依赖还原型辅酶I/II:醌氧化还原酶(NQO1)是一种II 相代谢酶,以还原型辅酶II (NAD PH)为受体,催化醌双电子还原反应,对醌及其衍生物发挥解毒作用。醌作为一种有毒化合物,能诱发哺乳动物细胞癌变和坏死,因而该酶与肿瘤的关系受到重视。研究表明,NQO1基因609位点C/T单核苷酸多态性可增加患肿瘤的危险性^{〔1, 2〕}。为此,采用病例对照研究方法,于2005年7月-2006年12月对福建省部分大肠癌患者进行NQO1基因609 C/T多态性分析,并对NQO1基因与环境因素的交互作用进行分析,以阐明其相互关系,为大肠癌的防治提供理论依据。

病例为在福州市5所医院经内窥镜及病理诊断确诊的大肠癌新发病例。按1:1配比的方式随机选取同期、 同医院、非肿瘤病人为对照,匹配条件为年龄相差±3岁、同性别、同居住地、同民族。研究对象均在福建省居住> 10年。

采用自行设计的调查表,由调查员采用面对面调查并填写的方式收集资料。调查内容包括:(1)人口学特征和生活习惯(包括吸烟、被动吸烟、饮酒、饮茶的情况及体育锻炼情况);(2)饮食因素(包括猪油、肥肉、猪肉、牛羊肉、粗粮、腌制品、油炸食品、蔬菜、水果的食用情况)和饮用水类型(井水、自来水、河水、泉水);(3)肠道疾病史(急性或慢性胃肠炎)及肿瘤家族史(消化道肿瘤家族史和其他肿瘤家族史)。全部研究对象均抽取静脉血2 mL。

限制性内切酶HinfI、TaqDNA聚合酶 (日本TaKaRa公司);基因组DNA提取试剂(DNAzol)(美国 Biotek公司)。UNO II型PCR仪(德国Biometra公司):UV- 1601型紫外分光光度计、75S/00771型凝胶成像分析系统(美国BioRad公司)。

C609T多态性检测 研究对象的基因组 DNA样品分离自外周血淋巴细胞。应用PCR技术扩增含 NQO1 C609T多态性位点的基因序列。检测方法参照文献 〔6〕。

应用SPSS 11.5软件进行统计分析。病例组与对照组之间基本情况和危险因素的比较采用χ²检验或t 检验。用Hardy-Weinberg遗传平衡定律拟合、χ²检验分析对照组NQO1各基因型频率,评估其代表性。用条件Logistic多元回归模型,计算NQO1基因多态性与大肠癌风险的比值比 (OR)及其95% CI。

共调查286对病例和对照,其中男性192 对,占67.13%;女性94对,占32.87%。病例组中结肠癌98 例,直肠癌188例。调查对象年龄为30~75岁,病例组平均年龄为(57.10 ±6.25)岁,对照组平均年龄为(56.87 ±5.83) 岁,2组年龄差异无统计学意义。病例与对照组均衡性检验及相关危险因素的分布比较显示,病例组与对照组在居住地、 人均收入上差异均无统计学意义。与对照组比较,病例组文化程度低、农民所占比重大,接触农药、吸烟、饮酒频率高,饮用井水、泉水频率高。喝茶、吃粗粮的频率低,蔬菜、水果摄入量低。在分析NQO1基因多态性与大肠癌关系时,对上述分布不均衡的因素加以控制。

表 1

表 1 不同组别NQO1基因型及频率分布

表 1 不同组别NQO1基因型及频率分布

对照组的NQO1 609 C/C、C/T和T/T基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P > 0.05)。3种基因型频率在2组中分布差异均有统计学意义(χ²=12.40,P < 0.05)。Logistic回归分析表明,以C/C基因型作为参照基因型,携带C/T和T/T基因型的个体罹患大肠癌的风险OR分别为2.06(95% CI= 1.37~3.10)和2.64(95% CI=1.57~4.44)。T、C等位基因频率在2组中分布差异有统计学意义(χ²=18.92,P < 0.05)。

吸烟与 NQO1 C609T变异的交互作用分析显示,以携带C/C基因型,且不吸烟的个体为参照,携带NQO1 C609T变异基因并吸烟的个体患大肠癌的调整OR为19.31(95% CI=6.17~ 60.38),是只携带NQO1 C609T变异个体的危险度的13.50 倍,交互作用判断为相乘交互作用;暴露于饮用水和携带 NQO1 C609T变异基因型也显示为相乘交互作用,携带NQO1 C609T变异基因型同时暴露于饮用井水和泉水的个体患大肠癌的调整OR值分别为11.06和51.02,而只暴露于饮用井水、泉水和携带NQO1 C609T变异基因型的个体患大肠癌的调整OR值分别为1.87,6.16和2.63。本研究也显示,携带危险基因型与食物类型呈相加交互作用。食用粗粮可降低携带NQO1 C609T变异基因型的个体患大肠癌的危险。未发现 NQO1 C609T变异基因型与饮酒及饮茶存在交互作用。

NQO1基因cDNA C609T变异与大肠癌的关系目前尚无定论。有研究表明,NQO1 C609T变异为大肠癌的危险因素^{〔3, 4〕};但也有学者认为,NQO1 C609T变异与大肠癌的发病无关^{〔5, 6〕},而与不同种族的遗传易感性有关。本研究结果表明,C609T变异与大肠癌密切相关,大肠癌组C/T,T/T基因型及T等位基因频率均高于对照组。调整年龄、性别、职业和文化程度、饮食、吸烟、饮酒、肿瘤家族史等影响因素后,携带 C/T、T/T基因型的个体患大肠癌的危险均高于携带NQO1 C/C基因型的个体,其OR值分别为2.061和2.640,提示 NQO1 C609T多态性与福建省居民大肠癌的发生密切相关。 大肠癌的环境危险因素和NQO1的多态性交互作用分析结果显示,NQO 1607 C/T、T/T基因型可能与吸烟、饮用水及饮食类型发生交互作用而增加个体患大肠癌的危险度。其原因可能是NQO 1609 C/T和T/T基因型表现为该酶活性的下降,减弱了NQO1对醌类化合物的解毒及改变对特定原癌基因及抑癌基因功能的影响,从而使机体罹患癌症的危险增加^〔7〕。 本研究还发现,常吃粗粮可降低携带NQO 1609 C/T和T/T 基因型的个体患大肠癌的危险。NQO1基因C609T变异可能是福建省居民大肠癌发病的重要危险因素,通过对NQO1基因多态性检测,筛选出有大肠癌易感倾向的人群,对其采取保护措施,减少其与环境致癌物接触,可降低大肠癌的发病风险。