2. 吉林大学第一医院
高同型半胱氨酸血症(hyperhomecysteinemia,Hhcy) 是引发动脉粥样硬化及心脑血管疾病的非传统病因之一。麦门冬又名麦冬,是百合科植物麦冬的干燥块根。含有甾体皂苷、高异黄酮、β -谷甾醇、糖类。有多种药理作用,在心血管系统有抗心律失常和抗心肌缺血的作用〔1, 2, 3〕。为寻找有效的防治药物,同时探讨相关药物的防治机制,本研究通过复制Hhcy 大鼠模型,观察麦门冬多糖对Hhcy 大鼠心肌缺血再灌注的防治作用。
1 材料与方法 1.1 材料(1) 实验动物及饲料: 8 周龄(体重190 ~ 210 g) SD 大鼠(沈阳医学院实验动物中心) 。实验动物许可证号: SCXK(辽) 2003-0016。饲料为繁育鼠全价固体颗粒饲料(沈阳市于洪区前民动物饲料厂) 。(2) 药品及试剂: L-半胱氨酸(美国Sigma 公司) 。肌酸激酶(creatine kinase,CK) 、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH) 、钠钾ATP 酶(Na + /K +-ATPase) 、考马斯亮兰、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy) 测定试剂盒(南京建成生物工程研究所) 。麦门冬多糖(北京普惠天悦生物科技有限公司) 。(3) 主要仪器: RM6240 多道生理信号采集系统(成都仪器厂) 。UV-265FW 紫外分光光度计(日本光电工业株式会社) 。JW-I 型微型人工呼吸机(第二军医大学) 。A5082 酶标仪(泰灿奥地利有限责任公司) 。
1.2 方法取SD 大鼠30 只,随机分为3 组,每组10 只,雌雄各半。正常对照组,每天腹腔注射生理盐水5 mL/kg; Hhcy 模型组,每天腹腔注射2% L-半胱氨酸5 mL/kg; 麦门冬多糖干预组,每天腹腔注射2% L-半胱氨酸5 mL/kg,灌胃给予麦门冬多糖。所有大鼠均饲以常规动物饲料和水。连续给药10 周,10 周后于末次给药30min 后腹腔注射戊巴比妥钠 (30 mg /kg) ,麻醉后气管插管安装呼吸机,开胸结扎冠状动脉左室降支60 min 后松开结扎线再灌注60 min。各组标Ⅱ导联全程记录心电图(参数: 80 ms /div,1mV,1s,100 Hz) ,并于再灌注60 min 后取血、心脏。分离血清,生理盐水10%心肌组织匀浆,3 000 r /min 离心15 min,取上清液。血清及心肌组织匀浆上清液按照测定试剂盒操作说明书测定CK、LDH、 Na + /K+-ATPase、组织蛋白、同型半胱氨酸。
1.3 统计分析实验数据计量结果以x±s 表示,采用SPSS 12.0 软件进行统计分析,组间比较采用t 检验。
2 结 果 2.1 心肌缺血再灌注心电图变化(表 1)| 表 1 麦门冬多糖对Hhcy 大鼠心肌缺血再灌注心电图PP 间期、R 波、ST 段的影响(x±s,n = 10) |
各组大鼠结扎冠状动脉左室降支60 min 后及松开结扎线再灌注60 min 后均表现为R 波下降,ST 段抬高并与T 波融合为单项曲线,其中 Hhcy 模型组、麦门冬多糖干预组PP 间期延长; 正常对照组 PP 间期无明显变化。R 波下降、PP 间期延长各组间存在明显差异。Hhcy 模型组出现4 例心律失常,主要表现为心律不齐及PQ、QRS、QT 间期延长的广泛传导阻滞。
2.2 血清同型半胱氨酸变化(表 2)| 表 2 麦门冬多糖对Hhcy 大鼠心肌缺血再灌注血清CK、 LDH、心肌Na + /K + - ATPase 影响(x±s,n = 10) |
SD 大鼠腹腔注射2% L -半胱氨酸5ml /kg 10 周后,Hhcy 模型组和麦门冬干预组大鼠血清同型半胱氨酸明显增高。
2.3 心肌缺血再灌注CK、LDH、Na+ /K+-ATPase 变化(表 2)Hhcy 模型组大鼠血清CK、LDH 明显高于正常对照组,心肌Na + /K +-ATPase 低于正常对照组。麦门冬多糖干预组大鼠血清CK、LDH 明显低于Hhcy 模型组,心肌Na + /K +-ATPase 高于Hhcy 组。
3 讨 论Hhcy 作为心脑血管疾病发病的独立危险因素已被大量的动物实验及临床试验证实,Hhcy 加重缺血再灌注损伤的机制尚未完全明确,可能与血管损伤、促进氧化应激作用、增加钙的细胞毒性作用、引起线粒体功能障碍、加重兴奋性氨基酸毒性及促进DNA 的损伤等多种因素有关〔4, 5, 6〕。本实验表明,高同型半胱氨酸血症大鼠心肌缺血再灌注后的损伤明显较正常大鼠加重; 麦门冬多糖对Hcy 的代谢有降低血中Hcy 含量的趋势,但无明显差异。
| 〔1〕 | 徐德生,冯怡,周跃华,等.麦冬多糖中抗急性心肌缺血活性部位研究[J].中成药,2004,26(10):832-837. |
| 〔2〕 | 周跃华,徐德生,冯怡,等.麦冬提取物对小鼠营养血流量的影响[J].中国实验方剂学杂志,2003,9(1):22-24. |
| 〔3〕 | 程金波,卫洪昌,章忱,等.麦冬提取物抗犬心肌缺血的药效学实验研究[J].中国病理生理杂志,2001,17(8):810. |
| 〔4〕 | 宋光熠,黄波,董瑶,等.硫酸软骨素对高同型半胱氨酸血症过氧化影响[J].中国公共卫生,2008,24(5):603. |
| 〔5〕 | 姜雅秋,宋光熠,谭岩,等.高同型半胱氨酸血症致动脉粥样硬化的实验研究[J].中国老年学杂志,2007,27(22):2169-2170. |
| 〔6〕 | 王静.高同型半胱氨酸血症与脑缺血再灌注损伤关系的研究进展[J].中华临床医学实践杂志,2007,6(6):409-411. |
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