加减二至丸凉茶对防治多种原因引起的疲劳具有较好的疗效。其处方由二至丸(女贞子、旱莲草)加山茱萸、党参等组成。中医传统理论认为, 二至丸具有补益肝肾, 滋阴止血的功效, 可用于肝肾阴虚, 腰膝酸软, 口苦咽干等; 同时还具有促进免疫、耐缺氧、抗应激等作用。山茱萸补益肝肾, 收敛固涩; 党参补中益气, 生津养血。研究表明, 山茱萸、党参能增强机体免疫功能, 提高机体的适应能力, 还能抗应激和抗疲劳^〔1-5〕。本实验选用血乳酸、尿素氮、肝糖原等指标对加减二至丸凉茶抗疲劳效果进行研究, 为其开发利用提供科学依据。现报告如下。

女贞子、旱莲草、山茱萸、党参等(广东广弘药材有限公司), 经鉴定均符合《中国药典》2005年版标准。

清洁级雄性昆明种小鼠160只(南方医科大学实验动物中心, 动物合格证号:SCXK粤2006-0015), 体重18~22 g。

自制游泳箱(50 cm×50 cm× 40 cm); 722型分光光度计(南京第四分析仪器有限公司)。血清尿素试剂盒、肝糖原测定试剂盒、全血乳酸测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

处理将女贞子、旱莲草、山茱萸、党参等药材浸泡30 min后, 加入8~12倍水, 煮沸2 h, 抽出煎煮液; 再次在原料罐中加入8~12倍水, 煮沸2 h, 抽出煎煮液; 合并2次煎煮液, 过滤。每天人体推荐摄入量(按原生药重量, 下同)为7.2 g/人(人体重量以60 kg计), 相当于小鼠每天剂量为0.936 g/(kg·bw)。受试样品以蒸馏水配制成所需浓度。

每项功能测试指标用实验动物40只, 按体重分层, 随机分为对照组和加减二至丸凉茶低、中、高剂量组, 每天分别给予蒸馏水和受试品0.5, 1, 2 g/(kg·bw)灌胃, 3个剂量组分别相当于人体推荐摄入量的5, 10, 20倍。所有实验动物均食用全价混合饲料(南方医科大学实验动物中心), 自由摄食、饮水。灌胃容量0.5 mL, 每天1次, 连续30 d。

(1)负重游泳实验^〔6〕:记录小鼠自游泳开始至死亡时间, 即为小鼠负重游泳时间(min)。(2)血清尿素氮、肝糖原及乳酸测定^〔6〕:分别采用血尿素氮试剂盒法、蒽酮法、全血乳酸试剂盒法测定, 具体步骤参照试剂盒说明书。

应用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析, 各组比较采用Dunnett-t检验。

对照组、加减二至丸凉茶低、中、高剂量组负重游泳时间分别为(8.01±2.13), (9.32±2.57), (13.29±4.51), (16.21±7.01) min。经单因素方差分析, 各组负重游泳时间均值差异均有统计学意义(F=6.620, P=0.001)。经Dunnett-t检验, 高、中剂量组负重游泳时间的均值与对照组比较, 差异有统计学意义(P < 0.05)。表明中、高剂量的加减二至丸凉茶具有延长小鼠负重游泳时间的作用。

对照组、加减二至丸凉茶低、中、高剂量组运动后小鼠血清尿素氮分别为(10.49±3.29), (9.13±3.16), (7.84±1.74), (6.87±1.39) mmol/L。经单因素方差分析, 各组均值差异均有统计学意义(F=3.844, P=0.017);经Dunnett-t检验, 高剂量组尿素氮值与对照组比较, 差异有统计学意义(P < 0.05)。表明高剂量的加减二至丸凉茶具有降低小鼠血清尿素氮的作用。

对照组、加减二至丸凉茶低、中、高剂量组运动后小鼠肝糖原分别为(6.22±0.59), (7.74±2.09), (8.13±2.08), (9.43±2.40) mg/g肝组织。经单因素方差分析, 各组均值的差异有统计学意义(F=4.716, P=0.007);经Dunnett-t检验, 高剂量组肝糖原值与对照组比较, 差异有统计学意义(P < 0.05)。表明高剂量的加减二至丸凉茶具有增加小鼠肝糖原储备作用。

表 1

表 1 各组小鼠游泳前后血乳酸测定结果比较(x±s)

表 1 各组小鼠游泳前后血乳酸测定结果比较(x±s)

经单因素方差分析, 各组间血乳酸曲线下面积均值差异有统计学意义(F=3.17, P=0.032)。经Dunnett-t检验发现, 高剂量组血乳酸曲线下面积均值与对照组比较, 差异有统计学意义(P < 0.05)。表明高剂量的加减二至丸凉茶具有降低运动小鼠血乳酸的作用。

疲劳是由运动引起机体一系列生化改变而导致的肌肉力量下降。有研究显示, 在长时间、大强度运动中, 糖是主要的供能物质。糖原的大量消耗, 尿素、乳酸等代谢产物的堆积有引起疲劳发生的作用^〔7-9〕。负重游泳试验结果表明, 小鼠连续灌胃给予加减二至丸凉茶30 d后, 加减二至丸凉茶中、高剂量组较对照组负重游泳时间明显延长(P < 0.05)。运动主要靠糖酵解来供能, 长时间运动后可使糖储备耗尽, 因此, 高糖储备对提高运动能力有重要意义^〔10〕。本实验中, 加减二至丸凉茶高剂量组与对照组比较, 在小鼠负重游泳时间延长的同时, 肝糖原含量也有明显增多(P < 0.05), 说明其具有增强小鼠糖原储备或减少糖原消耗的作用, 从而提高其运动能力、缓解疲劳。另一方面, 血清尿素氮实验结果显示, 高剂量组与对照组比较, 可明显减少运动小鼠尿素氮的产生(P < 0.05), 降低运动后小鼠血清尿素氮水平; 同时在血乳酸测定中, 高剂量组小鼠在负重游泳力竭后, 血乳酸的含量明显低于对照组小鼠, 血乳酸曲线下面积均值与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05), 能够有效控制血乳酸的快速增长, 维持血液中pH值的相对稳定。因此, 说明其具有缓解力竭小鼠疲劳的作用, 但其缓解疲劳的作用机制还有待进一步研究。