中国公共卫生  2010, Vol. 26 Issue (9): 1107-1109   PDF    
引用本文
林荣, 王春娜, 刘新民. 2型糖尿病肾病影响因素病例对照研究[J]. 中国公共卫生, 2010, 26(9): 1107-1109.
LIN Rong, WANG Chun-na, LIU Xin-min. Influential factors of diabetic nephropathy among type 2 diabetes patients[J]. Chinese Journal of Public Health, 2010, 26(9): 1107-1109.
2型糖尿病肾病影响因素病例对照研究
林荣1, 王春娜2, 刘新民1    
1. 天津医科大学公共卫生学院流行病学教研室, 天津 300070;
2. 天津市河西区卫生局
收稿日期: 2010-04-16.
基金项目: 天津市科技发展计划项目(023111611)
作者简介: 林荣(1983- ),女,天津人,硕士在读,研究方向:慢性病流行病学.
通讯作者: 刘新民
摘要: 目的 探讨与2型糖尿病肾病相关的影响因素.方法 采用1:1配对的病例对照研究,对139对研究对象进行2型糖尿病肾病(DN)相关危险因素的问卷调查;应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对亚甲基甲氢还原酶(MTHFR)多态性基因型进行检测,采用SPSS 13.0统计软件进行分析.结果 条件Logistic回归分析表明:携带MTHFR基因667T型基因、糖尿病病程长、并发糖尿病视网膜病变、白/球蛋白比值过低和纤维蛋白原过高均可增加DN的危险性;文化程度高、体育锻炼、患病后盐摄入控制、蔬菜摄入量多可降低DN发生的危险;交互作用分析表明,基因型与病程之间有相乘交互作用,患病后蔬菜摄入量及锻炼、白/球蛋白比值之间存在相乘交互作用.结论 DN的发生是多因素综合作用的结果.
关键词: 2型糖尿病肾病     亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性     基因多态性     糖尿病    
Influential factors of diabetic nephropathy among type 2 diabetes patients
LIN Rong, WANG Chun-na, LIU Xin-min    
Department of Epidemiology, School of Public Health, Tianjin Medical University Tianjin 300070, China
Abstract: Objective To explore the influencing factors of diabetic nephropathy.Methods A 1:1 sex and age matched case control study was conducted among 139 type 2 diabetic nephropathy(DN) patients.Information was collected through interview for demog raphic data,disease history,family disease history,die tetic habit,behavior pattern,social psychologic character,clinical data and laboratory data.Polymo rphism of methylenete trahydro folate(MTHFR) gene was assessed with polymerase chain reaction(PCR) and restriction fragment length polymorphism(RFLP).The effects of risk factors on DN in type 2 diabetes patients and the potential interaction between the risk factors were analyzed with conditional logistic regression model.Results Univariate conditional logistic regression analysis showed that 667Ta llele of MTHFR gene,long diabetes history,diabetic retinopathy,lower ratio of albumm/globulin(A/G),higher fibrinogen were associated with higher risk of DN incident.Higher education,more exercise,control of sugar intake,higher vegetable in take after DM incident were associated with lower risk of DN incident.The interaction existed between duration of DM and geno type,vegetable in take and exercise,vege table in take after DM.Conclusion The incidene of DN of type 2 diabetes patient is associdted with multiplerisk factors.
Key words: diabetic nephropathy     methy lenetetrahydro folate reductase(MTHFR)     gene polym orphism     diabetesm ellitus    

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)常见而难治的慢性并发症,为糖尿病的主要死因之一。近年研究表明,DN的发生是多因素作用、多步骤发生的过程,也是环境因素和遗传因素相互作用的结果。亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR)是同型半胱氨酸代谢中重要的酶,催化5,10-亚甲基甲氢叶酸还原为5-亚甲基四氢叶酸,研究者认为,MTH-FRC667T突变参与血栓形成性疾病〔1〕,该突变也与DN有关。本次研究旨在探讨糖尿病肾病发生的主要环境危险因素和MTHFR基因多态性与糖尿病肾病易感性的关系,以及环境-基因之间的交互作用。

1 对象与方法 1.1 对象

所有研究对象均来自天津医科大学代谢病医院2006年5月-2007年5月的2型糖尿病住院患者。病例诊断按照1999年世界卫生组织(WHO)、国际糖尿病联盟(IDF)公布,同年得到中华医学会糖尿病学会等认同的糖尿病诊断标准〔2〕;空腹血糖≥7.0mmol/L或餐后2h血糖≥11.1mmol/L,符合上述标准之一者,在次日复诊仍符合2标准之一者确诊为DM患者,并排除与DM相关的其他内分泌疾病、肝胆疾病等。24h尿白蛋白排泄率(UAER)30mg/24h连续2次以上的2型DM患者被诊断为DN〔3〕患者。按照与DN病例同性别、同年龄组的配比条件,在无糖尿病肾病的2型DM患者中按1：1配对选取对照,病例组和对照组共139对。

1.2 方法 1.2.1 问卷调查

采用自行编制的流行病学调查表进行回顾性调查。内容主要包括:一般人口学特征、饮食习惯、生活行为方式(如吸烟、饮酒)、精神创伤史、糖尿病现病史、糖尿病肾病现病史、疾病家族史、社会心理因素等。

