浒苔(Enteromorpha prolifera) 是绿藻门，绿藻纲，石莼目，浒苔属藻类植物。属于全球性水域生物，它广泛地分布于河口、中潮带石沼中，是一种重要的经济海藻，但其爆发可影响海底其他生物生长，死亡浒苔还会消耗海水中氧气，使养殖贝类绝灭^[1]，大量繁殖还会严重影响景观，干扰旅游观光和水上运动的进行。浒苔自古即为食用和药用藻类，是一种高蛋白、高膳食纤维、低脂肪食品，同时，还具有较高药用价值。研究认为，浒苔提取物具有较好的抑菌活性和抗病毒活性，可以提高免疫力和抑制Ehrlich 氏腹水癌和皮肤癌等作用^[2]。本研究以浒苔多糖(Enteromorpha prolifera’s polysaccharide，EP) 为原料，探讨其抗实验性肝癌作用及机制，为开发和利用浒苔深加工产品提供依据。

浒苔多糖(本研究室采用水提醇沉法制备) 样品含可溶性多糖57.2%，基础饲料参照国家标准配置^[3]; 白细胞介素－ 2(interleukin-2，IL-2) ，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF) 、转化生长因子-β (transforming growth factor ，TGF-β) ，ELISA 试剂盒(美国ADL 公司) ; 五氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU) (江苏恒瑞医药股份有限公司) ; 小鼠肝癌H22细胞(北京市肿瘤医院) 。MP200A 电子天平(上海精密科学仪器有限公司) ; 杜邦AR 全自动生化分析仪(美国Dade Behring 公司) ; Thermo Labsystems MK3 酶标仪(芬兰雷勃公司) 。

昆明种小鼠(福建医科大学实验动物中心) ，5 只，雄性，6 ～ 8 周龄，18 ～ 22 g; BALB/C 小鼠(中科院上海实验动物中心) 60 只，雄性，6 ～ 8 周龄，18 ～ 22 g，许可证号为SCXK(沪) 2003-0003。随机分为6 组: 对照组，荷瘤模型组，5-FU 组，浒苔多糖低、中、高剂量组，每组10 只。小鼠置于塑料笼喂养，每笼5 只，自由饮水和摄食，动物房室温20 ～ 25 ℃，相对湿度60% ～ 80%。

小鼠肝癌H22细胞经昆明种小鼠腹腔传代。无菌抽取乳白色腹水，显微镜下细胞计数，台盼蓝染色检测肿瘤细胞存活率＞ 95%。RPMI-1640 培养基调整细胞密度为5 × 107 个/mL，荷瘤模型组、5- FU 组、浒苔多糖低、中、高剂量组小鼠，于右侧腋窝皮下注射 0.2 mL 的肝癌H22细胞接种液，对照组注射0.2 mL生理盐水。

从接种H22细胞后第3 d 开始，对照组与荷瘤模型组以蒸馏水灌胃，5-FU 组以20 mg /kg 的5-FU 溶液灌胃，浒苔多糖低、中、高剂量组分别以200、400、800 mg /kg 浒苔多糖水溶液灌胃，灌胃容量均为0.1mL/10g 体重，每天1 次，连续10d。各组均喂食基础饲料，自由摄食饮水，每日观察小鼠一般情况，测量小鼠体重。灌胃第10d 晚上，禁食不禁水12h，次日，小鼠脱颈椎处死，称重后摘眼球取血，剥离瘤块并取脾。

小鼠体质量、瘤质量、抑瘤率: 连续灌胃10d 后，称取小鼠体重，处死后完整剥离肿瘤，用电子天平称取瘤质量。抑瘤率(%) = (模型组瘤重－实验组瘤重) × 100% /模型组瘤重; 血清中IL-2、VEGF 和TGF-β 检测采用双抗体夹心ELISA 法，严格按照试剂盒说明书操作。

采用统计软件SPSS 11.0 对数据进行相关分析和处理，资料先经正态分布和方差齐性检验，方差齐采用单因素方差分析和多变量检验Hotelling T2 检验，组间差异两两比较采用最小显著差法。P ﹤0.05 为有统计学意义。

接种H22瘤细胞后初期，小鼠生活状态无明显变化，随着时间延长，接种肿瘤细胞的荷瘤组小鼠食欲减退，活动减少，被毛光泽度降低，4 d 后，接种肿瘤细胞的各组小鼠腋窝下逐渐出现肿胀，日渐胀大，约至6d 肉眼可见较大肿块。浒苔多糖高剂量组小鼠腋窝肿胀度明显小于荷瘤模型组。荷瘤模型组2 只小鼠失明。

浒苔多糖低、中、高剂量组抑瘤率分别为16.9%、49.1% 和53.1%，5-FU 组抑瘤率为 21.2%; 浒苔多糖中、高剂量组的瘤重低于5-FU 组(F = 958.14，P ﹤0.05) ，提示浒苔多糖中、高剂量组抑瘤效果优于 5-FU 组，浒苔多糖在一定剂量时可以起到与常规化疗药物相当的抑瘤作用，且副作用低。

表 1

表 1 各组小鼠血清细胞因子含量比较(x±s，n = 10)

表 1 各组小鼠血清细胞因子含量比较(x±s，n = 10)

荷瘤模型组与对照组小鼠血清中细胞因子各指标均有差异 (F = 32559.59，P ﹤0.05) ，模型建立成功。与5-FU 组比较，浒苔多糖低、中、高剂量组可提高IL-2、VEGF 水平，低、中剂量组可提高TGF-β 水平(F = 36.14，P ﹤0.05) 。与模型组比较，浒苔多糖中、高剂量组可分别提高IL-2 水平9.0% 和 45.5%; 高剂量组可降低TGF-β 水平46.6%; 低、中、高剂量浒苔多糖组可分别降低VEGF 水平28.1%、43.1% 和 47.9%。

本实验结果显示，浒苔多糖对荷瘤小鼠肿瘤生长有明显抑制作用，其抑瘤效果甚至优于常规抗肿瘤药物5-FU，其抑瘤机制较复杂，其作用途经可能为，(1) 直接抑制肿瘤，多糖可从基因水平抑制肿瘤发展^[4]，也可从肿瘤细胞生长周期和诱导肿瘤细胞凋亡而产生作用^[5]。(2) 提高IL-2 水平，IL-2 是激活细胞毒性T 淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte，CTL) 、巨噬细胞和B 淋巴细胞，促进自然杀伤细胞(natural killer，NK) 产生干扰素，诱导淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine activated killer cells，LAK) 及肿瘤坏死因子的产生与释放，增强机体免疫功能的重要因素，是免疫调节网络中核心物质，在抗肿瘤免疫调节中起重要作用^[6]。(3) 降低VEGF 水平，VEGF 具有高度特异和有效促新生血管形成作用。肿瘤生长和转移依赖于血管生成，降低VEGF 表达，有助于抑制肿瘤血管生成，从而影响肿瘤生长和抑制肿瘤转移^{[7, 8, 9]}。(4) 降低TGF-β 水平，TGF-β 在肿瘤患者体内过度表达，与患者生存期、不良预后密切相关^[10]。因TGF-β1 是一个有效生长抑制因子，可抑制Th1、NK 细胞、细胞毒性T 细胞、CTL 细胞等增殖、分化和活化，拮抗IL-2 对免疫活性细胞促增殖作用，抑制IL-2 受体表达^{[11, 12, 13]}。同时，TGF-β1 能够刺激肿瘤内血管形成，阻断 TGF-β1，可以减少新生血管形成^[14]。