运动尤其是力竭性运动可使机体产生大量运动源性自由基,是运动诱导细胞损伤的主要原因之一,过度运动可造成肝区痛疼、肝脏肿大,血清酶活性增高。运动性肝细胞损伤可能对运动员的健康造成较严重影响。现代本草纲目中记载枸杞可增强免疫功能,降脂、降糖、保肝。本研究通过建立大鼠耐力运动及一次力竭性游泳的疲劳模型来探讨枸杞对肝组织自由基代谢及谷丙转氨酶 ( GPT )活性、胆碱酯酶 ( ChE )活性、血糖含量、肝乳酸含量及肝糖原含量的影响及抗疲劳作用机制。

723N 可见分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司 ); TGL-16G 高速离心机 ( 上海安亭科学仪器厂 ) ; 可调式取液器 ( 美国 T he rmo 公司 ); JP1200电子天平 (上海第二天平仪器厂 ); 超氧化物歧化酶 ( SOD )、丙二醛 ( M DA )、葡萄糖、GPT、乳酸及肝糖原、ChE 试剂盒 (南京建成生物工程 ) 。枸杞 (商丘市中医院 ) 煎剂的制备方法与剂量参照文献 ^〔1〕。

健康雌性 Wistar大鼠 64只 (山东大学动物实验中心),8周龄,体重 ( 220 ± 23.19) g。单笼饲养,自由饮食饮水,自然光照 ,通风条件良好。动物室温 22-28 C ,相对湿度 50% -55% 。

将大鼠按体重随机分为 8组(每组 8只 ): 安静对照组、力竭对照组、训练对照组、训练力竭对照组和枸杞组、枸杞力竭组、枸杞训练组、枸杞训练力竭组。训练组进行递增性游泳训练,运动强度及时间参照文献^{〔2, 3〕}进行,适应性游泳 1次 /d,共 3 d,第 1,2,3 d分别 10,20,30 m in。从第 2周至第 5周,负重 3% (体重 ),运动时间从 30 m in /d递增至60 m in /d,每周增加 10 m in。第 2周开始,枸杞各组灌胃给予枸杞煎剂 ( 10 g /kg),训练及灌胃 1 次 /d,6 d/周,连续 4周。 枸杞训练组在大鼠运动训练结束 30 m in 后灌胃枸杞煎剂。 对照各组灌胃等量生理盐水。

处死大鼠,腹腔注射氨基甲酸乙酯麻醉,摘眼球取血,制备血清,按试剂盒方法测定血清 GPT 活性 ; 同时采全血测血糖含量。取血后剪开腹腔,立即取肝置于冰生理盐水中洗净,用滤纸吸干,制备成 10% 肝组织匀浆液,用于测定 SOD、M DA、GPT、乳酸、肝糖原和 ChE。指标测定严格按试剂盒说明书进行。蛋白质含量用考马斯亮兰法进行测定。

采用 SPSS13.0统计学软件包对所测的数据进行处理,2组间比较采用独立样本 t 检验,多组间比较采用单因素方差分析,检验水准 α= 0.05。

各组大鼠体重均随时间呈上升趋势,其中枸杞组上升明显,与对照组比较,差异有统计学意义 ( P < 0.05),但枸杞各组 (枸杞组,枸杞力竭组,枸杞训练组,枸杞训练力竭组 )之间与对照组 (安静对照组,力竭对照组,训练对照组,训练力竭对照组 )之间差异不明显 (P > 0.05)。

训练力竭组、枸杞训练力竭组力竭游泳时间分别为 ( 178.17 ± 15.35)、( 200.58 ± 15.47 )m in,与力竭对照组 ( 149.5 ± 40.56) m in 比较,明显延长 ( P < 0.01); 与训练力竭、枸杞力竭组比较,枸杞训练力竭组游泳时间明显延长 (P < 0.05)。

枸杞组大鼠肝组织 SOD /M DA 明显高于对照组 ( P < 0.01); 训练力竭组明显高于力竭对照组 ( P < 0.01),枸杞组与对照组比较血清 GPT 明显降低,肝脏 GPT 显著升高 ( P < 0.01 ); 与非训练组比较,各训练组 GPT 均明显升高 ( P < 0.01)。枸杞组大鼠肝组织 ChE 活性明显高于对照组 ( P < 0.01 );力竭运动时训练组与非训练组相比明显升高( P < 0.05)。

表 1

表 1 大鼠肝组织SOD/MDA、GPT、ChE和血清GPT变化( x±s, n= 8)

表 1 大鼠肝组织SOD/MDA、GPT、ChE和血清GPT变化( x±s, n= 8)

枸杞组和训练组血糖含量均明显低于安静对照组 ( P < 0.01 ),力竭运动后,枸杞组血糖明显高于力竭对照组 ( P < 0.01)。 枸杞组乳酸含量明显低于对照组 ( P < 0.01),训练力竭组乳酸含量与力竭对照组比较明显降低 ( P < 0.01)。枸杞组肝糖原含量均明显高于安静对照组 ( P < 0.01)。

表 2

表 2 大鼠血糖、肝组织乳酸及肝糖原含量的变化( x±s , n= 8)

表 2 大鼠血糖、肝组织乳酸及肝糖原含量的变化( x±s , n= 8)

实验期间,枸杞组大鼠精神饱满,活泼好动,皮毛光洁整齐,眼睛有神,无异常表现,与对照组比较,体重明显升高,表明枸杞可促进大鼠生长发育。枸杞和训练使大鼠力竭游泳时间分别延长 10.42% 和 19.18% ,表明枸杞和训练均能提高大鼠运动能力。 SOD /M DA 比值能反映自由基所导致的脂质过氧化与清除速率情况,利于客观分析自由基代谢的实际变化。 本实验结果表明,枸杞能够提高肝组织中抗氧化能力,减少自由基生成,降低自由基对细胞膜损害,对肝脏具有保护作用。

GPT 主要存在于肝细胞的线粒体内,当肝细胞受损时,血清 GPT 升高明显^〔4〕。本实验结果显示, 大鼠力竭运动后血清 GPT 升高,表明力竭性运动能导致大鼠肝细胞损伤。与熊正英等 ^〔5〕研究一致。而枸杞使大鼠血清 GPT 活性下降,肝 GPT 活性明显升高。运动训练能使大鼠力竭运动时血清 GPT 升高幅度下降。 ChE是肝脏合成的一种非特异性酯酶。当肝细胞受损时,合成减少,酶活力降低,因而测定 ChE活力可反映肝细胞功能^〔6〕。枸杞使大鼠 ChE 活性明显地升高,而训练可以减缓力竭运动时 ChE 下降,表明枸杞和运动训练能减轻运动时肝脏的损伤。力竭性运动时,肌糖原和肝糖原的含量对保证能量代谢正常进行,延长耐力运动持续时间等方面具有重要作用。同时运动后肝组织乳酸含量是衡量肝脏糖异生能力及糖代谢功能重要指标。本实验结果表明,枸杞和训练使安静大鼠血糖下降,缓解力竭运动后下降幅度,使肝组织乳酸含量降低,肝糖原含量显著升高。提示枸杞和游泳训练有降低血糖、促进糖异生及保肝护肝作用。