中国公共卫生  2010, Vol. 26 Issue (9): 1103-1104   PDF    
引用本文
罗毅平, 赵一俏, 薛耀明, 沙建平, 胡春玲. 脂联素基因表达与妊娠糖尿病关系[J]. 中国公共卫生, 2010, 26(9): 1103-1104.
LUO Yi-ping, ZHAO Yi-qiao, XUE Yao-ming, et al. Relationship between expression of adiponectin mRNA in adipose and placenta tissue and gestational diabetes mellitus[J]. Chinese Journal of Public Health, 2010, 26(9): 1103-1104.
脂联素基因表达与妊娠糖尿病关系
罗毅平1, 赵一俏1, 薛耀明2, 沙建平2, 胡春玲1    
1. 广州医学院附属广东省妇幼保健院内科, 广州 510010;
2. 南方医科大学附属南方医院内分泌科
收稿日期: 2010-02-21.
基金项目: 广东省医学科研基金(A2007085);广东科技计划项目(2007B030501010)
作者简介: 罗毅平(1977- ),男,广东大埔人,副主任医师,博士,主要从事妊娠合并内分泌疾病研究工作.
摘要: 目的 检测脂联素mRNA在妊娠糖尿病患者脂肪及胎盘组织中的表达及在妊娠糖尿病发病机制中的作用.方法 用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测60名正常产妇及60例妊娠糖尿病(GDM)患者剖宫产后脂肪及胎盘中脂联素基因在转录水平的表达.结果 GDM患者脂肪组织中脂联素mRNA表达量为(1.05±0.12),正常妊娠者为(1.28±0.14),GDM患者低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P＜0.01);脂肪组织中脂联素mRNA表达量与GDM胰岛素抵抗指标相关(P＜0.01);GDM患者与正常妊娠患者胎盘组织中脂联素mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脂肪组织脂联素表达的减少可能是GDM患者胰岛素抵抗的重要原因;胎盘脂联素的表达与GDM及其胰岛素抵抗关系不明显.
关键词: 妊娠糖尿病     脂联素     半定量逆转录聚合酶链反应    
Relationship between expression of adiponectin mRNA in adipose and placenta tissue and gestational diabetes mellitus
LUO Yi-ping, ZHAO Yi-qiao, XUE Yao-ming, et al    
Department of Internal Medicine, Guangdong Provincial Women and Children's Hospital Guangzhou 510010, China
Abstract: Objective To investigate the expression of adiponectin mRNA in adipose and placentatissue among normal pregnant women and gestational diabetes mellitus(GDM) patients in order to evaluate the role of adiponectin in GDM.Methods Reverse trascription polymerase chain reaction(RT-PCR) was used to detectad iponectin expression level in adipose and placenta of 60 GDM cases and 60 normal controls after caesarean section delivery.Results The expression of adiponectin was significantly decreased in the adipose tissue of GDM cases campared to that of the normal controls(1.05±0.12 vs 1.28±0.14,P < 0.01) Conclusion There sults prove that the a lteration of adiponectin mRNA expression in adipose play an important role in the patho genesis of GDM.
Key words: gestational diabetes mellitus     adiponectin     RT-PCR    

妊娠糖尿病(GDM)是指妊娠期首次发现或发生的糖尿病和糖耐量异常,约占妊娠妇女总数的4%〔1〕。妊娠期糖尿病会对孕妇及胎儿产生严重不良影响,对母婴危害极大。近年来研究发现,血清脂联素水平下降与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)及GDM的发生有密切关系〔2, 3〕。妊娠期血清脂联素主要来自脂肪和胎盘组织,但2种组织所产生的脂联素水平与GDM及IR的相关性尚未完全阐明〔4〕。本研究对GDM患者及正常孕妇脂肪和胎盘组织脂联素mRNA的表达进行检测,探讨不同组织中脂联素基因的表达与GDM胰岛素抵抗之间的关系。

1 对象与方法 1.1 对象

选择2006年9月-2008年6月在广东省妇幼保健院产科门诊行常规产前检查并入院进行择期剖宫产的广东籍汉族初产妇120人,其中正常孕妇(NGT)60人,妊娠糖尿病孕妇(GDM)60例。

1.2 方法 1.2.1 流行病学调查及相关生化指标检测

妊娠糖尿病诊断标准参照文献〔1〕,排除孕前患有糖尿病、高血压、多囊卵巢综合征、近期有外伤史以及近期使用过糖皮质激素史者。孕妇均于妊娠第24~28周进行75g葡萄糖耐量试验(OG-TT),使用稳态模式(HOMA-IR)评估胰岛素敏感性(HOMA-IR=空腹血糖×空腹胰岛素/22.5);HOMA-IR>1.66则为IR〔4〕。孕期体质指数(BMI)的变化用△BMI表示(△BMI=产时BMI-产前BMI)。

1.2.2 仪器与试剂

焦碳酸二乙酯(DEPC,美国Sigma公司);引物序列(南京金思特基因技术有限公司);Trizol(美国Invitrogen公司);UV-1206分光光度计(日本SHIMODZU公司);Oligo(dNTPs)(上海生工生物工程技术服务有限公司);GDS7600凝胶扫描系统(英国UVP公司);PE9700PCR扩增仪(美国PE公司)。

1.2.3 标本收集和处理

于剖宫产术中及分娩后0.5h内分别取孕妇皮下脂肪和胎盘中央母体面组织各1块,直径分别约为0.3和1cm,避开钙化灶,放入经焦碳酸二乙酯处理的Eppendorf管中,置于液氮中备用。

