普洱茶是指符合其产地环境条件生产的云南大叶种晒青茶为原料, 经特定的加工工艺生产, 具有独特品质特征的茶叶。由于加工工艺的不同, 普洱茶被分为普洱生茶和普洱熟茶^〔1〕。目前, 对于普洱茶清除自由基的作用已在体外化学模型实际实验得到证实^〔2〕, 但对其在机体内的生理活性评价, 以及对肝功能改善作用的研究较少。为了解普洱茶的保建功效, 本试验通过高脂饲料诱发大鼠脂肪肝模型后, 采用不同剂量的普洱茶水浸提物进行干预, 观察其对脂肪肝大鼠肝脏病理组织和脂质过氧化物的影响, 为其保健功效的评价提供基础依据。

帕卡普洱生、熟茶(中国普洱茶研究院, 标签认可编号:532721-616)。

722分光光度计(上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂); ACCUTE TBA-40FR全自动生化分析仪(日本东芝株式会社三广医疗有限公司); Leica EG1160包埋机、Leica RM212RT切片机和Leica DM4000B显微镜(德国莱卡仪器有限公司)。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所); 胆固醇(TC)试剂盒(四川省迈克科技有限责任公司)。

4月龄健康雄性SD大鼠80只〔(昆明医学院动物实验中心), 动物许可证:SCXX (滇2005-2008)〕, 体重150~200 g。

高脂饲料配方:基础饲料78.8%、猪油10%、蛋黄粉10%、胆固醇1%、胆盐0.2%^〔3〕。

普洱茶叶磨碎后做水浸液提取, 制备方法参照文献〔4〕。提取的茶汤终浓度为1 g/mL, 4 ℃冰箱保存。

SD大鼠80只, 同室单笼饲养, 自由进食和饮水, 环境温度控制在(20±2)℃, 湿度45%~60%。大鼠在该环境下喂饲基础饲料适应1周后, 随机选择10只大鼠喂饲基础饲料作为空白对照组, 其他70只大鼠换用高脂饲料喂饲, 10 d后采血测定血清胆固醇(TC)水平, 与空白对照组比较差异有统计学意义, 则说明高脂模型造模成功^〔5〕。从造模成功的大鼠中随机抽取10只作为高脂模型组, 其余60只根据体重和TC水平, 随机分为生茶低、中、高剂量组, 熟茶低、中、高剂量组, 每组10只。低、中、高剂量分别为0.5, 1.5, 3.0 g/(kg·bw), 一次经口灌胃2 mL/d, 空白对照组和高脂模型组灌胃等体积蒸馏水, 持续30 d。

受试普洱茶样品常规成分测定包括水分、水浸出物、茶多酚、茶多糖检测, 方法参照文献〔4〕。

实验第30 d, 大鼠禁食12 h后, 股动脉取血处死, 收集血样, 分离血清, 分装待测; 同时摘取肝称重后, 从最大叶距边缘5 mm处取肝脏组织, 并固定于10%的甲醛溶液中, 脱水、石蜡包埋, 切片, 苏木素-伊红(HE)染色, 显微镜观察^〔6〕。试验动物饲养过程中, 每周称量体重并记录进食量1次。血清SOD和GSH-Px活性及TC和MDA含量测定参照试剂盒说明书操作。

采用SAS 6.12软件进行方差分析。

结果显示, 普洱生茶的水分, 水浸出物、茶多酚、茶多糖含量分别为7.75%, 48.40% 29.97%, 0.35%;普洱熟茶的水分、水浸出物、茶多酚、茶多糖含量分别为9.88%, 42.00%, 12.3%, 2.40%, 说明所取茶样具有一定的代表性, 且为同一批样品, 样品批间差异较小。

表 1

表 1 不同组别大鼠一般状况比较(x±s)

表 1 不同组别大鼠一般状况比较(x±s)

