中国公共卫生  2010, Vol. 26 Issue (9): 1153-1154   PDF    
引用本文
刘燕群, 吴丽娜, 乐明. 氯丙醇对小鼠淋巴细胞DNA损伤作用[J]. 中国公共卫生, 2010, 26(9): 1153-1154.
LIU Yan-qun, WU Li-na, LE Ming. DNA damage of lymphocytes caused by chloropropanol in mice[J]. Chinese Journal of Public Health, 2010, 26(9): 1153-1154.
氯丙醇对小鼠淋巴细胞DNA损伤作用
刘燕群1, 吴丽娜2, 乐明1    
1. 江汉大学医学院, 湖北 武汉 430056;
2. 湖北省咸宁市咸安区妇幼保健院
收稿日期: 2010-02-13.
基金项目: 湖北省自然科学基金(2008CDB186)
作者简介: 刘燕群(1968- ),女,湖南人,教授,博士,研究方向:公共卫生.
摘要: 目的 观察1,3-二氯-丙醇(1,3-DCP)3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)对小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤.方法 56只昆明种小鼠随机分为正常对照组和1,3-DCP、3-MCPD各3组,剂量分别为10,20,40 mg/kg,灌胃染毒每d 1次,连续7d.染毒后,取外周血淋巴细胞进行彗星实验.结果 染毒1,3-DCP,低、中、高剂量组小鼠淋巴细胞DNA损伤率分别为22.90%,46.75%和73.80%明显高于正常对照(P＜0.05);中、高剂量组淋巴细胞DNA迁移度分别为(8.056±2.291),(9.378±3.658)μm,均明显高于对照组(P＜0.05).染毒3-MCPD,各剂量组小鼠淋巴细胞DNA损伤率与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 1,3-DCP对雄性小鼠外周血淋巴细胞具有DNA损伤作用,而3-MCPD则无明显影响
关键词: 氯丙醇     DNA损伤     彗星实验    
DNA damage of lymphocytes caused by chloropropanol in mice
LIU Yan-qun, WU Li-na, LE Ming    
School of Medicine, Jianghan University Wuhan 430056, China
Abstract: Objective To observe the damage of lymphocyte DNA induced by 1,3-dichloro-2-propanol(1,3 DC P) and 2-methy l-3-3-3 trichloro-1,2-propanedid(3-MCPD)in male mice with comet a ssay.Methods Fifty-six KM mice were divided randomly intofour groups:control group,low dose group(10 mg/kg),medium dose group(20mg/kg),and high dose group(40 m μg/kg).Peripheral blood of the mice was extracted after exposed for seven days.Comet a ssay was made with peripheral blood lymphocytes.Results The DNA dam age of lymphocytes in mice of the 1,3 DCP group was significantly higher than that of the control group.The rate of DNA damage were 22.90%,46.75% and 73.80%,respectively.Morevoer,DNA migration in high 1,3 DCP group was significantly higher than that of the low 1,3 DCP group.DNA migration was 8.056±2.291,9.378±3.658,and 2.3764±0.315,respectively.After the contamination,no significant difierence of DNA damage in mice were observed among the 3 MCPD groups(P>0.05).Conclusion 1,3 DCP has damage effect on DNA of peripheral bloodlymphocyte in male mice.The expermient of 3-M CPD does not show significant impacton DNA of lymphocytes in male mice.
Key words: chloropropanol     DNA damage     cometassay    

氯丙醇是一种致癌物质。常见的4种同系物的毒性各不相同,对人体肝、肾、生殖系统、神经系统均有一定损害,其中3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)和1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)具有致癌性。3-MCPD会引起中枢神经中毒、癌症并影响肾脏功能,造成生育能力降低,但无遗传毒性。体外实验显示其有致突变性,大鼠体内实验表明其有致癌性,但致癌机制不明确〔1〕。细菌和哺乳动物体外实验证明1,3-DCP具有明显的致突变作用和遗传毒性。本研究应用单细胞微凝胶电泳(SCGE)技术检测氯丙醇急性染毒小鼠淋巴细胞DNA损伤情况,为探讨氯丙醇毒性机制提供依据。

