中国公共卫生  2009, Vol. 25 Issue (10): 1159-1160   PDF    
引用本文
郭俊成, 赵富玺, 刘润花. 大同市成年女性HPV感染及基因型分析[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(10): 1159-1160.
GUO Jun-cheng, ZHAO Fu-xi, LIU Run-hua Prevalence and type distribution of human papillomavirus infection in women of Datong, China[J]. Chinese Journal of Public Health, 2009, 25(10): 1159-1160.
大同市成年女性HPV感染及基因型分析
郭俊成1, 赵富玺1, 刘润花2     
1. 大同大学医学院免疫学研究所, 山西 大同 037008;
2. 大同大学医学院外科实验室
收稿日期: 2009-04-01
基金项目: 山西省青年科技研究基金(2007021051)
作者简介: 郭俊成(1974-), 男, 山西大同人, 讲师, 硕士, 主要从事人乳头瘤病毒研究。
通讯作者: 赵富玺
摘要: 目的 调查山西省大同市成年女性人乳头瘤病毒(HPV)感染及亚型分布情况。 方法 采用PCR以及线形杂交法(LA)对931名女性宫颈脱落细胞标本进行HPV基因检测和基因分型。 结果 正常组、低度上皮内损伤(LSIL)组、高度上皮内损伤(HSIL)组及鳞状细胞癌(SCC)组HPV感染率分别为18.6%, 60.2%, 69.2%和84.6%;高危型HPV感染率明显高于低危型(P < 0.001);感染高峰为18~25岁年龄组; 总体人群中HPV-16、HPV-58、HPV-18、HPV-52以及HPV-33的感染率最高, 依次为15.8%, 4.7%, 3.8%, 3.0%和1.8%, 而SCC组中, HPV-16、HPV-18、HPV-58、HPV-52以及HPV-33的感染率最高, 分别为61.5%, 11.5%, 7.7%, 3.8%, 3.8%。 结论 大同市女性人群HPV感染状况及HPV基因型分布与国内其他地区存在明显差异。
关键词： 人乳头瘤病毒(HPV)     感染     基因型    
Prevalence and type distribution of human papillomavirus infection in women of Datong, China
GUO Jun-cheng, ZHAO Fu-xi, LIU Run-hua     
Virological Institute, Datong University, Datong 037008, China
Abstract: Objective To survey the prevalence and type distribution of human papillomavirus (HPV) infection in women of Datong. Methods A total of 931 cervical specimens from women attending routine Pap smear cytology screening were subjected to HPV detection and geno typing with PCR-LA assay. Results The overall HPV prevalence was 18.6% in normal specimens, 60.2% in specimens with light epithelial internal lesion, 69.2% in severe epithelial internal lesion, and 84.6% in specimens with squamous cell carcinoma (SCC), respectively.High risk HPV infections were more prevalent than low risk HPV types (P < 0.05).The peak of high risk HPV infection was foundin subjects of 18225 years old.The prevalence of HPV was 15.8%, 4.7%, 3.8%, and 1.8% for HPV -16, -58, 18, and -52 in all participants, respectively.But In SCC, HPV 2.6(61.5%), 2.8(11.5%)-58(7.7%), -52(3.8%) and -33(3.8%) were prevalent types. Conclusion The study demonstrated the geographic variability of oncogenic HPV distribution in Datong, China.
Key words: human papillom avirus (HPV)     infection     genotype    

在全世界范围内, 宫颈癌的发病率和死亡率均较高, 其中约80%的病例发生在发展中国家〔1-2〕。中国宫颈癌的新发病例每年>13万, 占全球的1/4~1/3 〔3〕, 且发病年龄趋于年轻化〔4-5〕。高危型人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染与宫颈癌的发生、发展密切相关〔6〕。目前, HPV疫苗已经在全球101个国家和地区获准使用, 中国也进入临床试验阶段〔7〕。为了解山西省大同市成年女性HPV感染状况及基因型分布, 为进一步评价HPV疫苗接种提供依据, 于2004-2008年进行此项调查。结果报告如下。

