增程序: 95℃预变性5 m in,然后95℃变性30 s,C-2488T、G-4154A 2位点的退火温度分别为55.0、53.2℃,各40 s,72℃延伸30 s,进行30个循环,最后72℃延伸10 m in。

1.2.4 限制性片段长度多态性分析( RFLP)

分别采用限制性内切酶Xba I、Ecor I对C-2488T、G-4154A 2 个位点进行酶切,RFLP酶切体系按试剂说明书配制,取酶切产物5μL,以琼脂糖(含0 5 g /L溴乙啶)凝胶电泳分析,根据限制酶切电泳图谱确定基因型。

1.3 主要仪器与试剂

2×Easy Taq PCR SuperM ix、007 mg /mLDNA Marker(北京全式金生物技术有限公司); 限制性内切酶15 U /μLXba I、15 U /μL Eco r I(大连宝生物工程有限公司);750 g r /cm2 琼脂糖( 西班牙H ispanagar 公司)。PTC-200 型PCR仪(美国M J Research公司) ; EP5604 稳压稳流核酸电泳仪( 南京科宝仪器研究所); TGL-16G型台式高速离心机( 德国Eppendorf公司)。

1.4 统计分析

应用SPSS 11.5 统计软件进行x2检验、student-t检验、多因素非条件Log istic回归分析、分层分析、拟合优度x2 检验。

2 结 果 2 1 遗传学H a rdyW e inbe rg 平衡检验

本研究分别对对照组人群中的C-2488T、G-4154A 2位点3种基因型的频率进行遗传平衡检验,结果显示实际频数与理论频数分布的差异均无统计学意义( x12 = 0.012,P1 = 091; x22 = 1.900,P2 =0.17),说明该对照组人群2位点基因型频率分布均符合H ar-dy-W einberg 遗传平衡法则,具有人群代表性。

2.2 PCRRFLP结果分析(图 1,2)

( 1) C-2488T 位点酶切产物为433和277 bp 2段,其野生纯合型CC 酶切产物表现为710 bp 1条带,杂合型CT酶切产物表现为433、277、710 bp 3条带,突变纯合型TT酶切产物表现为433、277 bp 2条带,见图 1。( 2) G-4154A 位点酶切产物表现为253、227 bp 2段,野生纯合型GG 酶切产物表现为253、227 bp 2条带,杂合型GA酶切产物表现为253、227、480 bp 3条带,突变纯合型AA 酶切产物表现为480 bp 1条带,见图 2。

注:M: DNA marker; 1: 野生纯合型CC; 2: 突变纯合型TT; 3: 杂合型CT。 图 1 PCR 扩增ApoB片段经XbaI限制酶切后的琼脂糖凝胶电泳图谱

注:M: DNA marker; 1: 突变纯合型AA; 2: 野生纯合型GG; 3: 杂合型GA。 图 2 PCR 扩增ApoB片段经EcoRI限制酶切后的琼脂糖凝胶电泳图谱
2.3 病例组与对照组基因型分布及基因频率比较(表 1,2)

G-4154A位点多态性在病例组与对照组2 组间分布比较,差异有统计学意义( x2 = 3.677, P ＜ 0.05) ,GA→ GG 基因型频率 比较,差异有统计学意义(P = 0.016); 显性模型显示,携带变异基因型( GA+ AA)的个体与携带野生纯合子GG 的个体基因频率比较,差异有统计学意义( P = 0.008); G 等位基因频率在病例组与对照组间差异有统计学意义(P = 0.003)。对于C-2488T位点,各基因型、等位基因在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义。

表 1 ApoB基因2个位点基因型在病例组和对照组分布情况

表 2 ApoB基因2个位点等位基因在病例组和对照组分布情况
2.4 ApoB基因2个位点与H CV 感染的分层关联性分析

为进一步探讨2个位点多态性与HCV易感性的关系,分别以性别、年龄特征进行了分层。考虑多态性TT、AA 基因型存在频率较低,将杂合基因型CT 和纯合基因型TT 合并为一组,杂合子基因型GA和纯合子基因型AA合并为一组进行统计分析。结果表明,各层中C-2488T 基因频率分布差异均有统计学意义( P ＜ 0.05)。G-4154A 位点年龄分层结果表明,中年组GA+ AA、AA基因型在病例组与对照组频率分布差异有统计学意义( OR = 2.531,95% CI = 1.199 ~ 5.360,P ＜ 0.05),而青年组和老年组GA+ AA、AA基因频率在病例组与对照组分布差异无统计学意义; 性别分层结果表明,男性中GA+ AA、AA基因型分布差异有统计学意义( OR = 2.138,95%CI= 1.006 ~ 4.543,P ＜ 0.05),女性中差异无统计学意义。

3 讨 论

人类ApoB基因定位在第2号染色体短臂末端,ApoB 基因中的C-2488T、G-4154A 位点分别位于26、29 外显子,接近于与LDLR结合区[6]。多数研究证实,ApoB 基因Xba l位点多态性与血清脂质水平及ApoB 水平密切相关[7],G-4154A位点的多态性功能尚不清楚。本研究结果表明,江苏省汉族人群ApoB C-2488T位点基因型在病例组与对照组间的分布差异无统计学意义,与文献[8]结果一致,提示C-2488T位点的基因多态性可能与人群对H CV 的易感性间无必然联系。G-4154A位点多态性在病例组与对照组间的分布有统计学意义,分层分析后发现在男性或中年人人群中携带AA /GA 基因型者较携带GG基因型者对H CV的易感性增加,说明在这些特殊群体中,G-4154A 位点基因多态性对H CV 呈现一个较强的易感性。推测可能是G4154A 位点的基因突变影响了ApoB的功能和血清中ApoB的水平,进而对HCV感染的易感性产生了影响。综上所述,ApoB 基因多态性可能是HCV 遗传易感性的危险因素之一,但尚需在其他人群中予以证实; 同时功能性研究有助于深入研究遗传变异在H CV 感染中的作用机制。鉴于本研究病例组样本量相对较小,进一步研究需扩大样本量。

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