苯胺、苯酚作为重要的化工原料广泛应用于制药、塑料和油漆等行业，相应地在生产过程中也带来了潜在的环境安全问题。苯胺是一种致癌物质，对人体和环境危害极大，是重要检测指标^{〔1, 2, 3〕}。苯酚对人体也具有致癌、致突变的潜在毒性，可抑制中枢神经或损害肝、肾功能^〔4〕。在实际检测中，采用分光光度法检测苯胺和苯酚时两者的吸收光谱互相干扰^{〔5, 6〕},不能直接测定。本研宄采用自制正相硅胶整体柱进行苯胺、苯酚快速分离，利用分光光度法分别测定其含量，获得了较好效果。

1 材料与方法 1.1 主要仪器与试剂

Beckman DU530紫外分光光度计，KL-009袖珍数显酸度计，YPZ202N电子天平。四甲基硅烷 (纯度≥98% ),聚乙二醇10 000(生化级纯度≥99% ),甲酰胺（纯度98. 5% ),苯胺标准品（纯度98% )(百灵威公司）； 2.0g/L苯胺标准储备液；10mg/L苯胺标准使用液；2%邻甲氧基苯酚乙醇液；50 g/L NaNO₂溶液；25 g/L NH₄SO₃NH₂溶液: 3mol/L NaOH溶液；苯酚标准品（纯度99%),1g/L苯酚标准储备液；0.01 g/L苯酚标准使用液；pH 9.4硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液；0.5% 2，6-二溴苯醌-4-氯亚胺乙醇液。

1.2 试验方法 1.2.1 苯胺、苯酚的分离

以四甲氧基硅烷、水溶性的聚乙二醇为原料，甲酰胺为化学干燥控制剂获得稳定的硅胶整体柱。以此作为色谱固定相，以正己烷/异丙醇=99/1(V/V)作为流动相，流速为0.8 mL/min对50ng/L的苯胺、苯酚混合液进行分离，分别收集2种组分。

1.2.2 苯胺的测定

取10mL苯胺标准使用液于25mL具塞比色管中，加入0.05 mL 50 g/L NaNO₂溶液，摇匀放置5 min加入25 g/L NH₄SO₃NH₂溶液0. 5 mL，充分振荡至气泡消失。加入2%邻甲氧基苯酚0.5 mL摇匀后加入3 mol/L NaOH溶液0. 5mL，定容至25mL，在450 nm处测量吸光值。

1.2.3 苯酚的测定

取10mL苯酚标准使用液于25mL具塞比色管中，加入1 mL pH 9.4硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液混匀，加入0. 5% 2，6-二溴苯醌-4-氯亚胺乙醇液0.2 mL摇匀放置20 min在600 nm处测量吸光值。

2 讨论与结果 2.1 苯胺、苯酚的分离（图 1)

以四甲氧基硅烷、水溶性的聚乙二醇为原料，甲酰胺为化学干燥控制剂获得稳定的硅胶整体柱。以此为色谱柱，在优化的条件下即正己烷异丙醇= 99/1(V/V)作为流动相,流速为0. 8mL/min可将苯胺、苯酚混合液在3min内有效分离（第1个苯酚，第2个苯胺）。此方法有效地改善了常规色谱法分离费时的缺点。

2.2 苯胺测定 2.2.1 吸收光谱

本方法利用亚硝酸钠在酸性条件把苯胺氧化为重氮化合物，以邻甲氧基苯酚作为显色剂，在碱性条件与偶氮化合物反应生成黄色化合物，用紫外分光光度计对所得显色液进行扫描，可知邻甲氧基苯酚与苯胺形成的偶氮化合物在450 nm处有最大吸收。

2.2.2 显色剂用量的确定

取1mL苯胺使用液稀释至10 mL加入 0.05 mL NaNO₂反应 5min后，加入 0.5 mL NH₄SO₃NH₂溶液，振荡至无气泡产生，分别加入0.5、0.8、 1.0、1.2 mL 2%邻甲氧基苯酚，加入0.5mL NaOH溶液在450nm测量吸光度值，最终确定0. 5mL邻甲氧基苯酚显色效果 最佳。

