中国公共卫生  2009, Vol. 25 Issue (11): 1289-1290   PDF    
引用本文
李喜仙, 刘开永, 侯玉泽. 环丙沙星对小鼠免疫毒性及肌肉品质影响[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(11): 1289-1290.
LI Xi-xian, LIU Kai-yong, HOU Yu-ze Effect of ciprofloxacin on immunotoxicity and muscle quality in rats[J]. Chinese Journal of Public Health, 2009, 25(11): 1289-1290.
环丙沙星对小鼠免疫毒性及肌肉品质影响
李喜仙1, 刘开永2, 侯玉泽2     
1. 河南省新乡市卫滨区卫生防疫站, 453000;
2. 河南科技大学食品与生物工程学院
收稿日期: 2009-02-20
基金项目: 国家“十一五”科技支撑计划重大项目(2006BAK02A21)
作者简介: 李喜仙(1966-), 女, 河南辉县人, 副主任技师, 硕士, 研究方向:食品质量与安全。
摘要: 目的 研究环丙沙星对小鼠免疫毒性和肌肉品质的影响。 方法 将小鼠分为对照组和环丙沙星高、中、低剂量组(44, 11, 5.5 mg/kg); 每组10只动物, 连续7 d腹腔注射给药, 每日1次; 通过计算小鼠胸腺和脾脏指数, 观察脾淋巴细胞形态变化来探讨该药的免疫毒性; 通过检测肌肉蛋白质含量、肌肉pH值, 观察其对小鼠肌肉品质的影响。 结果 对照组胸腺和脾脏系数分别为(9.1±2.3), (6.3±1.1) mg/g, 高剂量组胸腺和脾脏系数分别为(6.5±1.6), (3.4±0.5) mg/g, 与对照组比较, 差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01);而中、低剂量组的脾脏指数与对照组比较, 差异均有统计学意义(P < 0.05);环丙沙星各剂量组与对照组比较, 肌肉pH值变化不明显; 环丙沙星高、中、低剂量肌肉蛋白质含量分别为(24.68±0.55), (22.48±0.54), (21.22±1.25) g/100 g, 与对照组(31.83±2.36) g/100 g比较明显下降(P < 0.05);与对照组比较, 高剂量组脾淋巴细胞形态异常。 结论 环丙沙星对小鼠具有一定的免疫毒性, 明显减少了肌肉蛋白质含量。
关键词： 免疫毒性     肌肉品质     脏器系数     环丙沙星    
Effect of ciprofloxacin on immunotoxicity and muscle quality in rats
LI Xi-xian, LIU Kai-yong, HOU Yu-ze     
Health and Antiepidemic Station of Weibin District, Xinxiang city, Henan province, Xinxiang 453000, China
Abstract: Objective To study effect of ciprofloxac in on immunotoxicity and muscle quality in rats. Methods All rats in high, middle, low dose group (44, 11, 5.5 mg/kg) were admin istered with intrape ritoneal injection of cipro floxac in once a day, for 7 days continuously.The thymus and spleen coefficients were calculated and morphologic change of spleniclymphocyte was observed.The changes of muscle protein content and pH values were observed. Results Thymus and spleen coefficients (mg/g) in high and low dosage group were 9.1±2.3, 6.3±1.1, respectively, and those of in the controll were 6.5±1.6, 3.4±0.5.The contents of muscle prote in (g/100g) in high, medium, and low dose groups were 24.68±0.55, 22.48±0.54, 21.22±1.25, respectively, lower than that of the control (31.83±2.36, P < 0.05).Paramorphia of lymphocyte in high dose ciprofloxac in treated group was observed. Conclusion Cipro floxacin has mimunotoxicity and could reduce muscle protein significantly in rats.
Key words: immunotoxicity     muscle quality     organ coefficient     ciprofloxacin    

环丙沙星具有抗菌谱广、杀菌力强、起效快、不易产生耐药性、价格低廉等特点, 广泛应用禽畜治疗。但是其也存在副作用, 有关不良反应屡见报道〔1-4〕。目前国内外对该药的残留检测较多, 但对其免疫毒性研究较少。近年来, 随着生活水平的逐步提高, 消费者对肉品的卫生和质量有了更高的要求〔5-7〕。本研究通过检测兽药蓄积残留对动物可食性组织品质的影响, 旨在为兽药残留的控制提供科学依据。

1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物

40只健康的ICR成年小鼠(河南科技大学动物科技学院), 雌雄各半, 体重(18±2) g。

1.1.2 主要仪器与试剂

pH 211酸度计(上海雷磁仪器厂); FA604A电子天平(上海精华仪器公司); ATN-300凯氏定氮仪(上海精科仪器公司); FS-RA-2型小鼠净化笼具(苏州净化仪器公司); CKX 31-A 12PHP倒置显微镜(日本OLYM-PU S公司)等。无水硫酸铜、硫酸钾、98%浓硫酸、硼酸溶液(20 g/L)、氢氧化钠溶液(20 g/L)、混合指示液(1 g/L甲基红乙醇溶液与1 g/L溴甲酚绿乙醇溶液按1:5体积混合)。以上试剂皆为国产分析纯。

1.1.3 药液

2.2 mg/mL环丙沙星(含量为99%的可溶性原粉, 洛阳惠中药业)溶液(母液)。

1.2 方法 1.2.1 药液配制

准确称取110 m g环丙沙星, 溶于盛有50 mL无菌生理盐水的棕色试剂瓶中, 混匀, 分为高、中、低, 2.2, 0.55, 0.275 mg/mL剂量组。注射液用母液分别稀释4和8倍即可。

