近年来，随着广谱抗生素、激素及免疫抑制剂的大量应用，以及恶性肿瘤等免疫功能低下疾病发病的增加，假丝酵母菌感染呈持续上升趋势^{〔1, 2〕}，已成为住院患者院内感染及其死亡的主要原因之一^〔3〕。然而，随着反复大量使用抗真菌抗生素治疗，导致假丝酵母菌耐药的现象日趋普遍。因此，本研究观察分析了1 070 株假丝酵母菌临床分离株流行病学及其耐药性特点，以期为临床合理选择药物提供依据。

(1) 菌株来源: 收集南昌大学第一附属医院2005 年7 月- 2009 年6 月分离自临床各科室送检的痰、尿、阴道、 大便、引流液、血、伤口渗液和其他部位等标本的假丝酵母菌 1 070 株。质控菌株为克柔假丝酵母菌ATCC 6258 和近平滑假丝酵母菌ATCC 22019。(2) 试剂与仪器: 沙氏培养基(郑州博赛科技有限责任公司) ，CHROMagar 显色培养基(广州辉康公司) ，Vitek2 YST 鉴定条(法国生物梅里埃公司) ，RPMI 1640 培养基(美国GIBCO 公司) ，电热恒温培养箱(上海跃医疗器械厂) ，722S 可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司) ，96 孔U 型底培养板(海门盛邦实验器材厂) 。(3) 药品: 氟康唑(F8929-100M) ，5 -氟胞嘧啶(F7129-1G，美国Sigma公司) ，伊曲康唑(50 mg，中国药品生物制品检定所) 。

将标本直接接种于沙氏培养基，选择所有阳性菌落进行3 次分离纯化。采用假丝酵母菌 CHROMagar 显色培养基、Vitek2 YST 鉴定条方法进行假丝酵母菌临床菌株鉴定。

将受试菌在沙氏琼脂平板上转种2 次，以保证其纯度和活力，用无菌生理盐水制备成浊度为0.5 麦氏单位(1 × 10⁶ ～ 5 × 10⁶ CFU/mL) 的菌悬液。

将3 种抗真菌抗生素倍比稀释为10 个浓度，以微量加样器从低浓度到高浓度依次将药液加入无菌的8 × 12 孔U 型微量滴定板内，每孔100 μL，第11 孔为菌液阳性对照，第12 孔为无药空白对照，封口胶密封，- 20 ℃保存备用。

微量稀释法: 按照美国国家临床试验标准化研究所(CLSI) 推荐的《酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案第二版》(M27-A2) 方案^〔4〕的微量稀释法进行，将0.5 麦氏单位菌悬液用RPMI 1640 培养基稀释 1 000倍，加入制备好的最低抑菌浓度测定板中，每孔100 μL，菌液终浓度为0.5 × 103 ～ 2.5 × 103 CFU/mL。35 ℃ 孵育 48 h，观察结果。

参照CLSI M27-A2 方案^〔4〕，3 种抗真菌抗生素对假丝酵母菌的最低抑菌浓度(μg /mL) 判定标准: 氟康唑≤8; 5-氟胞嘧啶≤4; 伊曲康唑≤0.125 为敏感(S) 。 氟康唑16 ～ 32; 5-氟胞嘧啶8 ～ 16 为中介(Ⅰ) 。伊曲康唑 0.25 ～ 0.50 为剂量依赖敏感(S-DD) 。氟康唑≥64; 5-氟胞嘧啶≥32; 伊曲康唑≥1.0 为耐药(R) 。

采用SPSS 13.0 进行描述性统计分析。

分布共分离到假丝酵母菌1 070 株，其中分离自痰液标本584 株，占54.6%; 阴道分泌物326 株，占 30.5%; 尿样89 株，占8.3%; 血液25 株，占2.3%; 粪便23 株，占2.1%; 伤口渗液9 株，占0.8%; 引流液7 株，占0.7%; 其他部位标本7 株，占0.7%。

1 070 株假丝酵母菌分离株中，来自妇科326 株，占30.5%; 呼吸科212 株，占19.8%; 干部病房70 株，占6.5%; 肾内科51 株，占4.8%; 肿瘤科51 株，占4.8%; ICU 42 株，占3.9%; 其他科室318 株，占29.7%。

1 070 株假丝酵母菌中，白假丝酵母菌748 株，占69.9%; 光滑假丝酵母菌180 株，占16.8%; 热带假丝酵母菌60 株，占5.6%; 克柔假丝酵母菌38 株，占 3.6%; 近平滑假丝酵母菌13 株，占1.2%; 其他假丝酵母菌 31 株，占2.9%。

表 1

表 1 1 070 株假丝酵母菌分离株药物敏感性

表 1 1 070 株假丝酵母菌分离株药物敏感性

表 1 可见，1 070 株假丝酵母菌对氟康唑的敏感率为87.8%，对5-氟胞嘧啶的敏感率为 99.5%，对伊曲康唑的敏感率为40.3%。

国内多家医院假丝酵母菌分离结果显示，白假丝酵母菌的比例为50% ～ 70%^{〔5, 6, 7〕}。本研究结果显示，白假丝酵母菌仍然是最主要和最常见的致病菌，在所有假丝酵母菌感染中占69.9%，其次为光滑假丝酵母菌(16.8%) 和热带假丝酵母菌(5.6%) ，与上述报道基本一致。假丝酵母菌主要分离自痰液标本和阴道分泌物，分别占56.4%和30.5%，可见临床上假丝酵母菌感染以呼吸道感染为主，与国内文献报道一致^{〔8, 9〕}。这可能与假丝酵母菌通常存在于口腔、呼吸道、肠道及阴道粘膜上皮有关。假丝酵母菌主要在妇科患者中检出，主要是因为假丝酵母菌为阴道粘膜上皮正常寄居菌，在机体抵抗力下降、阴道内酸碱度改变、长期服用避孕药、不健康生活习惯、滥用抗生素和妊娠、人工流产等特殊状况下，会引起假丝酵母菌优势繁殖而致病。同时，假丝酵母菌在呼吸科、干部病房、肾内科、肿瘤和重症监护病房等科室的检出率也较高，共占39.8%，主要是由于这些科室的患者多半以老年慢性病患者为主，该类患者一般病情危重、免疫功能低下及长期使用抗生素和激素治疗，从而导致其体内微生态平衡紊乱。

本研究药物敏感试验结果显示，5 -氟胞嘧啶的抗真菌活性最强，除0.7%的白假丝酵母菌对其耐药以外，其余真菌均敏感。本研究中氟康唑对白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和近平滑假丝酵母菌均有强大的抗菌活性，但是光滑假丝酵母菌对氟康唑的敏感性较低，仅为85%，这与马均宝等^〔10〕报道一致。伊曲康唑抗真菌活性最低，假丝酵母菌的耐药率达到 34.5%，敏感率仅为40.3%，这可能是由于长期反复、大剂量应用伊曲康唑，造成假丝酵母菌产生了耐药性。

本研究结果与有关文献报道不尽相同^〔11〕，这与各地区易感菌株分布不同及用药习惯不同有关。因此，在临床上监测真菌的药物敏感性是非常必要的，它有助于指导临床合理选用药物和积极有效的治疗假丝酵母菌感染，并有利于减少医源性感染的机会，从而有效的降低假丝酵母菌感染给人类带来的危害。