人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi) 以前命名为CDC vd 群Vd 1 和Vd 2，是一类革兰阴性杆菌，专性需氧，有动力，一般认为属于无色杆菌属^〔1〕。人苍白杆菌是一种条件致病菌，感染往往与患者局部或全身免疫功能低下有关，如创伤、 器官移植、使用抗肿瘤药物或免疫抑制剂等，可引起菌血症、 败血症、脑膜炎、筋膜炎和眼内发炎等多种病变^〔2〕。近年来对人苍白杆菌研究不断深入，目前多见由败血症病人血液中分离到人苍白杆菌的报道^{〔1, 2, 3〕}，由于人苍白杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性高，可导致人苍白杆菌引起的感染得不到合理药物治疗^〔3〕。因此，建立人苍白杆菌强选择性分离和鉴定的方法，为预防控制人苍白杆菌感染提供依据，本研究对 2009 年3 月－ 5 月分离自海南农贸市场淡水鱼中的21 株人苍白杆菌的培养特性、形态、生化及耐药性进行了分析。结果报告如下。

2009 年3 月11 日－ 5 月18 日，在海南省海口市农贸市场采集淡水鱼8 个品种166 份，记录鱼的种类、采样时间及地点。涂抹试子制作，杀鱼砧板或杀鱼刀具棉拭子标本采集，用无菌棉签反复擦拭，棉签沾满样品后装入无菌试管里，共采集棉拭子标本40 份。

麦康凯琼脂培养基(MAC) 、氧化酶试纸和营养琼脂培养基(广东环凯微生物科技有限公司) ; 头孢哌酮(32 mg /L) 、三糖铁培养基(TSI) 、尿素酶，精氨酸双水解酶肉汤(北京陆桥技术有限责任公司) ; 肠杆菌和其它革兰阴性杆菌鉴定系统API 20 E 生化鉴定卡(包括20 种生化反应试剂) ，VITEC 2 COMPACT 微生物生化鉴定卡(VITEC 2 GN，包括47 种生化反应试剂) 和VITEC 2 COMPACT 微生物药敏卡(AST-GN 10，包括19 种抗生素抗性实验) (法国生物梅里埃公司) ; 葡萄糖粉和过氧化氢溶液(广州化学试剂厂) 。 改良头孢哌酮麦康凯平板培养基配制: 加入1%葡萄糖到麦康凯琼脂培养基中，高压后冷却至50 ℃左右，加入32 mg /L 头孢哌酮，倾注平板。

采集的淡水鱼标本，在无菌操作下，用剪刀分别剪断鱼的中肠和后肠，将棉拭子插入肠道，旋转1 周，采集肠内容物，然后将棉拭子直接涂布在改良头孢哌酮麦康凯琼脂平板培养基，每个标本涂布2 块; 农贸市场杀鱼砧板及杀鱼刀具棉拭子标本直接涂布在改良头孢哌酮麦康凯琼脂平板培养基，分别置37 ℃温箱培养48 h; 同时接种血平板培养基，37 ℃ 培养48 h，观察菌落状态。

参照文献〔4〕，选取改良头孢哌酮麦康凯琼脂平板培养基生长呈无色透明、半透明圆形光滑菌落进行分纯培养鉴定。挑取可疑菌株接种于三糖铁培养基 (TSI) ，37 ℃ 24 h 培养后，选取其中未变色菌株，进行革兰染色后镜检，选取其中革兰阴性杆菌，接种于普通营养斜面培养基，37 ℃ 16 h 培养后，挑取菌苔进行氧化酶及过氧化氢酶实验，将其中氧化酶阳性及过氧化氢酶阳性菌株再分别转种尿素肉汤、精氨酸双水解酶肉汤培养基，37 ℃ 24 h 培养后，选取其中尿素酶阳性、精氨酸双水解酶阴性菌株，采用人工生化API 20 E 鉴定，在VITEC 2 COMPACT 仪器上进行VITEC2GN 生化鉴定和AST-GN 10 药敏测定。

