中国公共卫生  2009, Vol. 25 Issue (9): 1053-1054   PDF    
引用本文
尹琴, 常福厚, 王敏杰, 刘素珍, 孙芳, 齐君. 蒙古族与汉族学生CYP1A1基因多态性比较[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(9): 1053-1054.
YIN Qin, CHANG Fu-hou, WANG Min-jie, et al. Polymorphisms of CYp1a1 genes in Mongolian and Han students[J]. Chinese Journal of Public Health, 2009, 25(9): 1053-1054.
蒙古族与汉族学生CYP1A1基因多态性比较
尹琴1, 常福厚1, 王敏杰1, 刘素珍2, 孙芳2, 齐君1     
1. 内蒙古医学院药学院药理教研究, 呼和浩特 010059;
2. 呼和浩特回民医院
收稿日期: 2008-12-19
基金项目: 国家自然科学基金(30660214);内蒙古自然科学基金(200607010907);内蒙古医学院博士启动基金(2005BQ001)
作者简介: 尹琴(1971-), 女, 回族, 内蒙古包头人, 副主任药师, 硕士在读, 研究方向:生化与分子药理学。
通讯作者: 常福厚
摘要: 目的 比较蒙古族与汉族学生细胞色素P4501A (CYP1A1)基因Msp I限制性片段的多态性. 方法 选取内蒙古地区蒙古族和汉族学生各60人, 采用PCR-RELP技术进行基因多态性分析. 结果 内蒙古地区蒙古族和汉族学生CYP1A1基因野生型纯合子(wt/wt)、杂合子(vt/vt)3种基因型的频率分别为33.3%, 48.3%, 18.3%和35.0%, 51.7%, 13.3%, 基因型频率分布差异统计学意义(P > 0.05). 结论 内蒙古地区蒙古族与汉族学生Msp I限制性片段的多态性差异无统计学意义.
关键词： 细胞色素氧化酶P4501A1     基因多态性     蒙古族    
Polymorphisms of CYp1a1 genes in Mongolian and Han students
YIN Qin, CHANG Fu-hou, WANG Min-jie, et al     
Department of Pharmacology, School of Pharmaceutics, Inner Mongolia Medical College, Hohhot 010059, China
Abstract: Objective To compare the Msp I genotype polymorphisms of cytochrome P4501A1(CYP1A1) gene between Mongolian and Han studengts. Methods The genotype polymorphisms was analyzed by PCR-restriction fragment length polymorphisms (RELP) of the CYP1A1 gene with the restriction enzyme Msp I in 60 Mongolian and 60 Han students. Results CYP1A1 genotype frequencies were 33.3% for homozgous wild-type (wt/wt), 48.3% for heterozygote (wt/wt), and 18.3% for homozygous variant (vt/vt) in the Mongolian students.Among the Han students, the frequencies of homozygous for wild-type (wt/wt), heterzygote (wt/wt) and homozygous variant (vt/vt) of CYP1A1 were 35.0%, 51.7% and 13.3%, respectively.Chi-square tests showed no significant difference between the two groups (P>0.05). Conclusion The CYP1A1 genotype frequencies in the Mongolian and Han students of Inner Mongolia showed no statisical difference.
Key words: cytochrome P4501A1     gene polymorphism     Mongolian    

细胞色素氧化酶是一组结构和功能相关的超家族基因编码的同工酶。其中主要有细胞色素P450(CYP)1~3等3个家族酶系在体内参与外源性物质转化, 并且参与药物代谢。目前以现, 越来越多的药物CYP1A1(Cytochrome P4501A)催化代谢, 而且CYP1A还与许多前癌物的代谢活化、引起早期生物学反因Msp I多态性进行了研究〔4-5〕。为了解内蒙古族与汉族人群CYP1A1基因Msp I多态性的差别, 为进一步研究细胞色素P450基因多态性提供基础依据, 本研究选择内蒙古地区的蒙古族和汉族进行了观察比较。结果报告如下。

1 对象与方法 1.1 对象

在内蒙古医学院附属医院和呼和浩特回民医院随机选取健康体检的蒙古族学生和汉族学生各60名, 男女各半, 年龄(20±2)岁; 家系中近3代人中无与其他民族通婚史、身体健康、自愿参另检测。