1 材料与方法 1.1 标本来源

2004年10月-2008年8月, 将因妇科疾病和正常体检到大同市各大医院妇科门诊、健康体检中心以及下乡义诊活动的患者宫颈脱落细胞标本作为本次研究的标本来源。患者年龄18~68岁。根据细胞学的分类标准, 对收集到的931名宫颈脱落细胞标本进行诊断。根据诊断结果分组:正常组522名, 年龄(31.1±8.7)岁; 低度上皮内损伤(LSIL)组201例, 年龄(32.6±7.4)岁; 高度上皮内损伤(HSIL)组156例, 年龄(32.4±8.3)岁; 鳞状细胞癌(SCC)组52例, 年龄(36.6±11.1)岁。

1.2 HPV DNA模板制备

将脱落细胞加入配置好的细胞消化液, 37 ℃孵育2 h。细胞消化液的主要成分为Tris液(50 mmol/L, pH 8.0);乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)液(1 mmol/L, pH 8.0); 0.5%吐温(Tween-20);蛋白酶K (0.2 μg/μL); 去离子水。

1.3 PCR HPV DNA检测

首先选用HPVL基因区的共有引物GP5+/GP6+和β-globin基因引物Glob-F/Glob-R对所有标本进行PCR检测, 然后对所有β-globin阳性而HPV阴性的标本再选用改进的MY 09/11共有引物(PGMY 09/11)进行扩增〔8〕。扩增体系包含: DNA模板15 μL, 10×Buffer液10μL, Taq酶5 U, 引物各0.1 mmol/L, 三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)各0.2 mmol/L。扩增过程包括: 94 ℃预变性5 min, 设定30个循环, 每个循环为94 ℃ 20 s, 39 ℃ (GP5+/GP6+)和55 ℃(PGMY 09/11; Glob-F/Glob-R)20 s, 72 ℃ 40 s, 最后72 ℃延伸5 min。所有PCR扩增过程均包含HPV阳性、阴性对照以及β-globin基因对照。

1.4 HPV基因分型

采用HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-58和-HPV59型特异性探针对所有HPV阳性标本进行线性杂交(LA) 〔9〕。杂交过程主要包括HPVDNA的生物素标记、变性、探针线形固定和杂交。试验步骤参照试剂说明书进行。β-globin基因作为对照也参与杂交过程。

1.5 统计分析

采用SPSS 10.0软件进行χ2检验。检验水准α=0.05。

2 结果 2.1 HPV总体分布(表 1)
表 1 不同组别女性HPV感染情况分布

人群HPV感染率为39.7% (370/931), 在正常组、LSIL组、HSIL组以及SCC组中分别占18.6%, 60.2%, 69.2%和84.6%。高危型HPV阳性305例, 在HPV阳性标本中占82.4%, 在总体人群中占32.8%;低危型HPV仅检出79例, 在HPV阳性标本中和总体人群中分别占21.4%和8.5%, 明显低于高危型HPV感染(P < 0.001)。

2.2 感染人群的年龄分布

高危型HPV感染的高峰出现在18~25岁年龄组, 为45.6%;在26~35岁则快速下降至最低点20.3%;在36~45岁与46~55岁年龄组, 高危型HPV感染率分别为25.6%和26.2%, 差异无统计学意义(P > 0.05);而在>56岁年龄组, 高危型HPV感染率(34.4%)则呈上升趋势。

2.3 不同组别高危

HPV多重及单一感染情况(表 2)在高危型HPV感染病例中, 多重感染及单一感染率分别占40.7%和59.3%, 但差异无统计学意义(P > 0.05)。多重HPV感染以合并HPV-16的二重感染较为多见, 其中HPV 16/18、HPV16/58和HPV16/52最多。

表 2 不同组别女性高危HPV多重感染及单一感染分布

2.4 HPV基因型分布

在总体人群中, HPV-16感染率最高, 占15.8%(147/931);其他依次为:HPV-58 44例, 占4.7%; HPV-18 35例, 占3.8%;HPV-52 28例, 占3.0%; HPV-33 17例, 占1.8%;而在SCC组, HPV-16、HPV-18、HPV-58、HPV-52和HPV-33感染率最高, 分别为61.5%, 11.5%, 7.7%, 3.8%和3.8%。HPV-6和HPV-11分别检出31和34例, 在总体人群中分别占3.3%和3.7%。

3 讨论

调查结果表明, HPV感染在大同地区成年女性人群中较为普遍(39.7%), < 25岁的年轻女性最为易感。与国内平均水平比较, 无论在正常组(18.6%)还是SCC组(84.6%), 大同市成年女性的HPV感染率均明显偏高; 而与国内其他城市结果不一致〔10-13〕。