1.2.2 动物的分组与处理

将40只小鼠根据体重随机分为4组:对照组, 环丙沙星高、中、低剂量组, 每组均为10只; 环丙沙星高、中、低剂量组每组染毒剂量分别为44, 11, 5.5 m g/kg半数致死剂量, (LD50)为1/10, 1/40, 1/80腹腔注射, 对照组注射等量生理盐水[0.2mL/10(g·bw)], 每天一次, 连续7 d, 于第7 d末处死。

1.2.3 脾脏指数和胸腺指数计算

脱颈椎处死小鼠, 称重, 取脾脏、胸腺放于无菌生理盐水平皿中, 洗净后用吸水纸吸干表面水分, 称湿重, 计算脾脏指数和胸腺指数。

1.2.4 脾脏淋巴细胞观察

取小鼠新鲜脾脏1个加蒸馏水1 mL, 用吸管所复轻轻吹吸, 使脾淋巴细胞尽量游离完全。涂片, 美兰染色后, 用盖玻片盖好。在显微镜下观察淋巴细胞形态。

1.2.5 肌肉pH值测定

取小鼠腿部肌肉, 切碎混匀, 称取2.00 g置于锥形瓶中, 加20 mL生理盐水, 不时手摇震荡。静止15 min后过滤, 制成肉浸液, 用pH 211酸度计分别测定各组肉浸液的pH值。

1.2.6 肌肉粗蛋白测定

(1)样品消化:称取0.500 g研磨好的小鼠腿部肌肉, 移入干燥的100 mL定氮瓶中。(2)蒸馏:向接收瓶内加入10.0 mL硼酸溶液(20 g/L)及混合指示液2滴, 并使冷凝管下端插入液面下, 吸取10.0 mL小鼠肌肉消化稀释液, 由小玻瓶流入反应室, 并以10 mL水洗涤小烧杯使流入反应室内, 塞紧小玻瓶的棒状玻塞。(3)滴定:以盐酸标准溶液(0.0535 mol/L)滴定至溶液呈蓝紫色时终止。记录标准溶液的消耗量, 对环丙沙星染毒高、中、低剂量组和空白对照组采用在相同条件下同一标准溶液滴定。其余操作步骤参照文献〔7〕。

1.3 统计分析

应用SPSS12.0统计软件进行t检验。

2 结果 2.1 环丙沙星对小鼠体重、脏器重量及脏器指数影响(表 1)

环丙沙星可导致小鼠脏器指数明显下降, 且注射量越大, 下降越明显, 但中剂量组对应值略高于低剂量组, 可能是中低剂量用药接近临床用药剂量, 毒性差异不大。

表 1 各组小鼠体重、胸腺和脾脏重量、胸腺和脾脏指数(x±s, n=10)

2.2 环丙沙星对小鼠脾淋巴细胞形态的影响

对照组小鼠脾淋巴细胞完整, 无破裂现象, 且边缘清晰可见; 环丙沙星高剂量组小鼠脾淋巴细胞核有破裂现象, 并且有的看不见细胞核, 边缘有的不清晰; 中剂量组小鼠脾淋巴细胞较为完整, 但有的见不到细胞核, 边缘较清晰; 低剂量组脾脏淋巴细胞完整, 无破裂现象, 且边缘清晰可见, 但细胞核不清晰。由此可见, 环丙沙星对小鼠的淋巴细胞正常形态有影响。

2.3 环丙沙星对小鼠肌肉pH值的影响

经过7 d的连续给药, 环丙沙星各剂量组小鼠肌肉的pH值均低于对照组, 变化范围在6.89~7.00, 其中高剂量组降低的幅度最大, 其次是中剂量组, 但是与对照比较, 差异均无统计学意义。由于小鼠肌肉pH值的影响因素较多, 因此, pH值仅作为肌肉品质参考评价指标之一。

2.4 环丙沙星对小鼠肌肉蛋白质含量的影响

空白对照组, 环丙沙星染毒高、中、低剂量组小鼠肌肉蛋白质含量分别为(31.83±2.36), (21.22±1.25), (22.48±0.54), (24.68±0.55) g/100 g。环丙沙星各染毒剂量组小鼠肌肉的蛋白质含量相对于对照组均有所下降(P < 0.05);下降的幅度与小鼠的给药剂量呈正相关, 即给药剂量越大, 蛋白质含量下降越多; 环丙沙星各染毒剂量组之间比较, 差异无统计学意义。

3 讨论

本实验由于条件有限, 未进行玫瑰花环试验。但采用腹腔注射测定其蓄积毒性, 发现环丙沙星各剂量组免疫器官重量的指数均下降, 脾淋巴细胞形态明显变化。环丙沙星对小鼠肌肉蛋白质的影响表现为给药剂量越大, 蛋白质含量下降的越多。由此可知, 环丙沙星对小鼠免疫器官和肌肉品质有比较大的影响, 在治疗禽畜疾病时应考虑到给药的剂量和期限; 在此基础上, 兽药残留对人体的肌肉蛋白功能、可食性动物组织蛋白品质影响的研究显得尤为重要。本研究结果与环丙沙星对健康猪体内淋巴细胞的影响基本一致〔6〕。这对临床用药具有一定指导意义, 但该药对生病动物免疫功能的调节作用有待进一步研究。

参考文献
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