蓝萼香茶菜[Isodon japonica (Burm.f.) Hara var.glaucocalyx (Maxim.) Hara]为唇形科香茶菜属植物〔1〕,具有保护心肌〔2〕、抗血小板凝聚〔3〕、健胃、清热解毒、活血、抗菌消炎和抗癌〔4〕作用。蓝萼香茶菜中的蓝萼甲素对血小板聚集具有一定的影响,10,100 μmol/L可明显升高兔血小板内细胞内环磷酸腺苷(cAMP)水平,与Imazodan (10 μmol/L)合用时蓝萼甲素1~100 μmol/L明显升高cAMP水平,而与前列腺素(PGE,50 mmol/L)合用时,对细胞内cAMP水平无明显影响〔5〕,其在10 mL/kg即可有明显增加86铷(Rb)的吸收作用。为进一步了解蓝萼香茶菜提取物的抗心肌缺血作用,对蓝萼香茶菜总二萜进行提取分离,并研究蓝萼香茶菜总二萜对心肌营养性血流量的影响。
1 材料与方法 1.1 实验动物昆明种小白鼠,雌雄各半,18~22 g,共50只(沈阳市双义动物研究所)。动物合格证号:0033041。
1.2 主要试剂与仪器蓝萼香茶菜:2008年8月采自辽宁省鞍山市千山风景区,置阴凉处阴干。注射用丹参(冻干)(哈药集团中药二厂),批号:Z10970093;高锝酸钠注射液(99mMo-99mTc发生器)(成都中核高通同位素股份有限公),批号:Tc99m-2008-11-01;乙醇、乙酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司)。FT-613自动计算125 I放免测量仪(北京核仪器厂)。
1.3 方法 1.3.1 样品提取并分离蓝萼香茶菜在通风处阴干,准确称取该植物干叶180 g,加入70%乙醇溶液浸泡12 h,使乙醇浸没过药物,冷凝回流提取24 h,之后用化学方法提取得到蓝萼香茶菜总二萜,真空干燥后准确称重为7.298 4 g。
1.3.2 蓝萼香茶菜总二萜溶液的配制根据预实验的剂量筛选,配制蓝萼香茶菜总二萜溶液的浓度为7.8 mg/mL,相当于生药80 g/kg,为高剂量,之后分别稀释为中剂量(相当于生药40 g/kg)和低剂量(相当于生药20 g/kg)。
1.3.3 阳性药物注射用丹参的配制根据文献〔6〕选择阳性药物丹参的浓度为50 mg/mL,注射用丹参规格为400 mg/每支,溶于8 mL生理盐水。
1.3.4 同位素溶液的配置小鼠尾静脉注射高锝酸钠注射液开始前5 min,将其稀释成所需要的浓度为60 μCi/mL溶液,之后每隔10 min重新配制锝溶液1次,备用。
1.3.5 实验分组及处理实验前一天,依次称量小鼠体重,选择体重18~22 g的小鼠,然后按随机和体重均等分配的原则,将50只小鼠分别分为空白对照组(给予生理盐水)、阳性对照组(注射用丹参)、蓝萼香茶菜高剂量组(相当于每千克体重生药80 g)、中剂量组(相当于每千克体重生药40 g)、低剂量组(相当于每千克体重生药20 g),每组10只,雌雄各5只。实验开始时,空白对照组给予生理盐水腹腔注射;阳性药对照组给予丹参注射液腹腔注射,其余各组给予高低不同剂量的蓝萼香茶菜总二萜溶液腹腔注射,给药剂量均为每只10 g小鼠0.1 mL/(10g·bw)。小鼠腹腔注射药物25 min后,于尾静脉注射同位素高锝酸钠注射液,5 min后断头处死,取出心脏,纵横切开,用0.5 mL生理盐水将血液冲净,再用干燥滤纸吸干水后装入小试管,然后用FT-613自动计算125I放免测量仪测量每个心脏30 s的脉冲计数(CPM),测量3次,取平均值,再用电子天平测量心脏重量,计算出每克心脏的CPM,然后用下述公式计算营养血流量增加率〔7〕:同位素锝的相对摄取率(%)=(给药组CPM/g心脏-空白组CPM/g心脏)/空白组CPM/g心脏CPM×100%。
2 结果蓝萼香茶菜总二萜成分明显增加小鼠营养性心肌血流量。通过计算同位素锝的相对摄取率,其中蓝萼香茶菜总二萜高、中、低剂量组分别为81.00%,48.86%,45.63%;阳性对照组为56.92%;与空白对照组比较,高、中、低剂量组差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01);与阳性对照组比较,高剂量组差异无统计学意义,中剂量组和低剂量组差异有统计学意义(表 1)。
| 表 1 不同组别小鼠心脏脉冲计数(CPM)与相对摄取率% |
3 讨论
近年来,对心肌缺血的治疗研究进展较快,已经从传统的对症治疗模式转化为现在的积极进取型再灌注疗法,对改善心肌缺血的预后起到重要作用〔8〕。
研究结果表明,蓝萼香茶菜总二萜成分经腹腔注射后,能明显提高正常小鼠心肌营养性血流量,高剂量组明显优于阳性对照组。丹参是经典的抗心肌缺血药物,长期以来其疗效已被广泛认可〔6〕。同位素示踪法常用于药物吸收、代谢等有关实验研究,而有关蓝萼香茶菜的同位素标记法报道较少。本实验结果显示,以同位素示踪法考察蓝萼香茶菜对小鼠心肌血流量的影响是可行的。心肌缺血的最根本防治措施仍是改善血供,降低氧耗,通过清除或对抗有害物质对心肌的不良影响以保护心肌。本实验结果表明,低剂量的蓝萼香茶菜总二萜能明显提高正常小鼠心肌营养性血流量,提示蓝萼香茶菜总二萜能明显增加小鼠心肌血流量,其作用机制有待进一步探讨。
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2009, Vol. 25