采用AST-GN 10 进行药物敏感性测定，操作和判定标准按AST-GN10 说明书和药敏试剂条测定范围，以最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC) 观察人苍白杆菌对19 种抗生素的敏感性，MIC 越低表明越敏感。

淡水鱼采样166 份，砧板刀具涂抹棉试子40 份，共分离出人苍白杆菌21 株，分离率10.19%; 其中淡水鱼分离15 株，分离率为9.04%; 涂抹试子分离6 株，分离率为15.00%。

图 1

图 1 血平板48 h 培养生长的人苍白杆菌菌落

图 2

图 2 人苍白杆菌革兰染色镜检( 10 × 100)

表 1

表 1 19 种抗生素对人苍白杆菌最低抑菌浓度比较

表 1 19 种抗生素对人苍白杆菌最低抑菌浓度比较

人苍白杆菌在改良头孢哌酮麦康凯平板37 ℃培养48 h 后，菌落直径大小约2 mm、光滑、湿润、边缘整齐，呈无色透明或半透明状; 在血平板37 ℃培养48 h 后，菌落直径大小约2 ～ 3 mm、白色、光滑、湿润、粘液样，容易互相粘连(图 1) ; 镜检结果显示，菌体为革兰染色阴性短杆菌(较小) (图 2) ; 人工生化结果显示，半固体动力(+ ) ，硝酸盐还原(-) ，氧化酶(+ ) ，过氧化氢酶(+ ) ，七叶苷(+ ) ; API 20 E 24 h 生化鉴定结果显示，脲酶试验(+ ) ，3-羟基丁酮(+ ) ，其他均为阴性; VITEC 2 GN 鉴定结果显示，侧金盏花醇、吡咯烷基芳胺酶、L-脯氨酸芳胺酶、酪氨酸芳胺酶、尿素酶、D －塔塔糖、柠檬酸盐(钠) 、乳酸盐产碱、琥珀酸盐产碱、氨基乙酸芳胺酶、ELLMAN 氏反应均为阳性，其他反应均为阴性，鉴定为人苍白杆菌，生物编码为: 6000001321501001。

青霉素类和头孢类等β-内酰胺类抗生素对本研究所分离的人苍白杆菌的MIC 较高，四环素、左氧氟沙星、环丙沙星、美罗培南、亚胺培南等MIC 值尚处于较低水平。

研究显示，人苍白杆菌对β －内酰胺类抗生素耐药，头孢哌酮对人苍白杆菌无杀灭作用，并且对葡萄糖不利用^〔1〕。本研究在麦康凯琼脂培养基中加入抗生素头孢哌酮，可杀死部分非目标菌，而对人苍白杆菌没有影响; 加入葡萄糖，人苍白杆菌生长为无色透明或半透明菌落，能与利用葡萄糖后产色的非目标菌相区别。表明本研究所采用的改良头孢哌酮麦康凯琼脂平板培养基，可有效的分离培养人苍白杆菌落，有利于目的菌落挑选。人苍白杆菌对营养要求不高，在营养肉汤和葡萄糖肉汤中生长良好^〔4〕。因此，改良头孢哌酮麦康凯琼脂平板培养基可用于前增菌培养，分离人苍白杆菌。生化试验结果显示，人苍白杆菌生化主要特性是对糖类和醇类不利用，其氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶、七叶苷、动力试验等均为阳性，精氨酸双水解酶阴性，结合革兰染色和API 20 E 的结果，可有效判定是否为人苍白杆菌。

研究表明，人苍白杆菌的毒力并不强，但对青霉素类和头孢类等β －内酰胺类抗生素类药物有较强的耐药性，对左氧氟沙星、环丙沙星、美罗培南、亚胺培南等抗生素较为敏感^{〔1, 2, 3, 5〕}，本研究对人苍白杆菌药敏观察结果值与这些研究结果相吻合，提示对人苍白杆菌感染的患者应注意选择相应药物进行治疗。

实验表明，改良头孢哌酮麦康凯平板对人苍白杆菌的分离具有很强的选择性，非常适合有临床检验和卫生检验中对人苍白杆菌分离鉴定以及医院内感染对人苍白杆菌的监测。