大蒜的生物学和药物学性能与所含硫化物尤其是丙烯基硫化物有关,其中最主要成分就是阿藿烯﹙ ajoene ﹚^〔1〕。阿藿烯,又名大蒜烯,因无大蒜素的辛辣味和蒜臭味且较为稳定而受到关注。研究发现,阿藿烯具有抗血栓、抗菌消炎、免疫调节和抗肿瘤等作用,在保健食品、药品的开发中极具潜力^〔2〕。本实验利用蒜氨酶法合成阿藿烯,以腺苷二磷酸 (ADP)及凝血酶(Thr)作诱导剂,探讨阿藿烯对兔血小板聚集作用影响。

阿藿烯(本实验室合成,顺反式混合体,含量85%);ADP (广州威佳科技有限公司);Thr (美国Sigma公司);乙酰水杨酸(ASA)(上海晶纯试剂公司);LBY-NJ2血液聚集仪(北京普利生化仪器中心)。

雌性新西兰兔(广东省医学实验动物中心),体重2.2~2.3 kg。麻醉后右侧颈总动脉插管取血。全血按9:1加入3.8%抗凝剂枸橼酸钠,混匀,800 r/min离心 5min,取上清,即为富血小板血浆(PRP);剩余血液继续3 000 r/min离心10 min,得贫血小板血浆(PPP)^〔3〕。用PPP调零,以PRP为血小板供体,实验分6组,分别为阳性(ASA)、溶媒二甲基亚砜(DMSO)、空白对照和阿藿烯低、中、高剂量组,(8.5,11.3,17 mg/L)。每组6个平行样。

分别取200 μL PRP,与不同浓度的阿藿烯溶液、ASA,DMSO溶液混合,37℃温育5 min后,分别加入 20 μmol/L的ADP 20 μL、15 U/mL的Thr 20 μL,利用LBYNJ2血液聚集仪描记血小板聚集曲线,观察2,4 min时的聚集率和最大聚集率(MAR)。血小板聚集抑制率(AIR)按下式计算:AIR (%)=溶媒管最大聚集率-给药管最大聚集率/溶媒管最大聚集率×%。

采用SPSS10.0统计软件进行分析,组间差异比较用显著性t检验。

表 1

表 1 阿藿烯对ADP 诱导的血小板聚集的影响(%，x± s，n =6)

表 1 阿藿烯对ADP 诱导的血小板聚集的影响(%，x± s，n =6)

给予阿藿烯后,除低剂量组外,中、高剂量组对血小板聚集的抑制作用均较为明显,不同时间血小板聚集率随阿藿烯浓度增加而下降。

表 2

表 2 阿藿烯对凝血酶诱导的血小板聚集的影响(%，x± s，n =6)

表 2 阿藿烯对凝血酶诱导的血小板聚集的影响(%，x± s，n =6)

给予阿藿烯后,低、中、高各剂量组对血小板聚集的抑制作用均较为明显,血小板聚集率随阿藿烯浓度增加而下降。

血小板聚集指血小板被活化后互相之间黏附并形成聚集物的现象,是形成血栓的重要原因。ADP和凝血酶等诱导剂均能诱导血小板的活化,但其诱导强度和机制不同。ADP属于中等强度血小板聚集诱导剂,主要是通过作用于血小板膜,使有限的颗粒内容物释放,经G蛋白连接受体,促进细胞外钙内流而达到促进血小板聚集的作用^〔4〕。而凝血酶则是一种强诱导剂,可引起不依赖于血小板颗粒分泌的聚集反应,通过凝血酶-血小板膜蛋白糖(GPIb)相互作用诱导聚集反应^〔5〕。

阿藿烯是血栓形成的天然抑制剂,它可以抑制由ADP、凝血酶、花生四烯酸和胶原蛋白等多种诱导剂引起的血小板聚集^〔6〕,其机制一方面是直接与纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa相互作用,阻断纤维蛋白原的促血小板黏附作用,降低血小板酪蛋白磷酸酶活性而抑制血小板聚集^〔7〕,另一方面通过调节血小板浆膜粘滞度,起到与大蒜多糖相同的降低全血粘度及血浆粘度,从而减少血小板的黏附作用^〔8〕。本研究结果提示,用蒜氨酶法所合成的顺反式混合体阿藿烯具有较好的抗血栓作用,能够抑制ADP和凝血酶所诱导的血小板聚集,剂量效应明显。