中国公共卫生  2011, Vol. 27 Issue (3): 337-338   PDF    
引用本文
张涛, 迟晓星, 郭艳萍, 高广信. 大豆异黄酮对大鼠卵巢Bcl-2和Bax蛋白表达影响[J]. 中国公共卫生, 2011, 27(3): 337-338.
ZHANG Tao, CHI Xiao-xing, GUO Yan-ping, et al. Effect of soy isoflavone on levels of bcl-2 and bax in ovary of small female rat[J]. Chinese Journal of Public Health, 2011, 27(3): 337-338.
大豆异黄酮对大鼠卵巢Bcl-2和Bax蛋白表达影响
张涛1, 迟晓星2, 郭艳萍1, 高广信1     
1. 哈尔滨医科大学大庆校区预防医学教研室 黑龙江 大庆 163319;
2. 黑龙江八一农垦大学
收稿日期: 2010-04-09.
基金项目: 黑龙江省教育厅资助课题(11531214);黑龙江省青年科学基金(QC08C42)
作者简介: 张涛(1977- ),男,黑龙江大庆人,讲师,博士,主要从事预防医学及大豆活性研究。
摘要: 目的 通过动物实验研究,观察B-cell lymphoma 2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2-associated X protein(Bax蛋白)在大鼠卵巢组织中的表达情况。方法 选用2月龄Wistar雌性大鼠50只,按体重随机分成5组:空白对照组(基础饲料),大豆异黄酮低、中、高剂量组[含量分别为100、200、300 mg/(kg.bw)]、雌激素组(EC)(己烯雌酚0.5 mg/kg),实验周期为7周;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠卵巢组织中Bcl-2蛋白和Bax蛋白水平。结果 空白对照组、大豆异黄酮低、中、高剂量组、雌激素组Bcl-2蛋白浓度分别为(1.41±0.19)、(1.43±0.20)、(2.07±0.58)、(2.42±0.32)、(2.95±0.78)pg/mL,组间差异均无统计学意义;Bax蛋白浓度分别为(33.64±5.83)、(30.02±9.44)、(17.33±4.21)、(9.67±1.95)、(10.69±4.95)pg/mL,其中大豆异黄酮高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 大豆异黄酮可抑制大鼠Bax蛋白表达,对Bcl-2蛋白表达无影响。
关键词: 大豆异黄酮     青年雌性大鼠     卵巢组织     Bcl-2蛋白     Bax蛋白    
Effect of soy isoflavone on levels of bcl-2 and bax in ovary of small female rat
ZHANG Tao, CHI Xiao-xing, GUO Yan-ping, et al    
Department of Preventive Medcine, Daqing Branch of Harbin Medical University, Daqing 163319, China
Abstract: Objective To study the effect of soy isoflavone on levels of B-cell lym phom a 2(Bcl-2) protein and Bcl-2 associated X prote in(Bax) in small female rat's ovary.Methods Fifty two-month-old female rats were randomly divided into five groups: control(baseline feed), low dose(soy isoflavones of 100 mg/kg·bw), mode rate dose (soy isoflavones of 200 mg/kg·bw), high dose(soy isoflavones of 300 mg/kg·bw), and estrogen group(diethylstilbestrol of 0.5 mg/kg).The treatment lasted for seven weeks.The levels of Bcl-2 and Bax were detected with ELISA.Results The gray values of Bcl 2 in control, low dose, moderate dose, high dose, and estrogen group were 1.41±0.19, 1.43±0.20, 2.07±0.58, 2.42±0.32, and 2.95±0.78 without significant difference among the groups(P>0.05 for all) and those of the Bax were 33.64±5.83, 30.02±9.44, 17.33±4.21, 9.67±1.95, and 10.69±4.95, respectively.The soy isoflavone could remarkably reduce the activity of Bax in high dose group compared with that of the control group(P<0.05).Conclusion Isoflavone has aging-resistant effect on small female rat through antagonized pro-apoptotic bax protein and has no effect on Bcl-2.
Key words: soy isoflavone     small female rat     ovary     Bcl-2     Bax    

大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的次级代谢产物,在预防许多慢性疾病如心血管疾病、癌症、骨质疏松症以及在改善妇女绝经期症状方面起着重要作用〔1, 2, 3〕。近年来,大豆异黄酮抗氧化和抗衰老作用研究主要针对老年大鼠,而对青年大鼠影响的研究较少。本研究主要通过动物实验方法,研究大豆异黄酮对青年雌性大鼠卵巢组织中B-celllym phoma2(Bcl-2)蛋白及Bcl-2-associated X protein (Bax蛋白)表达情况,从卵巢细胞凋亡角度探讨大豆异黄酮对青年雌性大鼠的抗氧化作用及可能作用机制。

