近年来,剖宫产率呈日益增高趋势。20世纪90年代末国内大城市医院的剖宫产率为30%~40%^〔1〕,目前虽无全国统计数据,但大多数城市医院报道的剖宫产率约为40%~60%^{〔2, 3, 4〕},高者甚至达60%~80%^〔3〕。剖宫产术后伤口的良好愈合有利于减少术后并发症,促进产后恢复,提高产妇的生活质量。研究表明,海洋生物活性肽对实验动物具有抗损伤和抗氧化等功效^〔5〕,可以清除体内的自由基,减少炎症反应,增强小鼠免疫功能,进而增强抗感染能力^〔6〕。本研究探讨海洋胶原肽作为一种营养补充剂对剖宫产术后伤口愈合的影响,为促进剖宫产术后伤口愈合的营养支持提供实验依据。

健康发情期SD雌性大鼠96只(北京大学医学部实验动物中心,合格证号为SCXK(京)-2006-2008),体重350~400g。清洁级动物房饲养,饲养环境温度21~23℃,相对湿度50%~60%。大鼠受孕后,随机分为4组,每组24只。根据预实验的结果,设立0.13,0.38,1.15g/(kg·bw)3个剂量组,分别相当于人体推荐剂量的1.1,3.3和10倍;空白对照组给予等体积生理盐水灌胃。在受孕19d时剖腹取出仔鼠,手术当天开始每天灌胃。在手术后7,14,21d每组分别处死8只大鼠,观察伤口愈合情况。

海洋胶原肽(北京中食海氏生物技术有限公司),UV7512GD型紫外可见分光光度计(上海欣益仪器仪表有限公司);XHC型漩涡混匀器(江苏省金坛市医疗仪器厂);Pclab-UE生物医学信号采集处理系统(北京微信斯达科技发展有限责任公司);羟脯氨酸测试盒(南京建成生物工程研究所)。

1%苯巴比妥钠腹腔注射麻醉,在下腹部沿腹中线剪开3cm纵切口,打开腹腔,在两侧子宫背对肠系膜侧的中部各做2.0cm的纵向切口,挤出大鼠幼崽和胎盘。缝合子宫,逐层缝合肌肉和皮肤。术后涂2%碘酊,注射青霉素0.1mL,放回盒子里,注意保暖,术后禁食1d,正常饮水。

(1)一般指标:大鼠体重变化,切口愈合情况,伤口愈合的天数。(2)伤口皮肤张力:取长1cm,宽0.5cm的皮肤组织,固定于Pclab-UE生物医学信号采集处理系统两端,拉开皮肤,直至拉断,记录张力最大值。张力值越大表明伤口皮肤的抗拉力强度大,恢复越好。(3)子宫破裂压力:将Pclab-UE生物医学信号采集处理系统的导管插入子宫腔,并在合适的部位结扎固定。导管的近端与仪器连接,匀速向子宫腔内注入生理盐水,直至子宫爆裂或者液体渗出,所记录的最高压力为破裂压力,压力值越大表明子宫恢复越好,发生子宫破裂的危险越小。(4)羟脯氨酸含量:测定方法参照试盒说明书。

采用SPSS 13.0软件进行t检验、单因素方差分析。

实验期间各组大鼠无死亡,未出现拒食现象,生长及活动正常,行为、毛色、精神状况、饮食、饮水及粪便均未见明显异常。各实验组大鼠的体重均先减少再增加,与大鼠各个时间点的生理状况相符合,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

伤口愈合良好,未发现红肿、积液、皮肤坏死、伤口破裂等不良反应。伤口的平均愈合时间为6d。

表 1

表 1 不同组别大鼠皮肤张力和子宫压力比较 (x ± s)

表 1 不同组别大鼠皮肤张力和子宫压力比较 (x ± s)

皮肤张力和子宫压力数据表明,在7,21d时,给予海洋胶原肽1.15g/(kg·bw)组大鼠皮肤张力(F=6.60,F=13.02;均P<0.05)和子宫压力(F=7.43,F=8.52,均P<0.05)大于对照组;21d时,给予海洋胶原肽0.38g/(kg·bw)组的皮肤张力高于对照组,差异有统计学意义(F=13.02,P<0.05)。

给予海洋胶原肽1.15g/(kg·bw)组大鼠在3个时间点上皮肤伤口中羟脯氨酸的含量为(6.16±0.80),(6.50±0.53),(6.82±0.46)μg/mg,均高于空白对照组的(4.07±0.45),(4.86±0.39),(4.71±0.27)μg/mg,差异有统计学意义(t=-4.609,t=-4.278,t=-6.72;P<0.05),各剂量胶原肽组的子宫羟脯氨酸含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

本实验中,各剂量组和对照组大鼠体重无明显差异,符合孕鼠正常的生理变化,说明海洋胶原肽对术后体重的恢复无影响,不影响大鼠正常的生长发育。脯氨酸和羟脯氨酸是构成结缔组织胶原的重要成分,其含量多少与结缔组织的抗拉力强度有很大关系,特别是羟脯氨酸的存在,对胶原蛋白分子在生理温度下形成三股螺旋的绳状结构及其稳定性具有重要意义。给予海洋胶原肽1.15g/(kg·bw)组大鼠皮肤伤口中羟脯氨酸的含量在3个时间点上均高于对照组,且在7,21d时1.15g/(kg·bw)组大鼠皮肤张力和子宫压力均明显大于对照组(P<0.05),21d时,给予海洋胶原肽0.38g/(kg·bw)组的皮肤张力明显高于对照组(P<0.05),表明海洋胶原肽能够促进伤口中羟脯氨酸含量的增加,从而利于胶原蛋白的合成,并增加胶原蛋白分子的稳定性,增强皮肤的抗拉力强度,促进组织修复,这也可能是海洋胶原肽促进伤口愈合的机制之一。

本课题组前期实验发现,海洋胶原肽可通过促进伤口皮肤胶原蛋白的合成,从而促进伤口愈合^〔5〕,结论与本研究一致。这可能与海洋胶原肽能够趋化诱导炎症细胞到伤口处,刺激成纤维细胞增殖和分化,促使细胞合成分泌细胞外基质如胶原等有关,其具体机制还需进一步研究。