基因型分析结果显示, 无论是整体人群还是各个分组, HPV-16的感染率均明显高于其他基因型, 且以合并HPV-18、HPV-58和HPV-52的二重感染最为多见。HPV-18则不同, 从总体人群来看, HPV-18(9.5%)略低于HPV-58 (11.9%), 位居第3;而在SCC组, HPV-18高于HPV-58, 分别为11.5%和7.7%, 位居第2。因此, 在总体人群中, HPV -16、HPV-58、HPV-18、HPV-52和HPV-33感染率最高; 而在SCC组, 则HPV-16、HPV-18、HPV-58、HPV-52和HPV-33感染率最高, 与全国的抽查结果也存在差异〔14〕。

大同市成年女性的HPV感染状况和基因型分布具有明显的地域特征, 本次调查结果为制订HPV疫苗接种计划提供了流行病学资料。

参考文献
[1] 王喜英, 赵富玺, 燕杰, 等. FHIT基因杂合型丢失与宫颈癌的关系[J]. 中国公共卫生, 2007, 23(12) : 1490–1491.
[2] Cutts FT, Franceschi S, Goldie S, et al. Human papillomavirus and HPV vaccines: a review[J]. Bulletin of the World Health Organization, 2007, 85(9) : 719–726. DOI:10.2471/BLT.00.000000
[3] Zhang W Y, Xue YZ, Chen M, et al. Prevalence of high-risk human papillomavirus infection in different cervical lesion among organized health-examination women in Shanghai, China[J]. Chin Med J, 2008, 121(16) : 1578–1582.
[4] 郭俊成, 赵富玺, 崔克, 等. Cyclin E、p16 ink4、ki67的高度表达对宫颈癌高危人群筛查的意义[J]. 现代预防医学, 2005, 32(4) : 307–309.
[5] Aggarwal R, Gupta S, Nijhawan R, et al. Prevalence of high-risk human papillomavirus infections in women with benign cervical cytology: a hospital based study from North India[J]. Indian Journal of Cancer, 2006(43) : 3.
[6] Bae JH, Lee SJ, Kim CJ, et al. Human papillomavirus (HPV) type distribution in Korean women: a meta-analysis[J]. Microbiol Bio-technol, 2008, 18(4) : 788–794.
[7] 穆雅琴, 赵富玺, 郭俊成, 等. 宫颈癌凋亡抑制因子表达与HPV16/18感染的相关性[J]. 中国公共卫生, 2006, 22(12) : 1416–1418.
[8] Coutlee F, Rouleau D, Petignat P, et al. Enhanced detection and typing of human papillomavirus DNA in anogenital samples with PGMY primers and the Linear Array HPV genotyping test[J]. J Clin.Microbiol, 2006, 44(12) : 1998–2006.
[9] Mu YQ, Liu R, Zhao FX. Analyses of Bcl-2, survivin, and CD44v6 expressions and human papillomavirus infection in cervical carcinomas[J]. Scand J Infect Dis, 2007, 39(5) : 441–448. DOI:10.1080/00365540601105772
[10] Bao YP, Ni L. Human papillomavirus type distribution in women from A sia: a meta-analysis[J]. Int J Gynecol Cancer, 2008, 18(7) : 71–79.
[11] 张新, 王纯雁, 石菊芳, 等. 沈阳市妇女人乳头瘤病毒感染型别分布的研究[J]. 中华流行病学杂志, 2007, 28(10) : 954–957.
[12] Wang H, Qiao YL. Human papillomavirus type-distribution in the cervix of Chinese women: a meta-analysis[J]. Int J STD A I DS, 2008, 19(10) : 680–684. DOI:10.1258/ijsa.2008.008040
[13] Wu EQ, Zhang GN, Yu XH, et al. Evaluation of high-risk human papillomaviruses type distribution in cervical cancer in Sichuan province of China[J]. BMC Cancer, 2008, 8(3) : 202–208.
[14] Cai HB, Ding XH, Chen CC, et al. Prevalence of single and multiple human papillomavirus types in cervical cancer and precursor lesions in Hubei, China[J]. Oncology, 2009, 76(3) : 157–161. DOI:10.1159/000195885