1 材料与方法 1.1 主要试剂和仪器

3-MCPD,1,3-DCP(美国Sigma公司);TGL-16台式离心机(上海医用分析仪器厂);DYY-Ⅲ型电泳仪(北京市六一仪器厂);DKZ-1型电热恒温振荡水浴槽(上海一恒科学仪器有限公司);荧光显微镜(日本Nikon公司)。

1.2 实验动物及处理

56只健康昆明种小鼠(华中科技大学实验动物中心),雌雄各半,体重18~22g。随机分为7组:对照组和低、中、高剂量氯丙醇(1,3-DCP和3-MCPD各分为3组)染毒组。对照组小鼠生理盐水灌胃;低、中高剂量组分别按10,20,40mg/kg剂量灌胃染毒,每天1次,连续染毒7d。最后1次染毒24h后,断头取血液,用于SCGE测定。

1.3 血淋巴细胞分离和处理

采集抗凝血0.5~1.0mL,滴加在淋巴细胞分离液上,2000r/min,离心10min,吸取淋巴细胞,加磷酸盐缓冲液(PBS)(pH7.4)1mL,1000r/min离心10min,重复2次,将细胞悬浮于PBS,调整细胞浓度至1×105个/mL待用。

1.4 彗星实验 〔2, 3〕

将制好的胶经裂解、变性、电泳、中和、溴化乙锭(EB)染色和脱色后在4℃冰箱中静置,24~48h内荧光显微镜下观察结果。每张片子随机计数150细胞(避免明显死亡细胞及细胞残核),计算拖尾率(拖尾率=拖尾细胞数/观察细胞数×100%),测量拖尾细胞的尾长(μm),计算出每组DNA迁移长度。

1.5 统计分析

采用SPSS 12.0统计软件进行方差分析。

2 结 果 2.1 氯丙醇对小鼠淋巴细胞DNA迁移度影响 (表 1)
表 1 不同组别小鼠淋巴细胞DNA迁移度 ( x ± s, n = 8)

不同浓度1,3-DCP对小鼠淋巴细胞DNA迁移度影响与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),且随剂量增加,DNA迁移度相应增加。而3-MCPD染毒后,小鼠淋巴细胞DNA迁移度与对照组比较,差异无统计学意义。

2.2 氯丙醇对小鼠淋巴细胞DNA损伤率影响 (表 2)
表 2 各组别小鼠淋巴细胞DNA损伤率

不同剂量染毒1,3-DCP后,小鼠淋巴细胞DNA损伤率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且随浓度增加而增加,存在剂量-效应关系;中、高剂量组与低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量与中剂量组比较,差异也具有统计学意义(P<0.05)而3-MCPD处理后,小鼠淋巴细胞DNA损伤率与对照组比较,差异均无统计学意义。

3 讨 论

目前1,3-DCP的代谢、亚急性、慢性毒性和致癌性试验资料显示,1,3-DCP可以明显地增加至少3种组织的良性和恶性肿瘤发生率;细菌和哺乳动物的体外系统试验显示,污染物会影响染色体和DNA〔4〕。本实验结果表明,1,3-DCP可引起小鼠外周血淋巴细胞DNA发生损伤,但3-MCPD对小鼠外周血淋巴细胞DNA无明显损伤作用。有研究认为,3-MCPD属于非遗传毒性致癌物〔5〕。目前突变学说认为,癌变前提条件是细胞DNA的突变,即没有突变就没有癌变。所以有关氯丙醇的致癌性有待于进一步研究。

参考文献
〔1〕 刘彤,王德才,姜媛.调味品中氯丙醇污染及研究[J].中国公共卫生管理,2006,22(4):331-333.
〔2〕 Singh NP.Technical repor:tmodification of alkaline microgel electrophoresis of sensitive detection of DNA damage[J].Int Radiat Biol,1994,66:23.
〔3〕 Singh NP,M Coy MT,Tice RR,et al.A simple technique for quantification of low levels of DNA damage in individual cells[J].Exp Cell Res,1988,175:184-191.
〔4〕 傅武胜,林升清,黄剑锋.氯丙醇的毒理学研究进展[J].现代预防医学,2003,30(2):228-230.
〔5〕 秦红梅,金一和,黄飚,等.食品中3氯丙醇的污染状况及其毒性研究进展[J].中国公共卫生,2002,18(12):1519-1521.