2. 吉林大学中日联谊医院急诊科;
3. 吉林省长春市朝阳区疾病预防控制中心
研究证明, 暴力攻击行为具有一定的遗传特征〔1〕, 并研究到分子生物学水平, 单胺氧化酶A (MAOA)基因是较受瞩目的基因之一。研究表明〔2-4〕, MAOA基因启动子区30 bp-VN TR的多态性可能使所编码的单胺氧化酶(MAO)活性降低, 不能充分降解外周组织中存在的52羟色胺及去甲肾上腺素, 从而使2种递质在外周的浓度升高, 间接地增加人的冲动性和暴力犯罪倾向。因此, 推测MAOA基因其他位点可能与暴力攻击行为也存在关联性。本研究以暴力犯罪人员和与之条件匹配的健康无犯罪记录的人员为研究对象, 应用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法, 探讨单胺氧化酶A (MAOA)基因多态性与暴力攻击行为发生的关联性。
1 对象与方法 1.1 对象采用病例-对照研究方法设攻击组和对照组, 攻击组选择2007-2009年因暴力犯罪(指凶杀、故意伤害、抢劫、强奸、纵火5类)入狱的某监狱服刑犯人91例, 年龄为18~45岁, 均为具有完全责任能力者; 对照组来源于与之条件匹配的健康体检人群101人。2组均为男性。
1.2 方法 1.2.1 样品收集和基因组DNA提取采研究对象外周静脉血5 mL, 加入肝素抗凝后-20 ℃保存至提取基因组DNA。应用W izard Genom ic DNA Purification Kit试剂盒(美国Pro-mega公司), 参照说明书的步骤提取外周血白细胞中的基因组DNA。
1.2.2 引物设计与合成参照文献〔5〕引物设计Pm: GAG ACG CTG AAC CAT GAA CAT T; Pt: TGA CAG CTC CCA TTG GAA GA; PG: TGA CAG CTC CCA TTG GAA GC; P1: GAA GAG CCA AGG ACA GGT AC; P2: CAA CTT CAT CCA CGT TCA CC; 其中Pm、P1、P2为公用引物, Pt、PG为序列特异必引物。均由上海生物工程公司合成。
1.2.3 特定基因片段的PCR扩增PCR反应体系为25μL:二馏灭菌水(ddH2O), P1和P2各0.4 μL, Pm Pt PG各占1 μL, 12.5μL的2 ×Taq PCR Master M ix (产品组成: 0.1 U /μL Taq酶, 500μmol/L dNTP, 20 mmol/L Tris-HCl, 100 mmol/L KCl, 3 mmol/L MgCl2, 其他稳定剂和增强剂), DNA 2 μL。PCR扩增循环条件, 95 ℃ 5 m in, 94 ℃ 35 s, 56 ℃ 1 m in, 72 ℃ 1m in, 共38个循环, 72 ℃10 m in。取PCR产物4μL, 用1.5 %琼脂糖凝胶电泳, 以DL2000 DNA marker为分子量标准品。
1.3 统计分析采用SPSS 13.0统计软件进行分析。
2 结果 2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度检验MAOA基因位于X染色体, 在本研究中所选样本均为男性, 该位点基因型不符合Hardy-Weinberg平衡。
2.2 PCR-SSP结果及基因型判断(图 1)PCR-SSP检测通过出现或不出现特异的扩增条带判断, 2条电泳泳道的扩增产物可确定一个样本的基因型。PCR扩增的目的片段长445 bp。引物P1与引物P2作为内对照, 扩增β珠蛋白基因, 扩增片段长为268 bp 〔6〕。
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注 : 1: DL2000 DNA Marker; 2, 3: T/T型 ; 4, 5: G/G型 ; 6, 7: T/T型 ; 8, 9: T/T型 ; 10, 11: G/G型 ; 12, 13: G/G型。 图 1 M AOA基因 rs6323位点 PCR-SSP的琼脂糖凝胶电泳图 |
2.3 rs6323位点基因型与等位基因频数分布(表 1)
rs6323位点是MAOA基因上的G、T二态性单核苷酸(SNP), 在群体中形成2种基因型分别为T/T (纯合切开)、G/G (纯合未切开)。结果显示, 攻击组与对照组比较, 基因型和等位基因频数分布差异无统计学意义(P > 0.05)。
| 表 1 不同组别人群 rs6323位点基因型及等位基因频数分布 |
3 讨论
由于所选样本量有限, 在本研究中MAOA基因rs6323位点未显示与暴力攻击行为相关联。另外攻击行为的发生机制很复杂, 可能是多个因素共同作用的结果。据报道, 群体中基因的多样性很可能是基因环境相互作用的结果〔7〕, 在遗传影响人类行为的同时, 环境对人类行为也有明显的作用, 更可能是环境与基因的共同作用。Brunner HG等〔8〕报道了在荷兰的一个大家族系中14例男性出现冲动攻击行为甚至暴力行为, 家族连锁分析发现单胺氧化酶A基因的C→T突变导致了患者的行为异常。Caspi A等〔9〕研究发现, 儿童期遭受虐待并具有MAOA活性较低基因型的人, 具有更多的反社会行为, 而有高水平MAOA表达基因型的受虐待儿童则极少表现出反社会问题。总之, 由于每个基因上含有大量的单核苷酸多态性SNP位点〔10〕, 因此, 尚不能排除MAOA内部其他SNPs或该基因附近其他基因与攻击行为相关联的可能性。还需继续扩大样本量, 筛查MAOA基因其他位点与暴力攻击行为的关系。
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2009, Vol. 25

, 刘丽丽1, 陈兆杰2, 李为群3, 王继萍1, 李波1