2.2.3 重氮化反应时间的影响

在其他实验条件不变的情况下，调整重氮化反应时间分别为1、3、5、7、9 min测量其吸光度值，实验结果证实5min为重氮化反应最佳时间。

2.2.4 阳对显色反应的影响

在反应中加入不同量NaOH调节溶液pH分别至8. 62、9. 00 、9. 99 、10. 91、11. 90。实验结果表明pH为10时，苯胺显色完全，即在25mL中加入0. 5 mL 3 mol/L NaOH可保证溶液完全显色。

2.2.5 显色时间及稳定性

实验结果表明，在室温下显色反应均瞬时完成，且偶氮化合物稳定>24 h。

2.2.6 共存离子影响

实验对此方法进行了干扰测定，测定内容为常见的金属干扰离子和有机物。在苯胺浓度为 1mg/L时，相对误差控制在±5%时，2x10⁵倍量Na⁺、K ⁺ ,5x10⁴倍量甲醇、乙醇，2x10⁴倍量甲苯，800倍量Ca²⁺等均不干扰测定。400倍量Mg²⁺离子、2 000倍量丙酮的相对误差达±10%左右。其他金属离子需要加入掩蔽剂或事先分离再进行测定。

2.2.7 标准曲线与精密度测定

在优化的条件下绘制标准曲线，结果如下:A= 0.232 9C + 0.0131(r²= 0.9997)式中，A 为吸光度；C为苯胺的浓度（mg/L)。在0~ 8mg/L范围内均可获得线性很好的标准曲线。同时通过对试剂空白进行11次实验测定工作曲线的精密度，标准偏差为0.000786，按照 3δ/S方法计算出检出限为0.010mg/L。

2.2.8 实际水样分析

采用此方法对天津市海河和自来水水样进行分析。海河水样需过滤，苯胺测定结果可知，2种水样均未检测到苯胺。通过加标回收测得此方法回收率分别为 12.4%、12.5%。

2.3 苯酚的测定 2.3.1 吸收光谱

本实验方法是利用苯酚在碱性条件下与 2，6-二溴苯醌-4氯亚胺反应生成蓝色缩合物测定进行。用紫外分光光度计对所得显色液进行扫描，可知2，6-二溴苯醌-4-氯亚胺与苯酚形成的显色化合物在600 nm处有最大吸收峰。

2.3.2 显色剂用量的确定

实验时，在1mL苯酚使用液中分别加入0.05% 2，6-二溴苯醌-4-氯亚胺0. 0、0. 1、0. 2 0.3、0.4、0.5、0.6 、0.7、0.8mL显色后在 600 nm处测量吸光 度值,发现在0.4mL后吸光度值变化不大。在实际测量中加入0.2mL的0.5%的2,6-二溴苯醌-4-氯亚胺作为显色 剂。

2.3.3 显色时间的确定

显色后分别在5、10、15、20 、25、30、 35、40 、45、50min进行测量，实验结果表明在25min后，显色物的吸光度变化较小，因此显色后放置25min测量最佳。

2.3.4 共存离子影响

通过在试样中添加常见的金属干扰离子和有机物，本实验对此方法进行了干扰测定。在苯酚浓度为2mg/L时，相对误差控制在10%时，1X10⁵倍量Na⁺、 K⁺,5x 10⁴倍量甲醇、乙醇，10倍量苯胺等均不干扰测定。对于其他金属离子需要加入掩蔽剂或事先分离再进行测定。

2.3.5 标准曲线与精密度测定

在优化的条件下绘制标准曲线如图 2所示，结果如下: A = 0. 103 9C- 0.068 5(r² = 0.998 0)式中，A为吸光度，C为苯酚的浓度（mg/L)。在 0~8mg/L范围内可获得线性很好的标准曲线。同时通过对试剂空白进行11次实验测定工作曲线的精密度，标准偏差为 0.000 522按照3δ/S方法计算出检出限为0.015mg/L。

2.3.6 实际水样分析

用此方法对自来水水样进行分析。实验结果表明水样不含有苯酚。通过加标回收实验，测得其回收率为10.8%。

3 小 结

本实验利用硅胶整体柱和分光光度法实现了对水中苯酚、苯胺的快速分离和测定。此方法较好地解决了两者直接测量时光谱互相干扰的问题。方法中苯胺的检测限为0.010 mg/L线性范围为0~ 8mg/L苯酚的检测限为0.015mg/L线性范围为0~ 8mg/L。方法用于环境水样中苯酚、苯胺的测定，回收率分别为10.8%、12.45%。