恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病。从天然药物中寻找高效、低毒抗癌药物是肿瘤治疗领域重要课题之一。胡颓子属(Elaea gnus)属于珍贵的药食两用植物,国内外研究表明^〔1〕,其主要成分熊果酸具有广泛的生物学效应,包括抗癌、对肝损伤保护、抗菌消炎和抗病毒作用。长叶胡颓子(Elaeagnus bockiiDie ls)是胡颓子属的一种。李玉山等报道,长叶胡颓子具有明显的免疫调节和抗炎作用^〔2〕。本研究观察长叶胡颓子叶对荷瘤小鼠白细胞介素-2(IL 2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF α)影响,探讨长叶胡颓子对免疫系统调节作用及抗肿瘤作用机制。

长叶胡颓子(采自湖北省巴东县),水煎3次,纱布过滤合并浓缩成水煎液(1 g/mL),4 ℃保存备用。环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司),批号0012181;四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)(美国Sigma公司);IL-2、IFNγ试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司);S180细胞(重庆医科大学病理教研室)。MK3型酶标仪(芬兰雷勃中国总部)。

昆明种小鼠50只,体重(20±2) g,6~8周龄,雌雄兼用(本院实验中心)。以S180肿瘤细胞株进行小鼠肿瘤移植,接种第8 d无菌取腹水,用0.9%生理盐水 1:3稀释,随机取小鼠40只,每只鼠右侧腋部皮下注射0.2 mL瘤细胞悬液,制备荷瘤鼠,另外10未荷瘤小鼠作为正常对照组。

将荷瘤小鼠随机分为4组,每组10只,分别为模型组、胡颓子组、环磷酰胺组和胡颓子+环磷酰胺组。正常对照组、模型组与环磷酰胺组用蒸馏水灌胃0.4 mL/只,胡颓子及胡颓子+环磷酰胺组用水煎液灌胃0.4 mL/d (含生药250 m g),连续7 d;环磷酰胺组和胡颓子+环磷酰胺组第3d腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg。第8 d脱颈椎处死各组动物。取血清,检测IL-2、IFN-γ水平;同时无菌取脾,检测 TNF-α水平。

IL-2、IFN-γ用ELISA法检测按试剂盒说明书操作;TNF-α检测采用MTT法^〔3〕。

采用SPSS 17α0软件进行统计分析,组间比较采用t检验。

结果显示,模型组、环磷酰胺组TNF-α的分泌水平明显低于正常对照组(P < 0.05);胡颓子组及胡颓子+环磷酰胺组TNF α的分泌明显高于模型组、环磷酰胺组(表 1)。表明长叶胡颓子叶水煎液能明显促进荷瘤鼠TNF-α分泌,在一定程度上拮抗环磷酰胺的抑制作用。与正常对照组比较,模型组与环磷酰胺组IFN-γ、IL-2水平明显降低(P < 0.01);当用长叶胡颓子叶水煎液灌胃后,IFN-γ、IL-2水平明显升高;长叶胡颓子叶水煎液与环磷酰胺合用,可以拮抗环磷酰胺抑制作用,提高IFN-γ、IL-2水平。

表 1

表 1 不同组别小鼠TNF-α、IFN-γ、IL-2分泌比较(n=10, x±s)

表 1 不同组别小鼠TNF-α、IFN-γ、IL-2分泌比较(n=10, x±s)

在控制具有免疫原性肿瘤细胞的生长中,T细胞介导的细胞免疫应答起重要作用,而肿瘤免疫逃逸机制主要有免疫系统不能识别抗原和免疫抑制造成的肿瘤特异性T细胞数量减少和功能缺陷^〔4〕。CD⁺ ₄ T细胞又称辅助性T淋巴细胞 (Th),Th细胞有2种亚群,即Thl和Th2。它们通过分泌细胞因子参与机体免疫调节。Thl类细胞因子包括IL-2、IFN-γ、 TNF-α等,上调细胞免疫应答;Th2类细胞因子主要促进体液免疫应答。正常机体的Thl/Th2型细胞因子处于动态平衡,若平衡失调,偏重于Thl或Th2时,称为Th l/Th2偏移。目前肿瘤免疫治疗研究重点集中在改变免疫耐受和提高宿主T细胞反应。IFN-γ、IL-2是Th1细胞分泌的细胞因子,又可以促进Th1细胞的增殖和分化,刺激细胞毒性T细胞(CTL)的增殖和分化,增强细胞免疫功能,并可增强自然杀伤细胞(NK)的杀伤能力;TNF-α则具有杀伤或抑制肿瘤细胞的作用。最近研究表明,肿瘤细胞自身也分泌Th2类细胞因子,抑制机体正常的细胞免疫,并与肿瘤病程进展及恶性程度呈正相关^{〔5, 6〕}。长叶胡颓子叶水煎液通过促进IFN-γ、IL-2、TNF-α的分泌,纠正荷瘤机体的Th1/Th2漂移现象,维持Th1的优势状态,重建机体细胞免疫功能而发挥抗肿瘤作用。