光氧化应激诱导感光细胞凋亡是视网膜光化学损伤 (RPD) 的主要病理机制^{〔1, 2〕}。研究显示，应用多种抗氧化剂或自由基清除剂均能在一定程度上降低光氧化应激，抑制感光细胞凋亡，防护RPD 病变^{〔3, 4〕}。花青素(anthocyanidins，ACs) 是具有较强抗氧化和抗凋亡能力的植物多酚类化合物^〔5〕。有研究提示ACs 在体内可能通过其较强的抗氧化作用有效防护RPD。本实验探讨黑米皮花青素(anthocyaninsrich extract from black rice，BRACs) 对视网膜光化学损伤 (RPD) 的保护效应与抗氧化能力的关系。

BRACs(中山大学凌文华教授惠赠) ; 托吡胩胺滴眼液(武汉五景药业有限公司) ; 丙二醛(MDA) 、超氧化物歧化酶(SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 、谷胱甘肽转移酶(GST) 试剂盒(南京建成生物工程研究所) ; CMC-I 型辐照仪、ST-80 型数字式照度计(本课题组与西南大学联合研制) 。 日立H-600IV 型透射电镜(四川大学华西医学检测所) 。

清洁级SD 大鼠(四川省医学科学院实验动物研究所) 60 只，鼠龄7 周，体重(180 ± 20) g，雌雄不限。适应性喂养1 周。

大鼠随机分为3 组: 对照组 (n = 10) ，光照组(n = 25) 给予(3 000 ± 200) lx 白色荧光持续光照24 h，BRACs 干预组(n = 25) 每天100 mg/kg BRACs 灌胃1 次，连续15 d，再给予(3 000 ± 200) lx 白色荧光持续光照 24 h。每日观察大鼠体态、进食、饮水、活动和粪便情况，密切关注眼睛是否存在红肿、感染等症状，观察日进食量和体重。

大鼠乙醚麻醉，迅速摘除眼球，将眼球置于10%福尔马林液中固定24 h，然后常规脱水，浸蜡、石蜡包埋，经视神经矢状纵切眼球，制成5 μm 石蜡切片，常规苏木素－伊红染色，光镜下观察视网膜形态结构。

大鼠乙醚麻醉，迅速摘除眼球，置于2.5%戊二醛预固定，1%四氧锇酸再固定，丙酮逐级脱水，Epon812 包埋，半薄切片光学定位，超薄切片，醋酸铀及枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察。大鼠乙醚麻醉，眼眶采血，肝素抗凝，低速离心(3 500 r/min，10 min) ，取上清，MDA、 SOD、GSH-Px、GST 测定按照测试盒说明书进行。

数据采用SPSS 13.0 软件分析，单因素方差分析比较组间差异，显著性水平为P ＜ 0.05。

各组大鼠未出现异常情况，活动正常，皮毛光滑，眼睛无红肿或者分泌物增多等感染体征，粪便颜色、形态正常。组间摄食量差异无统计学意义(P ＞ 0.05) 。实验期间，各组大鼠体重差异无统计学意义(P ＞ 0.05) 。

对照组大鼠视网膜层次分明，感光细胞排列整齐紧密，胞核染色浓密均匀，内外节整齐，分界清晰。光照组大鼠视网膜内外节紊乱，外核层变薄，感光细胞排列疏松，胞核染色浓淡不均，部分呈空泡状，内核层细胞排列疏松。而BRACs 干预组大鼠视网膜结构破坏较轻，感光细胞及内外节排列基本整齐有序，内核层未见明显改变。

对照组感光细胞外节盘膜排列紧密整齐，内节线粒体丰富正常，细胞核形态饱满，核质均匀浓染。光照组感光细胞外节盘膜排列紊乱，膜盘空泡较重，内节线粒体重度肿胀，细胞核萎缩，核质染色不均。而BRACs 组外节排列紊乱程度减轻，膜盘亦有轻度空泡，而内节排列较整齐，内节部分线粒体轻度肿胀，细胞核轻微收缩，核质染色基本均匀。

表 1

表 1 大鼠血液中MDA含量、SOD/GSH-Px/GST活性测定结果

表 1 大鼠血液中MDA含量、SOD/GSH-Px/GST活性测定结果

光照组MDA 含量明显增加(P ＜ 0.01) ，BRACs 干预组明显低于光照组(P ＜ 0.01) ; 光照导致SOD 和GST 活性升高(P ＜ 0.05) ; 而BRACs 干预组的SOD、GSH-Px 和GST 活性明显高于对照组和光照组(P ＜ 0.01) 。

BRACs 的抗氧化效能高于β-胡萝卜素、VE、VC、以及 VE + VC 的联合应用^{〔6, 7, 8〕}。Matsunaga 等^{〔9, 10〕}新近研究发现，越桔花青素能通过其抗氧化特性防护小鼠视网膜形态结构的损伤。本研究采取灌胃法补充BRACs，结果表明BRACs 有效防护RPD 视网膜形态结构的完整性，并能减少视网膜血中脂质过氧化产物MDA 含量。

SOD、GSH-Px 和GST 都是机体重要的抗氧化酶，在终止脂质过氧化级联反应、清除体内活性氧介质(reactive oxygen species，ROS) 过程中起着重要作用。研究发现，膳食牛磺酸可升高RPD 视网膜中抗氧化酶SOD、GSH-Px 的活性，对RPD 产生一定的保护效应^〔3〕。Lee J 等^{〔11, 12〕}研究证实，ACs 能诱导机体产生SOD，增强机体的抗氧化能力。本研究结果表明 BRACs 干预后能显著升高光照后SOD、GSH-Px 和GST 活性。 结合组织学结果，推测BRACs 阻遏了RPD 进程中的氧化应激，减轻视网膜损伤。