1.2 方法 1.2.1 试剂与仪器

血液基因组DNA提取试盒(北京天为时代公司); Msp I限制性内切酶(洛阳美生物工程公司); 无水乙醇、三羟甲烷(Tris碱)等其他试剂均为国产分析纯。PCR扩增仪(GeneAmp PCR System 2400, PERKIN ELMER, Singapore), 凝胶成像仪(Alpha Imager TM 2200, Line china)等。

1.2.2 DNA提取及引物设计合成

DNA提取按试剂盒说明方法, -20 ℃冷冻保存备用。引物设计与合成: CYP1A1引物通过美国立卫生研究院网站(http://www.ncbi.nih.gov)获得CYP1A1全基因序列, 采用引物5(Primer 5)软件设计引物。上游引物5'-GGTAGAGTTCTGACCACAATG-3', 下游引物5'-CACTCGTCTAAATACACCC-3', 由上海生工生物工程技术服务必有限公司合成, 扩增产物大小为598 bp。

1.2.3 PCR反应 反应条件

反应总体积25 μL, 含0.2 mmol/L dNTP, 2种引物各10 pmol, 0.06 μg DNA, 1.5 U Taq DNA聚合酶。扩增参数: 94 ℃预变性5 min, 然后94 ℃变性1 min, 50 ℃复性1 min, 72 ℃延伸50 s, 35个循环后72 ℃延伸10 min。PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳, 电压10 V/cm, 电压10 V/cm, 电泳1 h, 浸入0.5 μg/mL的溴化乙啶溶液中30 min, 在Alpha Imager TM 2200凝胶成像仪下观察。

1.2.4 Msp I限制性内切酶酶切反应

取10 μL PCR产物, 加10 U Msp I限性内切酶, 37 ℃水浴4 h, 酶切产物经2%琼糖凝胶电泳后, 电压10 V/cm, 电泳1 h, 浸入0.5 μg/mL的溴化乙啶溶液中30 min, 用清水漂洗, 在A1pha Imager TM 2200凝胶像仪下观察摄像。

1.2.5 CYP1A1 Msp I多态性分析

扩增产物经酶切后分为种基因型:野生型(wt/wt)特征598 bp1个片段, 杂合型(wt/wt)特征为598, 389, 209 bp3个片段, 突变型(vt/vt)特征为389, 209 bp2个片段。

1.3 统计分析

采用SPSS 12.0软件进行分析, 用χ2检验比较蒙古族学生组和汉族学生之间Msp I限制性片段多态性基因频率的差异。

2 结果 2.1 蒙古族和汉族学生CYP1A1基因PCR产物对比(图 1)
注:M: Marker; 1, 3:蒙古族学生; 2, 4:汉族学生。 图 1 蒙古族和汉族学生CYP1A1基因PCR产物对比

2.2 CYP1A1 PCR产物Msp I酶切片段(图 2)
注: 1:野生型纯合子(wt/wt); 2:杂合子(wt/wt); 3:突变型纯合子(vt/vt); M: Marker。 图 2 CYP1A1 PCR产物Msp I酶切电泳

2.3 蒙古族与汉族学生CYP1A1 Msp I多态性基因型分布比较(表 1)
表 1 蒙古族学生与汉族学生CYP1A1 Msp I多态性基因型频率(%)比较

CYP1A1 Msp I多态性基因型检测结果显示, 内蒙古地区蒙古族学生CYP1A1 Msp I多态性基因型分布情况与汉族学生比较差异无统计学意义(P > 0.05)。

3 讨论

CYP1A1基因Msp I的多态性与肺癌的易感性可能存在一定的关系〔2, 4〕, 而CYP1A1多态性在各地区和民族间也不尽相同〔6-8〕。对正常人基因型分布的研究, 可以作为基因多态性的关系, 首先要明确蒙古和汉族间是否存在CYP1A1基因多态性之间的差异, 18~22岁的学生人群大都身体健康, 主要来自于内蒙古大草原, 血样易得, 个人及家史资料采集方便而且在研究中容易配合, 所以选择该人群进行比较研究。本研究结果显示, 内蒙古地区蒙古族学生与汉族学生CYP1A1基因型比较差异无统计学意义(分别χ2=0.000, P=1.0;χ2=0.880, P=0.664)。可初步推断CYP1A1基因在蒙古族和汉族中的多态性无明显差异。但本实验中抽取的样本数较小, 实验结果可能存在一定的偏差, 今后尚需扩大样本量做进一步研究。

参考文献
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