麻疹是由麻疹病毒(MV ) 引起的急性呼吸道传染病。目 前认为麻疹发病机制是全身性迟发超敏性细胞免疫反应^〔1〕。 人体感染病毒后,IgM 在早期感染中发挥重要的免疫防御作 用^〔2〕,T 淋巴细胞大量分化繁殖,形成致敏淋巴细胞,能与麻疹 病毒抗原发生免疫反应,释放淋巴因子,病变处形成组织坏死 和炎症反应,从而导致机体免疫状态改变。为探讨麻疹患儿的 免疫状态变化与其发病机制的关系,对174例麻疹患儿进行T 细胞和自然杀伤( NK)细胞的检测分析。现报告如下。

选择2008年2 月-7月本院住院麻疹患儿174 例作为病例组,年龄5 个月~ 6 岁,平均( 12. 8 ± 10. 0) 月龄; 男性117例,女性57 例。选择本院门诊体检婴幼儿34人为 对照组,男性24人,女性10人,年龄6个月~ 5岁,平均( 15. 3± 8. 4)月龄,近期无病毒感染史。

异硫氰基荧光素( FITC )、藻红蛋白 ( PE)、藻红蛋白-花青素( PC5)荧光素标记单克隆抗体IgG1 -FITC / IgG1-PE / IgG1-PC5,CD₄-FITC /CD₈-PE /CD₃- PC5、CD₃-FITC /CD16CD56-PE ( 美国Imm unotech 公司); FlowμCheck^TM Fluorophe res(美国Beckm an Cou lter公司) ; 赛润 ELISA麻疹病毒IgG / IgM 试剂盒(德国V IR ION SERION 研发 有限公司) ; XL-MCL 型流式细胞仪( 美国Beckm an Coulter 公司); Q-PREP 标本处理器(美国Beckm an Cou lter公司); CD₃200血细胞计数仪(美国雅培公司)。

病例组患儿在 入院次日(出疹期)采集2 mL EDTA-K2 抗凝全血,充分混 匀,取IgG1-FITC / IgG1-PE / IgG1-PC5,CD₄-FITC /CD₈- PE /CD₃-PC5,CD₃-FITC /CD16CD56-PE 荧光素标记单克 隆抗体各20 μL,分别与100 μL抗凝血充分混匀,室温暗处 避光反应15 m in,使用Q-PREP标本处理器进行溶血、固定、 混匀,24 h内使用Epics XL-MCL型流式细胞仪分析总T 细 胞( CD₃⁺ )、CD₄ ( CD₃⁺ CD₄⁺ ) 细胞、CD₈ ( CD₃⁺ CD₈⁺ ) 细胞和NK ( CD₃-CD16CD56+ )细胞; 同时采用CD₃200 血细胞计数仪进 行全血标本血细胞计数分析,得出淋巴细胞绝对值。用淋巴 细胞绝对值乘以各细胞百分率,得出各亚群绝对计数。

采用ELISA法,检测麻疹病毒活 性。检测结果依据标准曲线和评估表进行判断,临界值范围: > 15 U /mL为麻疹病毒高活性组; 10 ~ 15 U /mL为麻疹病毒 低活性组; < 10 U /mL为阴性。对麻疹病毒高活性组与低活 性的细胞百分比和绝对值进行比较。

采用SPSS 13.0软件进行分析,均数间比较 采用t检验。

表 1

表 1 不同组别儿童外周血T淋巴细胞和NK细胞百分率比较(x±s, % )

表 1 不同组别儿童外周血T淋巴细胞和NK细胞百分率比较( x±s, % )

表 1 可见,病例组CD₈ 细胞百分率、NK 细胞百分率均明显高于对 照组,差异均有统计学意义( 分别t = 2. 252,P < 0.05; t = 4.718,P < 0.05); CD₃ 细胞、CD₄ 细胞和CD₄ /CD₈ 与对照组 比,差异均无统计学意义(P > 0. 05)。

表 2可见,麻疹病毒高活性组CD₃ 细胞和CD₄ 细胞百分率 和绝对值均明显低于低活性组,其中,麻疹病毒高活性组CD₃ 细胞百分率与麻疹病毒低活性组比较,差异有统计学意义( t = 3. 109,P < 0.01); CD₄ 细胞百分率与低活性组比较,差异有 统计学意义( t= 3.314,P < 0.01); 麻疹病毒高活性组CD₃ 细 胞绝对值与麻疹病毒低活性组比较,差异有统计学意义( t= 2.635,P < 0.01) ; CD₄ 细胞绝对值与低活性组比较,差异有统 计学意义( t= 3. 273,P < 0. 01); CD₈ 细胞和NK 细胞与低活 性组比较,差异无统计学意义(P > 0.05)。

表 2

表 2 不同麻疹病毒活性组与对照组儿童外周血T淋巴细胞和NK细胞比较(x±s)

表 2 不同麻疹病毒活性组与对照组儿童外周血T淋巴细胞和NK细胞比较(x±s)

T 淋巴细胞是机体免疫系统功能最重要的一群细胞,常 用CD₃ 标记成熟的T 淋巴细胞,其主要包括CD₄ 和CD₈ 细 胞,其中CD₈ 细胞是抗病毒感染的主要效应细胞^〔3〕,病毒感 染时CD₈ 细胞数量增加,而CD₄ 细胞变化不明显^〔4〕。本研究 测定结果显示,与正常对照比较,麻疹患儿CD₈ 细胞明显增 高,表明其急性期细胞免疫反应以特异性细胞毒作用占主导 地位,导致病毒的清除和机体免疫抑制。

结果还显示,伴随麻疹病毒活性的升高,CD₃ 和CD₄ 细胞 均明显下降,而CD₈ 细胞无明显变化,说明随着病毒活性的 升高,T细胞免疫受抑制程度增加,可能导致麻疹患儿病毒血 症的迁延,产生播散性感染,出现不同程度的并发症,从而影 响病程的长短,对治疗和愈后的判断有一定作用。提示对于 麻疹病毒感染者进行CD₃ 和CD₄ 细胞检测,可能成为监测麻 疹病毒活性程度的一项指标,为治疗提供帮助。

本研究结果显示,麻疹患儿出疹期NK 细胞百分率与正 常对照比较明显增高,并且伴随着麻疹病毒活性的升高,NK 细胞百分率明显升高,表明NK细胞在急性期参与免疫应答, 在病毒感染早期积极参与控制病毒的感染。

结果提示,测定麻疹患儿外周血T淋巴细胞和NK 细胞 的变化,不仅有助于评价麻疹患儿感染早期的免疫状况,而且 对判断麻疹病毒复制的活跃程度具有一定参考价值,有助于 治疗和愈后的判断。