霍乱是由O1群和(或) O 139群霍乱弧菌(VC)引起的甲类传染病，是以发病急、传播快、涉及范围广、能引起大流行为特征的国际检疫传染病之一。海南岛地处热带，雨量充沛，是霍乱的高发区。自1961年首次发生霍乱以来，已出现7次大流行。2008年6月和2008年10-11月，海南省北部和西部沿海地区先后发生2次霍乱暴发疫情。为了解海南省霍乱疫情分离菌株对抗生素的敏感性，为临床治疗和霍乱防治提供科学依据，收集了2次疫情中部分病例、带菌者及外环境采集的样本，分离到霍乱弧菌81株，进行了18种抗生素敏感性测定。现将结果报告如下。

分离菌株来源于海南省2008年6月-11月霍乱疫情病例、密切接触者和疫区外环境标本，共81株，全部为O1群霍乱弧菌，霍乱毒素(CT)基因检测均阳性。

样本由海南省疾病预防控制中心采样或由各市县疾病预防控制中心送检；对样本进行分离鉴定，半固体保存。(1)主要试剂与仪器:霍乱弧菌诊断血清(中国药品生物制品检定所)；四号琼脂(上海疾控华康科技开发公司)；营养肉汤、营养琼脂培养基(北京陆桥有限公司)，水解酪蛋白(M-H)琼脂、M-H肉汤培养基(英国OXOID公司)。VITEK 2比浊仪(法国生物梅里埃公司)；药敏纸片分配器(Disc Dis-penser 90mm，6孔，英国OXOID公司产品)。(2)药敏纸片与质控菌株: 18种药敏纸片(英国OXOID公司)；质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922(海南省人民医院检验科馈赠)。所有试剂、培养基、药敏纸片等均在有效期内使用。

采用WHO推荐的改良K-B纸片法。保存于半固体的菌株经肉汤增菌后分离四号平板，从平板挑取单个并经诊断血清复核的菌落接种M-H肉汤，培养4~6 h，用已校正的VITEK 2比浊仪配制相当于0.5麦氏单位的菌悬液；15 min内涂M-H平板，15 min内用药敏纸片分配器加纸片，15 min内置36 ℃培养箱中，培养16~18 h后测量抑菌环直径。每批试验同时以ATCC 25922大肠埃希菌做质控。结果判断按照2008年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)文件^〔1〕规定。其中强力霉素、多粘菌素B、红霉素、诺氟沙星按照《霍乱防治手册》(第5版) ^〔2〕判定。

2次疫情分离株的药敏结果敏感率比较采用χ²检验。

81株O 1群VC中，病例分离株71株，带菌者分离株4株，外环境分离株6株(3株疫区养殖水，2株病家地板水，1株厕所)；其中来自海口市46株；儋州市28株；临高县6株；定安县1株。

表 1

表 1 海南省2008年霍乱疫情分离菌株对18种抗生素敏感性试验结果

表 1 海南省2008年霍乱疫情分离菌株对18种抗生素敏感性试验结果

81株分离株对诺氟沙星、头孢噻肟、头孢噻吩均100%敏感；对庆大霉素、妥布霉素、氯霉素的敏感率分别为98.77%，95.06%，91.36%，对链霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑、多粘菌素B的耐药率均为100%；对四环素的耐药率为92.59%。

2008年6月份在海口市发生的一起疑似食源性霍乱暴发疫情中，分离到VC 6株，其中稻叶型5株(病例分离株3株，带菌者分离株1株，外环境厕所分离株1株)，小川型1株(病例分离株)；6株对四环素、强力霉素、头孢唑啉均100%敏感，对氯霉素100%中介，对环丙沙星、氨苄西林、卡那霉素均83.33%敏感。2008年10 -11月儋州市等地疫情中，分离到小川型VC 75株。75株菌对四环素100%耐药，对强力霉素98.67%中介，1.33%耐药，对氯霉素98.67%敏感，1.33%中介，对环丙沙星、氨苄西林、卡那霉素的敏感率分别为29.33%，28.00%，25.33%。2次疫情分离株的药敏结果敏感率比较，差异均有统计学意义(四环素、强力霉素、氯霉素、头孢唑啉均P < 0.01；环丙沙星、氨苄西林、卡那霉素均P < 0.05)。其中1株小川型对5种抗生素耐药，耐药谱:链霉素+复方新诺明+磺胺异恶唑+多粘菌素+强力霉素；1株小川型则高达9种抗生素耐药，其耐药谱:链霉素+复方新诺明+磺胺异恶唑+多粘菌素+氨苄西林+四环素+庆大霉素+妥布霉素+卡那霉素。

实验结果显示，海南省2008年2次霍乱疫情的霍乱弧菌分离株均为O1群，对诺氟沙星、头孢噻肟、头孢噻吩的敏感率100%，可作为今后霍乱病例和带菌者的治疗指导用药^〔3〕。链霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑和多粘菌素B的耐药率100%，不宜使用。四环素的耐药率为92.59%，也不宜使用。研究表明，诺氟沙星等喹诺酮类药物对未成年儿童发育有潜在危害，不宜常规用于各种小儿感染，禁止用于孕妇、哺乳期妇女^〔4〕。且CLSI^〔1〕指出，头孢噻吩可以代表头孢噻吩、头孢匹林、头孢拉定、头孢氨苄、头孢克罗和头孢羟氨苄。故儿童等可考虑使用头孢噻吩等有疗效的、安全的头孢类抗生素预防和治疗霍乱。

本文结果与海南省1998年埃尔托VC小川型分离株的药物敏感性^〔5〕比较，诺氟沙星仍然对所有分离菌株100%敏感，10年来未出现耐药菌株，与湖南省报告的一致^{〔3, 6〕}。但环丙沙星、强力霉素、卡那霉素的敏感率下降，链霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑、多粘菌素B的耐药率则上升到100%耐药；四环素由75%耐药上升98.68%(75/76)；1998年耐药抗生素6种，2008年上升到9种。提示小川型VC耐药率逐步增高，耐药谱增宽。过去对霍乱菌株敏感的药物，随着霍乱流行时间的延续，都不同程度地出现了耐药菌株^〔7〕。故应加强对霍乱流行菌株的耐药性监测，了解耐药谱的变化，以指导临床治疗和霍乱防治用药，提高疗效，减少耐药株的产生。

不同血清型的药敏结果显示，2008年6月份海口疫情的优势菌型主要是稻叶型VC，10月至11月儋州等地疫情的优势菌型是小川型VC，提示在优势菌型变迁时应及早进行抗生素敏感性试验，选择合适抗生素，这对霍乱病人及带菌者及时治疗，缩短病情，中断传播途径，控制疫情等均有重要的指导意义。且多重耐药株的产生与扩散，将大大降低药物疗效及联合用药的价值^〔8〕。因此，应不断加强霍乱弧菌的耐药监测。