霍乱是由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，具有发病急、传播快、流行范围广等特征，是国际检疫的甲类传染病之一^〔1〕。目前, 一些快速检测霍乱弧菌的方法相继出现，但大多技术条件要求高、设备比较昂贵，难以在基层中推广^〔2〕。胶体金法是目前国内外应用的一种快速诊断方法, 在许多项目的应用取得了较为理想的效果^〔3〕。胶体金法特异性高、灵敏度好、有检测快速、操作简单等优点，不仅能检测活菌, 还能检测死菌。本研究采用胶体金法快速检测O1群霍乱弧菌，并与常规培养法结果进行对比分析, 探讨其应用价值。结果报告如下。

(1)样本：来源于海南省海口市收集的疑似霍乱患者的粪便和肛拭子标本700人份，共检出O1群霍乱弧菌105株，阳性菌种按规定时限上送至海口市疾病预防控制中心确诊, 并经鉴定证实; 其余595份分离培养均为阴性。(2)试剂与培养基：碱性蛋白胨水、TCBS琼脂和4号琼脂(杭州微生物试剂厂)，均按说明书由本实验室配制。霍乱弧菌O1群多价诊断血清及单价诊断血清(中国检定检疫所)，在有效期内使用。O1群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)[北京庄笛浩禾(DIHO)生物医学科技有限公司], 在有效期内使用。

以霍乱弧菌常规培养法为对照, 对700份样本同时进行分离培养鉴定实验和胶体金法检测。(1)霍乱弧菌分离培养和血清鉴定：细菌分离培养和血清鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》进行操作^〔4〕，以分离培养、血清鉴定出O1群霍乱弧菌为主要依据。(2)胶体金法检测：粪便和肛拭子标本先用碱性蛋白胨水35 ℃增菌6 h后，按照O1群霍乱弧菌检测试剂盒说明书操作。

应用SPSS 11.0软件进行统计分析及χ²检验。

表 1

表 1 胶体金法试验诊断霍乱结果与常规培养法比较

表 1 胶体金法试验诊断霍乱结果与常规培养法比较

表 1结果可见, 700份样本中，常规法培养出O1群霍乱弧菌105株，胶体金法试验阳性108株。经χ²检验，胶体金法检测O1群霍乱弧菌与常规培养法检测结果之间差异无统计学意义(χ²=0.24，P > 0.05)。关联性分析结果表明，2种方法所得结果之间具有很好的相关性(χ²=574.59, P < 0.01)。

(1)用胶体金试剂盒中的稀释液对20株O1群霍乱弧菌进行霍乱弧菌终浓度(CFU/mL)：10⁸，10⁷，10⁶，10⁵，10⁴，10³，10²，10¹等不同浓度的稀释，胶体金法最低检测限性试验结果为10⁵ CFU/mL。(2)试验阴性的菌液用碱性蛋白胨水35 ℃增菌6 h后，再用胶体金法检测。原浓度增菌后，霍乱弧菌终浓度(CFU/mL)为10⁴，10³，10²，10¹，胶体金法检测结果显示，前3种浓度为阳性，第4种浓度为阴性。

(1)灵敏度和特异性：灵敏度=98/(98+7)×100%=93.33%;特异性=585/(10+585)×100%=98.32%。(2)假阳性率与假阴性率：假阳性率=10/(10+585)×100%=1.68%;假阴性率=7/(98+7)×100%=6.67%。(3)预测值：阳性预测值=[98/(98+10)]×100%=90.74%;阴性预测值=[585/(7+585)]×100%=97.18%。(4)诊断效率：诊断效率=(98+585) /(98+10+7+585)×100%=97.57%。结果表明，胶体金法诊断霍乱的灵敏度和特异性较高, 假阳性与假阴性较小。

霍乱弧菌传统常规培养方法的灵敏度及特异性较高^〔5〕。本研究以常规培养法为标准，对胶体金诊断试验进行评价。结果表明，胶体金法检测O1群霍乱弧菌与常规培养法检测结果的差异无统计学意义，各项诊断试验评价指标计算结果与李少彤^〔6〕和冯景强^〔3〕报道相近。可以看出, 胶体金法诊断试验的特异性高, 灵敏度好, 假阳性率仅为1.68%。经分析发现, 这10份假阳性标本均来自已经确诊为霍乱并正在接受治疗中的霍乱患者，造成假阳性的原因可能为粪便中存在大量死亡霍乱弧菌所致。

胶体金法最低检测限性试验结果显示，胶体金法最低检出量为10⁵CFU/mL，与文献^{〔5, 6〕}报道一致; 增菌后，再用胶体金法检测。结果表明，终浓度为10⁴，10³，10² CFU/mL检测为阳性，而10¹ CFU/mL检测为阴性。提示对每份检测标本进行增菌后再用胶体金法检测，可有效地避免漏检，较好地提高检测的灵敏度。直接用粪便或肛拭子检测因其细菌含量较低容易造成漏检。

本研究结果表明，胶体金法特异性高、灵敏度好、操作简便、报告速度快(操作仅用10 min，能在6 h得出结果)，而常规培养法要用30 h才能得出初步报告。提示胶体金法在快速筛查O1群霍乱弧菌工作中具有一定应用价值。但胶体金法本身不能得到病原菌，无法进行血清分型、分子生物学检测和流行病学资料分析等，因此, 尚不能代替常规培养法，可做为辅助诊断方法。