随着经济增长、社会进步以及医疗水平的不断提高,世界人口正逐步进入老龄化阶段,预计至2025年,中国老年人口将超过人口总数的10%^〔1〕。抗衰老研究日益受到关注。金匮肾气丸是历代医家用于温补肾阳、延缓衰老的代表方^〔2〕。VA、VC、VE,锌、硒等微营养素也已被证实具有明显抗氧化作用^〔5〕。本实验以D-半乳糖致衰老的雄性小鼠为实验对象,观察金匮肾气丸和微营养素联合应用对衰老小鼠雄激素水平和抗氧化作用的影响。

清洁级3月龄ICR雄性小鼠(浙江省医学科学研究院)72只,体重35~45g。

硫锌酸、VA、VC、VE、亚硒酸钠(杭州诺金食品有限公司),金匮肾气丸(杭州胡庆余堂),D-半乳糖(上海试剂二厂),睾酮测定试剂盒(美国DSL公司)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(南京建成生物工程研究所)。微营养素复合剂制备:取VE1.26g、VA2.4mg放入研钵研磨,加入2滴吐温-80和少量蒸馏水,充分混合后加入VC0.78g、硫锌酸0.3mg、亚硒酸钠84.3μg,混匀后用蒸馏水定容至60mL。

将小鼠随机分成6组,空白对照组、模型对照组、金匮肾气丸低、高剂量组,金匮肾气丸低、高剂量+微营养素组,每组12只。各剂量组每天颈背部皮下注射D-半乳糖溶液0.1mL/10g,空白对照组注射等量生理盐水,连续6周,取尾血测定GSH-Px、红细胞中SOD活性。模型对照组血液GSH-Px活性与红细胞中SOD活性明显低于空白对照组,表示模型成立。

造模成功后,金匮肾气丸低、高剂量组灌胃给予金匮肾气丸1.6,2.4g/kg,金匮肾气丸低、高剂量+微营养素组分别给予金匮肾气丸1.6,2.4g/kg+营养素20mL/kg,每天灌胃1次,持续6周。

实验结束时,小鼠眼球取血,然后颈椎脱臼法处死小鼠,迅速取出心、肝、脑、肺组织,制备组织匀浆,备用。按试剂盒方法,测定血睾酮、SOD和GSH-Px及心、肝、脑、肺组织中的SOD、GSH-Px浓度。

采用SPSS 13.0软件分析,组间比较采用t检验。

模型对照组全血GSH-Px活力为(401.10±25.90)U/mL,明显低于空白对照组(488.51±20.40)U/mL(P<0.01),模型对照组红细胞SOD活力为(15011.29±18.64)U/(g·Hb),明显低于空白对照组的(19905.47±78.57)U/(g·Hb)(P﹤0.01),表明造模成功。

表 1

表 1 各组衰老小鼠血睾酮含量、血GSH-Px和SOD活力比较

表 1 各组衰老小鼠血睾酮含量、血GSH-Px和SOD活力比较

与模型对照组比较,各剂量组睾酮水平、GSH-Px与SOD活力均有不同程度升高,差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。

表 2

表 2 各组小鼠心、肝、脑、肺组织中GSH-Px活力比较

表 2 各组小鼠心、肝、脑、肺组织中GSH-Px活力比较

与模型对照组比较,各剂量组的小鼠心、肝、脑、肺组织中GSH-Px活力均有升高(P<0.05或P<0.01)。

表 3

表 3 各组小鼠心、肝、脑、肺组织中SOD活力比较

表 3 各组小鼠心、肝、脑、肺组织中SOD活力比较

与模型对照组比较,各剂量组的心、肝、脑、肺组织中的SOD活力均有升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。

中国传统医学曾提出,肾衰是衰老的根本原因,因而补肾中药被广泛地用作抗衰老药物,其中金匮肾气丸是为历代医家用于补益肾气、延缓衰老的经典代表方剂^〔4〕。维生素A、E、C及微量元素锌、硒也已被证实具有明显的抗氧化作用^〔5〕,此外,多种营养素联合可改善铅对海马一氧化氮合酶(NOS)和NO的作用^〔6〕。

肾气衰竭是中老年男性雄激素部分缺乏综合征的根本原因,适当给予中药补益肾气,保持人体代谢旺盛,将有助于延缓衰老^〔7〕。彭蕴茹等^〔8〕研究发现,金匮肾气丸能够提高肾阳虚小鼠血清中睾酮含量、SOD和GSH-Px活力,降低丙二醛(MDA)含量,表明其对于肾阳虚小鼠具有明显的防治作用。车文骏等^〔9〕采用金匮肾气丸对中老年男性雄激素部分缺乏综合征患者的治疗发现,3个月后患者的临床症状明显改善,血清睾酮水平明显升高,促卵泡激素明显降低,表明金匮肾气丸对男性部分雄激素缺乏综合征确有治疗作用。本研究中金匮肾气丸与微营养素合用对衰老小鼠雄激素水平的影响及抗氧化作用更加明显,为中老年男性雄激素部分缺乏综合征防治提供了进一步的实验依据。