1.2.4 引物设计

根据Genebank中脂联素及β-actin开放读框序列,利用Primer5.0软件设计引物序列。脂联素上游引物5'-CCATCTCCTCCTCACTTCCATT-3',下游引物5'-TTTCACCGATGTCTCCCTTAGG-3',PCR产物片段长度316bp;以β-actin作为内参照,上游引物5'-CGGGGTCACCCACACTGTGC-3',下游引物5'-CTAGAAGCATTTGCGGTGGACGATC-3',PCR产物片断长度163bp。

1.2.5 总RNA提取

取0.1g组织置匀浆器中,加1mLTrizo,l按说明书匀浆后,加氯仿、异丙醇提纯沉淀RNA,置于波长260和280nm处测量其吸光度,选用A260/A280比值为1.8~2.0者用于逆转录反应。

1.2.6 cDNA合成及PCR反应

将5μg的总RNA以Oligo(dNTPs)为随机引物反转录成相应的cDNA,再以合成的cDNA为模板,在PCR仪上扩增,反应条件为95℃5min后,95℃30s,56℃45s,72℃1min,35个循环,最后72℃10min。

1.2.7 产物鉴定

取5μLPCR反应产物加入1μL上样缓冲液,经1.2%的琼脂糖凝胶电泳后,在紫外投射反射仪下观察结果,并在凝胶成像仪上扫描记录各特异性DNA扩增片断灰度,采用DNAMarker(DL2000)作为DNA长度标志,以目的基因PCR扩增片断灰度与相应内参的扩增片断灰度比值作为其mRNA表达水平的相对参数。

1.3 统计分析

采用SPSS 13.0软件进行两样本均数t检验以及两计量观察指标直线相关分析。

2 结 果 2.1 一般特征

正常孕妇(NGT)60人,平均年龄(29.03±2.12)岁,平均孕周(38.6±0.93)周,△BMI为(6.84±1.19)kg/m2;妊娠糖尿病孕妇(GDM)60例,平均年龄(28.25±2.24)岁,平均孕周(38.13±1.18)周,△BMI为(6.72±1.19)kg/m2;2组孕妇年龄、孕周及孕期体质指数变化差异无统计学意义(t=0.577,P=0.565)。孕24~28周时,GDM组空腹血糖为(6.49±1.49)mmol/L,空腹胰岛素为(14.48±3.79)U/L,HOMA-IR水平为(4.21±1.69);NGT组空腹血糖为(5.14±0.88)mmol/L,空腹胰岛素为(9.82±1.85)U/L,HOMA-IR水平为(2.23±0.54);2组比较差异均有统计学意义(t=6.056,t=8.555,t=8.646,均P=0.000)。

2.2 不同组别孕妇脂肪及胎盘组织脂联素mRNA的表达(图 1,2)
注: 1, 2, 3: 内参 β-actin (163 bp)。 图 1 脂肪组织脂联素mRNA的表达

注: 4, 5, 6: 目的基因脂联素 (316 bp)。 图 2 胎盘组织脂联素mRNA的表达

脂联素mRNA在NGT组及GDM组脂肪组织、胎盘组织均有表达,GDM组脂肪组织脂联素mRNA的表达为(1.05±0.12);NGT组为(1.28±0.14),GDM组脂肪组织脂联素mRNA的表达明显低于NGT组,差异有统计学意义(t=9.862,P=0.000)。GDM组胎盘组织脂联素mRNA的表达为(1.02±0.11),NGT组为(1.04±0.10),2组比较差异无统计学意义(t=1.036,P=0.302)。

2.3 脂联素mRNA表达与妊娠糖尿病胰岛素抵抗相关性

以HOMA-IR为因变量,其他变量为自变量进行回归分析。结果表明,对HOMA-IR影响从大到小依次为空腹血糖、空腹胰岛素、脂肪组织脂联素mRNA、孕期体质指数变化、胎盘组织脂联素mRNA。对各自变量单独检验,自变量空腹血糖(P=0.000)、空腹胰岛素(P=0.000)、脂肪组织脂联素mRNA(P=0.012)对因变量HOMA-IR有明显影响。

3 讨 论

脂联素是脂肪细胞分泌的特异性蛋白质,是胰岛素敏感性的重要调控及预测因子〔2〕。Wang等〔5, 6, 7〕研究发现,脂联素水平的下降与妊娠糖尿病的发病密切相关,可反映母体胰岛素抵抗的状态。还有研究发现,从妊娠开始至结束,在人和鼠的胎盘组织中均有脂联素及其受体(R1和R2)基因mRNA的表达〔8〕。本研究亦证实脂肪及胎盘组织中均存在脂联素mRNA的表达,但正常组、GDM患者胎盘组织中脂联素基因表达差异无统计学意义。

脂联素的胰岛素增敏作用是通过增加骨骼肌脂肪酸氧化以及抑制肝糖异生实现的〔3〕。另外,脂联素可以抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的合成及在内皮细胞中的作用,而TNF-α本身可直接影响胰岛素信号链导致胰岛素抵抗〔7〕。本研究发现,与正常对照组比较,妊娠糖尿病组脂肪组织脂联素mRNA的表达明显降低,并且与胰岛素抵抗显著相关。

结果表明,GDM与脂肪组织脂联素的表达减少,进而增加胰岛素抵抗水平相关,而胎盘组织中脂联素表达与GDM的相关性不明显。因此,进一步研究GDM患者脂肪组织脂联素表达减少的分子机制以及如何增加其表达,以阻断和抑制GDM和胰岛素抵抗的发生发展,可能成为预防和治疗GDM的重要途径。

参考文献
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