表 1显示, 普洱熟茶高剂量组大鼠终末体重明显低于高脂模型组(P < 0.05), 与空白对照组比较, 差异无统计学意义; 其余组大鼠终末体重分别与空白对照组和高脂模型组比较, 差异均无统计学意义, 但随着灌胃剂量的增加, 大鼠终末体重呈梯度性的下降。食物利用率=体重增加量/摄入饲料量。实验过程中, 各组大鼠之间平均食物利用率差异均无统计学意义。与空白对照组比较, 高脂模型组, 生茶高剂量组和熟茶各剂量组肝/体比均明显增加(P < 0.05);与高脂模型组比较, 生茶低、中剂量组肝/体比明显降低(P < 0.05), 与其余组比较差异无统计学意义。

表 2

表 2 不同组别及造模时间大鼠血清TC比较(nmol/L, x±s)

表 2 不同组别及造模时间大鼠血清TC比较(nmol/L, x±s)

表 2显示, 实验初始时(造模前)各组间TC值差异无统计学意义。高脂模型建立10 d后(造模后), 空白对照组TC值明显低于其余组, 差异有统计学意义(P < 0.05), 说明高脂血症模型建立成功。高脂模型建立后, 采用普洱生茶和熟茶进行为期30 d的干预实验, 实验结束时, 与高脂模型组相比, 普洱生茶和熟茶各剂量组均可明显降低TC水平(P < 0.05)。

表 3

表 3 不同组别大鼠血清SOD、GSH-Px活力及MDA含量(x±s)

表 3 不同组别大鼠血清SOD、GSH-Px活力及MDA含量(x±s)

表 3显示, 高脂模型组血清SOD和GSH-Px活力明显低于空白对照组, MDA含量明显高于空白对照组(P < 0.05)。中、高剂量生茶组和各剂量熟茶组SOD活力均明显高于高脂模型组(P < 0.05);生茶和熟茶各剂量组GSH-Px活力均明显高于高脂模型组, MDA含量均明显低于高脂模型组(P < 0.05)。

HE染色发现, 空白对照组肝组织结构正常, 肝细胞排列整齐, 肝小叶结构完整, 无脂肪变性, 无肝细胞脂肪变性坏死, 无炎症细胞浸润; 而高脂模型组肝组织病理损伤严重, 肝细胞胞质内充满大小不等的脂肪油滴, 且明显肿胀, 胞质疏松, 肝小叶结构紊乱; 低、中、高剂量组生茶和熟茶组明显减轻肝组织病理损伤和以上症状, 具有明显的剂量-反应关系, 但高剂量熟茶组与空白对照组比较无明显差异, 其结构完整, 无炎细胞浸润及变性坏死。说明不同剂量灌胃的茶汤能够梯度性的改善高脂饮食引起的肝脏脂肪变性。

长期高脂饮食易导致肥胖和脂肪肝^〔7〕。本试验结果显示, 造模动物体重明显增加, 同时出现血清胆固醇明显升高, 病理学检查显示中到重度脂肪变性, 说明造模成功。研究发现, 氧应激和脂质过氧化是各种原因引起脂肪肝形成和进展的共同机制^〔8-11〕。本研究显示, 非酒精性肝损伤大鼠血清中SOD和GSH-Px活力明显降低, MDA和TC含量明显升高, 肝组织有明显的脂肪变性, 给予普洱生茶和熟茶后, 血清中SOD和GSH-Px活力较模型组明显升高, MDA和TC含量明显降低, 肝组织病理改变明显好转, 且具有剂量依赖性, 高剂量熟茶组与正常对照组大鼠的各项指标相似。本研究在文献^{〔4, 12〕}基础上观察了普洱茶在体内对肝组织氧化损伤的保护作用, 证明其机制可能与茶多酚和茶多糖所具有清除氧自由基和抗脂质过氧化能力有关。普洱茶通过降低血清胆固醇含量, 有效清除机体自由基, 保护肝细胞的结构和功能, 延缓或减轻脂肪肝的形成。此外, 本实验熟茶茶多糖的含量是生茶的6.86倍, 其保护肝脏脂肪变性的作用较生茶好, 可能与熟茶含有较高的茶多糖有关。