在世界范围内,心血管疾病是人类死亡的主要原因,而高脂血症是导致心血管疾病的最主要风险因素^〔1〕。快速、准确地筛选有效治疗和预防高脂血症的功效成分已成为目前国内外研究的热点和难点。另外,由于降脂药物的作用机制各有不同^〔2〕,单一机制的动物模型评价功效成分的降脂作用尚不可靠。因此,有必要建立多种不同机制的高血脂动物模型,以方便、快捷、有效地评价功效成分的降脂功能。本研究采用2种机制不同的方法,分别建立小鼠急性高血脂模型,为调节血脂功效成分的快速筛选提供依据和方法。

8周龄雄性昆明种小鼠(哈尔滨医科大学附属肿瘤医院实验动物中心)60只,体重(20±2)g,清洁级,动物合格证号:SCXK(黑)2006-008,适应性喂养5d。

蛋黄乳剂,取新鲜鸡蛋黄,用生理盐水配制成75%蛋黄乳剂备用;Trition-WR1339(Trition)(美国Sigma公司),用生理盐水稀释成3%的溶液备用;辛伐他汀(宜昌长江制药有限公司),用0.5%羧甲基纤维素钠配成2mg/mL的混悬液备用;甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(北京中生北控生物技术有限公司)。AUTOLABPM4000全自动生化分析仪(意大利AMS公司)。

按体重将小鼠随机分为6组,分别为空白对照A、B组,高脂模型A、B组,辛伐他汀A、B组,每组10只。辛伐他汀A、B组灌胃给予辛伐他汀0.2mg/10g,其余各组均灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠,灌胃量为0.1mL/10g,连续灌胃13d。高脂模型A组小鼠腹腔注射75%蛋黄乳剂,空白对照A组和辛伐他汀A组腹腔注射生理盐水,体积为0.2mL/10g;高脂模型B组小鼠尾静脉注射3%Trition,空白对照B组和辛伐他汀B组尾静脉注射生理盐水,体积为0.1mL/10g,禁食不禁水10h后再灌胃1次,末次灌胃2h,摘眼球取血,3000r/min,4℃离心15min,取血清备测。

TG、TC、LDL-C和HDL-C检测采用全自动生化分析仪进行。

采用SPSS13.0软件处理,多组间比较用单因素方差分析;若组间差异有统计学意义,进一步多重比较采用t检验。

表 1

表 1 75%蛋黄乳对小鼠血脂影响 (x± s, n = 10, mmol/L)

表 1 75%蛋黄乳对小鼠血脂影响 (x± s, n = 10, mmol/L)

与空白对照A组比较,模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C和HDL-C水平明显升高(P<0.01);与高脂模型A组比较,连续14d辛伐他汀干预明显降低小鼠血清TG、TC、LDL-C和HDL-C水平(P<0.01)。

表 2

表 2 Trition-WR1339对小鼠血脂的影响(x± s, n = 10, mmol/L)

表 2 Trition-WR1339对小鼠血脂的影响(x± s, n = 10, mmol/L)

与空白对照B组比较,模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C和HDL-C水平明显升高(P<0.01);与高脂模型B组比较,连续14d辛伐他汀干预明显降低小鼠血清TG、TCLDL-C和HDL-C水平(P<0.01)。

鸡蛋黄中的胆固醇和脂肪含量十分丰富。腹腔注射75%的蛋黄乳后,外源性脂质通过腹膜迅速进入血液循环,从而快速升高实验动物的血脂。而Triton-WR1339是一种非离子型表面活性剂,它可以结合血中的脂蛋白形成复合物,抑制血液中脂蛋白清除;改变HDL-C的结构,抑制HDL-C中卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性,影响脂蛋白间的脂质交换;抑制脂蛋白脂酶活性;增强胆固醇合成关键酶β-羟-β-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性,增加胆固醇合成。因此,Triton-WR1339主要通过抑制内源性脂质清除和促进内源性脂质合成2方面快速升高血脂^{〔3, 4, 5〕}。

实验结果表明,2种造模方法均可在12h内明显升高小鼠血清TG、TC和LDL-C水平。而2种造模方法也同样升高了小鼠血清HDL-C水平,可能由于TC迅速大幅度地升高造成的HDL-C代偿性升高所致。此外,辛伐他汀可明显降低2种模型动物的血清TG、TC和LDL-C水平,说明2种动物模型均可有效筛选出降脂作用明显的功效成分。综上所述,分别采用腹腔注射75%蛋黄乳和尾静脉注射3%Trition-WR1339溶液的方法可成功建立小鼠急性高血脂模型,2种模型的联合应用可为快速筛选调节血脂的功效成分提供有效、可靠方法,同时也避免了筛选方法单一的不足。