蛹虫草与天然冬虫夏草药理功效相似。研究表明,蛹虫草对特异性、非特异性免疫有明显增强作用^〔1〕。红细胞是非专职天然免疫细胞,在血循环中数量巨大。美国SiegelI^〔2〕提出“红细胞免疫系统(RCIS)”新概念,认为红细胞是淋巴细胞活性调节器,通过调节红细胞免疫活性可改善T淋巴细胞活性,红细胞不但能免疫粘附酵母菌和肿瘤细胞,而且胞浆中具有含量丰富自然杀伤细胞(NK)增强因子(NKEF),可明显增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤^〔3〕。本研究以环磷酰胺为造模剂建立小鼠免疫功能低下模型,观察蛹虫草2种制剂对免疫功能低下小鼠红细胞免疫功能影响。

SPF级Balb/C种小鼠(第一军医大学)24 只,雌性,体重16~20 g。

环磷酰胺(上海华联制药有限公司),批号:001106;蛹虫草2种剂型:水、醇提取物(珠海先康生物科技有限公司)。艾氏腹水瘤冻干细胞、补体致敏酵母多糖冻干试剂(上海长海医院)。显微镜(德国蔡氏公司)。

将动物随机分为对照组、免疫低下模型组、蛹虫草水、醇提取物组。每组6只。对照组给予纯净水。 免疫低下模型组、蛹虫草水、醇提取物组采用环磷酰胺 80 mg/kg剂量连续腹腔注射3 d,建立免疫功能低下模型。 取抗凝眼静脉血2 mL分离淋巴细胞,配成1×107个/mL悬液;红细胞配成1.25×107/mL细胞悬液。补体致敏酵母配成 1×108个/mL细胞悬液。艾氏腹水瘤冻干细胞制成1×106 个/mL细胞悬液,用台盼蓝染色检查肿瘤细胞活性。蛹虫草 2种剂型用纯净水配制成最大溶解浓度。

分别取50 μL血浆和红细胞与50 μL酵母菌悬液混匀,阴性对照组、免疫低下模型組加入50 μL生理盐水、蛹虫草水、醇提取物组分别加入50 μL提取物充分混匀,37 ℃水浴30 min;0.25%戊二醛固定,涂片,染色,镜下观察;计算花环阳性细胞百分率。

肿瘤细胞致敏:肿瘤细胞悬液用人血清1.5 mL致敏,37 ℃水浴 40 min,配成106个/mL,取0.025 mL红细胞悬液和0.05 mL 致敏后肿瘤细胞悬液混匀,37 ℃水浴40 min;加生理盐水 0.1 mL;蛹虫草水、醇提取物组分别加入50 μL提取物充分混匀,0.25%戊二醛固定,涂片,染色,阅片。计数200个肿瘤细胞,计算花环百分率。

取0.05 mL 淋巴细胞悬液、0.05 mL肿瘤细胞悬液和0.05 mL小牛血清混匀,离心,37 ℃水浴40 min,加生理盐水0.1 mL,蛹虫草水、 醇提取物组分别加入50 μL提取物充分混匀,0.25%戊二醛固定,涂片,染色,计数200肿瘤细胞,粘附≥2个淋巴细胞的肿瘤细胞为一朵花环,计数花环结合率(%)。

0.05 mL淋巴细胞悬液、0.025 mL红细胞悬液、 0.05 mL肿瘤细胞悬液和0.05 mL小牛血清混匀,低速离心,37 ℃水浴40 min,加生理盐水0.1 mL,蛹虫草水、醇提取物组分别加入50 μL提取物充分混匀,0.25%戊二醛固定,涂片,染色,湿片计数:(1)肿瘤红细胞花环率;(2)肿瘤淋巴细胞花环率;(3)肿瘤红细胞和淋巴细胞混合花环率。计数200 个肿瘤细胞,分别计算花环百分率。

采用SPSS 11.5软件进行方差分析。

表 1

表 1 小鼠红细胞免疫粘附能力(%,x±s, n= 5)

表 1 小鼠红细胞免疫粘附能力(%,x±s, n= 5)

与对照组比较,环磷酰胺模型组RBC-C3bR花环阳性率明显降低(P < 0.01),蛹虫草水、醇提取物组RBC-C3bR花环阳性率明显高于模型组(P < 0.01),醇提取物组作用更强。环磷酰胺模型组RBC-IC花环阳性率明显高于对照组(P < 0.01),蛹虫草水醇提取物组RBC-IC花环阳性率明显低于环磷酰胺模型组(P < 0.05)。模型组RIT、LIT花环阳性率低于对照组 (P < 0.01),蛹虫草水、醇提取物组RIT、LIT花环阳性率高于环磷酰胺模型组(P < 0.01)。

表 2

表 2 小鼠红细胞调节免疫粘附能力(%, x±s, n= 5)

表 2 小鼠红细胞调节免疫粘附能力(%, x±s, n= 5)

与对照组比较,环磷酰胺模型组RIT、LIT、RELIT花环率明显降低(P < 0.01),提示环磷酰胺能降低小鼠红细胞调节自身淋巴细胞的免疫粘附促进作用。蛹虫草水、醇提取物组RIT、 LIT、RELIT花环率均高于环磷酰胺模型组(P < 0.01),提示受试样品可明显增强小鼠红细胞对自身淋巴细胞的免疫粘附调节功能。

蛹虫草富含虫草酸、虫草素、虫草多糖等多种有效成分^〔6〕,虫草多糖不仅能够促进人扁桃体及小鼠脾活化T细胞的增殖,而且能恢复环磷酰胺抑制免疫小鼠脾活化T细胞的增殖及腹腔巨噬细胞吞噬功能。本研究结果表明,蛹虫草提高红细胞天然免疫活性和免疫粘附肿瘤细胞的能力,增强免疫功能低下小鼠红细胞对自身淋巴细胞的免疫粘附调节功能。通过对蛹虫草成分及其药理活性的研究表明,虫草多糖能与红细胞上多糖受体粘附,激活红细胞补体受体CR1天然免疫功能。红细胞膜上存在多糖受体,虫草多糖与之结合可使膜上补体C3b受体充分表达,通过免疫黏附,红细胞可携带清除免疫复合物、促进巨噬细胞吞噬功能的作用。红细胞天然免疫粘附能力作为机体免疫力评价指标在中医药开发研究中值得推广与应用。