外来病原微生物入侵一般只有在暴发传染病时才会被察觉,因此,国境口岸加强对外来病原微生物的监测尤为重要。国际船舶作为载体在外来病原微生物的传播过程中起着重要作用^〔1〕,病原微生物在压载水或沉积物中的丰度虽不高,但遇到合适的条件就会迅速繁殖,对周边环境和人类健康造成威胁。国际船舶压载舱中的压舱水病原微生物的研究国内外已有报道^{〔2, 3, 4〕},而船舶压载舱沉积物中病原微生物的种类分析国外仅有数篇报道^〔5〕,国内文献报道较少。本研究通过大连湾停靠坞修的国际船舶压载舱沉积物中病原微生物的种类,探讨压载舱沉积物排放管理措施,为制定相应预防控制措施提供参考依据。

2008年5月至2009年6月停泊在大连湾中远船厂的国际航行船舶,共选取45艘,采集船舶压载舱底部剩余沉积物共48份。

营养琼脂、碱性蛋白胨水、伊红美蓝琼脂(EMB),蔗糖平板(TCBS)琼脂,SS琼脂、山梨醇麦康凯琼脂基础、噻孢霉素、亚碲酸钾溶液、生化鉴定套装(北京陆桥公司)。革兰阴性菌(GN)鉴定卡、VITEK II微生物自动分析系统(法国生物梅里埃公司)。

按照沉积物0.5 mg/0.5 mL样品接种10 mL增菌液的比例将压载舱淤泥分别接种到营养肉汤和碱性蛋白胨水中,37℃过夜震荡摇菌。增菌后划线接种在选择培养基上,过夜培养挑取阳性菌落纯培养后鉴定,霍乱弧菌鉴定方法参见《霍乱防治手册》^〔6〕。其他微生物细菌检测方法及判定标准按文献^〔5〕。

将样品增菌后的混合菌液分别接种 EMB、SS、山梨醇麦康凯培养基上,置于37℃恒温箱过夜培养,结果48份样品中有12份样品大肠埃希菌呈初筛阳性,阳性率为25%。

在经碱性蛋白胨水增菌后,将混合菌液分别在柯玛嘉弧菌培养基和TCBS培养基上培养,疑似菌落经生化实验鉴定后48份样品有5份样品呈霍乱弧菌阳性,在柯玛嘉弧培养基上培养的菌落,霍乱弧菌表现为大的、蓝绿色菌落。TCBS培养基上培养的菌落,霍乱弧菌表现为大的、光滑、黄色、稍平、具有不透明中心和半透明边缘,其检出率为10%。

在经碱性蛋白胨水增菌后,将菌液分别在柯玛嘉弧菌培养基和TCBS培养基上培养,疑似菌落经生化实验鉴定后48份样品有8份样品呈副溶血弧菌阳性,阳性率为16.7%。

将选择性培养基筛出的疑似阳性菌落二次划线并纯培养后上机鉴定。用革兰阴性鉴定卡检测共鉴定出鲁氏不动杆菌、不动杆菌属、温和气单胞菌、维罗纳气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌肺炎亚种、海藻希瓦氏菌、少动鞘氨醇单胞菌、泛菌属、解藻朊酸弧菌、霍乱弧菌、河流弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌,15种细菌,除不动杆菌属、海藻希瓦菌、泛菌属外,其余均有致病性。

国际船舶在航行过程中压舱水不断与外界交换,随之带来的一些淤泥和各种微生物逐渐沉积在压载舱的底部。沉积物中具有很多微生物生活所需的各种条件,是微生物生长、栖息、繁殖的良好基地^〔6〕。与压舱水相比,微生物在沉积物中的生存环境相对更加稳定。因此,如果有病原微生物在压载舱沉积物中生存,这些有害的微生物在国际船舶航行过程中不断地从沉积物中繁殖并扩散到压舱水中,随压舱水的交换而播散。本次调查45艘国际航行船舶采集48份压载舱沉积物样品中共检出15种细菌,其12种有致病性。结果显示,大肠埃希菌在沉积物中的阳性率为25%,霍乱弧菌的检出率为10%。提示国际船舶压载舱沉积物中的病原微生物种类不容忽视^{〔7, 8〕}。

国际船舶压载舱中的淤泥一般都是在船舶进入船厂进行拆解或是修理过程中才被清理上岸。由于对淤泥潜在危害的认识不足,目前尚无一个专门的法规对船舶清出的淤泥进行管理。我国对入境船舶压载舱压载水和沉积物排放的处理依据是是否来自检疫传染病疫区,对来自非检疫传染病疫区国家和地区船舶的压载舱淤泥排放前一般不实施检疫处理。而正是因为这些船舶压载舱中的沉积物携带致病性病原菌。建议不论船舶是否来自霍乱疫区,均应对压载舱沉积物实施有效的卫生处理后方可在我国境内港口排放。