1 材料与方法 1.1 主要仪器与试剂

SUNRISE 5082酶标仪(澳大利亚TECAN公司);DRP-9082电热恒温培养箱(上海森信实验仪器有限公司)。大豆异黄酮(黑龙江双河松嫩大豆生物工程有限责任公司,含量为42.54%);己烯雌酚(合肥久联制药有限公司,每片0.5 mg);Bcl-2和Bax蛋白酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒(上海史瑞可科技有限公司)。

1.2 动物分组与处理

50只2月龄雌性Wistar大鼠,体重为110~130 g (黑龙江肿瘤防治研究所,动物合格证号:SCXK黑20050001),饲养于二级实验室,普通饲料喂养,自由摄水,室温为(24±2)℃,湿度为45%~65%,大鼠适应性喂养1周后开始实验。50只大鼠根据体重随机分成5组:空白对照组、大豆异黄酮低、中、高剂量组、雌激素组,每组10只,均以普通动物饲料喂养;大豆异黄酮低、中、高剂量组分别以100、200、300 m g/(kg·bw)大豆异黄酮溶液灌胃给药;雌激素组以0.5 mg/(kg·bw)己烯雌酚溶液灌胃给药,给药体积均为10 mL/kg,每日1次,单笼饲养,自由进水,持续49 d。

1.3 方法

大鼠喂养49 d后,麻醉,腹主动脉取血,大鼠死后,剖取大鼠卵巢和子宫,立即用4%体积分数的多聚甲醛/0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.2~7.6)的固定液固定,制作大鼠卵巢和子宫组织石蜡切片,厚度4 μm,用70%体积分数的乙醇加1‰体积分数的焦碳酸二乙酯处理后,再用多聚赖氨酸处理,60 ℃恒温箱烤片2 h。此后具体操作方法按Bcl-2和Bax蛋白ELISA检测试剂盒说明书进行,最后利用酶标仪测定吸光度(A值),并通过标准曲线来计算Bcl-2蛋白和Bax蛋白浓度,观察大豆异黄酮对凋亡抑制基因Bcl-2和促凋亡基因Bax的作用。

1.4 统计分析

应用SPSS 17.0软件进行方差分析。

2 结 果 2.1 各组大鼠卵巢重量及卵巢/体比变化情况(表 1)
表 1 各组大鼠卵巢湿重及卵巢/体比情况

高剂量组大豆异黄酮的类雌激素样作用对青年雌性大鼠卵巢有影响,与空白对照组比较,其卵巢湿重和卵巢/体比均降低,差异有统计学意义(F=6.62,P=0.01),与雌激素组作用相似。

2.2 各组大鼠卵巢组织中Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达情况(表 2)
表 2 各组大鼠卵巢组织Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达情况

大豆异黄酮有升高各剂量组大鼠卵巢组织中Bcl-2蛋白水平的趋势,但差异无统计学意义(F=18.84,P=0.87);大豆异黄酮各剂量组大鼠卵巢组织中Bax水平呈下降趋势,大豆异黄酮高剂量组、雌激素组与空白对照组比较,差异有统计学意义(F=42.84,P=0.00)。

3 讨 论

Bcl-2和Bax是细胞凋亡调控机制中2个非常关键的因子。本研究结果表明,大豆异黄酮可以使大鼠卵巢组织中促凋亡基因Bax的表达降低,且随剂量的增加表达呈递减趋势,高剂量大豆异黄酮组和雌激素组能明显抑制B ax蛋白表达,说明大豆异黄酮的延缓卵巢衰老及对卵巢功能的保护作用可能与抑制Bax蛋白表达和细胞凋亡有关。大豆异黄酮在降低B ax蛋白表达的同时对各组大鼠卵巢组织中抑制凋亡基因B cl-2表达却无明显影响,其作用机制尚不十分清楚,有待于进一步研究。另外,对大鼠卵巢湿重和卵巢/体比的观察发现,不同剂量的大豆异黄酮对青年雌性大鼠卵巢的作用有差别,300 m g/(kg·bw)大豆异黄酮能明显降低大鼠卵巢湿重和卵巢/体比,考虑到大豆异黄酮的雌激素作用,提示大豆异黄酮剂量并不是完全无毒无副作用,其安全性有待进一步研究。

参考文献
〔1〕 杨明, 隋殿军, 朱姝, 等.蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤 Fas、Bas和 Bcl-2基因蛋白表达的影响[J].中国药理学通报, 2005, 21(7): 799-803.
〔2〕 马吉祥, 苏军英, 李会庆, 等.大豆异黄酮诱导胃癌细胞凋亡作用研究[J].中国公共卫生, 2003, 19(4): 434-436.
〔3〕 迟晓星, 张涛, 崔洪斌.大豆异黄酮对更年期妇女骨密度影响[J].中国公共卫生, 2008, 24(2): 163-164.