1.2.2 体格及实验室检查

体格检查主要包括身高、体重、血压等;实验室检查主要包括空腹血糖、糖化血红蛋白、24h尿蛋白定量、肝肾功能、血脂等。

1.2.3 MTHFR基因型检测

(1)DNA提取:抽取各研究对象肘静脉血2mL,乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)抗凝后,-20℃冰箱保存备用;采用TKM法提取全血DNA。(2)参考文献〔4〕设计引物序列,上游:5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3';下游:5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3';由上海生物工程公司合成。PCR的扩增参数:95℃预变性4min,然后94℃45s,62℃45s,72℃45s,共循环30次;最后72℃延伸10min。(3)PCR产物鉴定:取PCR扩增物5μL,与1μL上样缓冲液充分混匀,在2.5%琼脂糖凝胶(含0.5mg/L溴化乙锭)中电泳,电泳缓冲液为1×TAE,电压为80V,电泳时间为50min,以DL2000为分子量标准。(4)酶切产物的鉴定:酶切反应结束后,取10μL酶切产物与2μL上样缓冲液混合均匀后,用微量加样器加入2.5%琼脂糖凝胶(含0.5mg/L溴化乙锭)中电泳,电泳缓冲液为1×TAE,以DL2000为分子量标准,电泳参数为:90V,50min,在紫外分析仪下观察结果。

1.3 统计分析

采用SPSS 13.0软件进行统计分析,基因型频率用χ2检验,应用Logistic多因素回归分析估计危险度OR及其95%CI。统计检验水平取双侧α=0.05。

2 结 果 2.1 一般情况

共收集病例和对照139对,其中男性69对,占49.64%,女性70对,占50.36%,平均年龄(61.64±10.44)岁,年龄最小33岁,最大85岁。病例组年龄33~85岁,平均年龄(61.96±10.31)岁;对照组年龄35~82岁,平均年龄(61.35±10.60)岁。2组年龄构成差异无统计学意义,均衡性较好。

2.2 DN患者可疑危险因素条件Logistic回归多因素分析(表 1)
表 1 DN多因素条件Logistic回归分析

单因素条件Logistic回归分析经混杂因素调整后,有意义的因素共21个,对这些因素进行多因素条件Logistic回归分析。结果显示,DN的危险因素有MTHFR基因667T型基因、病程长、文化程度低、不锻炼、盐摄入控制不佳、蔬菜摄入量少、并发DR、白/球蛋白比值过低和纤维蛋白原过高。

2.3 MTHFR基因电泳结果 (图 1)
图 1 MTHFR基因PCR限制性酶切产物电泳结果

应用限制性核酸内切酶HinfI对MTHFR基因PCR扩增产物的多态位点进行酶切。其中CC型只有198bp片段(无HinfI酶切位点);CT型可见198和175bp2个片段;TT型仅见175bp片段。

2.4 MTHFR基因分布及与 DN易感性的关系 (表 2)
表 2 不同组别MTHFR等位基因和基因型频率分布

MTHFR667T等位基因频率在DN组和DM组中的分布差异有统计学意义(χ2=28.11,P<0.01);与C/C基因型比较,携带C/T(OR=2.362,95%CI=1.276~4.373)和T/T(OR=2.568,95%CI=1.481~4.454)基因型可显著增加DN发病风险。

2.5 交互作用分析 (表 3)
表 3 不同因素交互作用与DN关系的条件Logistic回归分析

对多因素分析中有意义的因素进行交互作用分析。结果显示,基因型与病程之间有相乘交互作用;患病后蔬菜摄入量与锻炼、白/球蛋白比值之间存在相乘交互作用;未发现其他因素间存在相乘交互作用。

3 讨 论

本次研究结果显示,MTHFR各基因型在DN组和DM组分布差异有统计学意义(χ2=20.02,P<0.01);携带CT型和TT型DM患者发生DN的危险分别是CC型患者的2.362倍和2.568倍。提示MTHFRC677T与中国2型DM患者合并DN有关,携带等位基因T的个体增加了患DN的危险性,T等位基因是DN的易感基因。多因素条件Logistic回归分析结果提示,随着DM病程的增加,DN发生的危险性增加,与国内外研究结果一致〔5, 6〕。交互作用分析表明,病程与MTHFR基因型存在相乘交互作用,两者同时存在时,增加DN患病的风险。文化程度高、体育锻炼、盐控制和患病后蔬菜摄入增多均对DN的发生起保护性作用,对DN的发生有重要意义。本次研究发现,糖尿病视网膜病变与DN呈正相关,它的存在使发生DN的危险增加5.5236倍,提示DN、糖尿病视网膜病变和周围神经病变的发生是DM微血管病变在不同靶器官的表现,与Klein〔7〕等研究结果一致。在生化指标方面,白/球蛋白比值增加使得发生DN的危险降至0.124,它与患病后蔬菜摄入量存在交互作用,同时存在时作用加强。因此,应倡导健康的生活方式,改变不良的生活习惯,定期进行体检,加强DN的预防和早期治疗。

参考文献
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